环指蛋白128通过稳定轴抑制蛋白1抑制胃癌发生发展的机制

目的:探讨环指蛋白128(RNF128)通过轴抑制蛋白1(Axin1)抑制胃癌发生发展的具体作用机制。方法:查询Kmplot数据库并分析RNF128表达高低与胃癌患者总生存期、首次进展生存期、无进展生存期的关系;选取胃癌SGC7901细胞系,利用小干扰RNA敲低RNF128蛋白表达水平,分为3组:对照组(Control),siRNF128#1组和siRNF128#2组,通过平板克隆实验、细胞计数试剂盒(CCK-8)实验、Transwell实验检测RNF128对胃癌细胞的增殖、迁移能力的作用。蛋白质印迹法(Western blot)和q-PCR检测RNF128对Wnt通路Axin1蛋白及其下游靶基因表达的作用。免疫共沉淀检测RNF128和Axin1是否存在相互作用。泛素化实验检测RNF128对Axin1蛋白泛素化水平高低的影响。两实验组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果:RNF128低表达的胃癌患者OS总生存期、首次进展生存期、无进展生存期低于RNF128高表达患者(P<0.01)。siRNF128#1组和siRNF128#2组胃癌细胞的增殖能力高于对照组(siRNF128#1:6.758±0.321比1.000±0.079,t=16.071,P<0.05;siRNF128#2:7.298±0.398比1.000±0.060,t=14.327,P<0.05),siRNF128#1组和siRNF128#2组胃癌细胞的迁移能力高于对照组(siRNF128#1:164.194±19.480比70.251±3.073,t=10.652,P<0.05;siRNF128#2:178.672±11.323比69.755±5.616,t=19.269,P<0.05)。Western blot结果显示,siRNF128#1组和siRNF128#2组胃癌细胞的Axin1表达水平低于对照组(siRNF128#1:0.526±0.058比1.000±0.110,t=8.519,P<0.05;siRNF128#2:0.464±0.087比1.000±0.117,t=8.196,P<0.05)。Co-IP实验证实RNF128与Axin1蛋白存在相互作用,RNF128可抑制Axin1蛋白的泛素化水平。结论:RNF128通过泛素化稳定Axin1蛋白抑制胃癌的发生发展。