人着丝粒蛋白E在人肾透明细胞癌中的表达及对细胞增殖的影响

目的:探讨人着丝粒蛋白E(CENPE)在人肾透明细胞癌组织中的表达、临床意义及对细胞增殖的影响。方法:生物信息学分析GEPIA数据库中CENPE在肾透明细胞癌组织及癌旁组织中的mRNA水平,并分析其表达与患者预后之间的关系。回顾性分析来自新乡市中心医院2014年9月—2021年8月接受手术治疗的77例肾透明细胞癌患者的临床病理资料。采用免疫组化法检测肾透明细胞癌组织和癌旁组织中CENPE蛋白表达水平,分析其与患者临床病理特征的关系。培养HTB-47和CRL-1932细胞,通过CENPE的shRNA质粒转染降低其表达,通过集落形成实验及CCK-8实验检测对肾透明细胞癌细胞增殖的影响。结果:生物信息学分析显示肾透明细胞癌患者CENPE显著高表达,并与无病生存期显著相关。免疫组化结果显示CENPE在肾透明细胞癌组织中显著高表达,而在癌旁组织中则为阴性或低表达,表达水平与肿瘤直径显著相关(P=0.021),而与患者的年龄、性别、肿瘤分化无关(均P>0.05)。集落形成实验(P=0.013 5、0.015 4)及CCK-8实验(P=0.009 1、0.013 3)证实CENPE在细胞表达下调并可以抑制肾透明细胞癌细胞的增殖。结论:肾透明细胞癌组织中CENPE显著高表达,且与患者临床病理特征及预后相关,CENPE蛋白促进肾透明细胞癌细胞的增殖。

基于网络药理学研究茵陈治疗良性前列腺增生症的作用机制

目的:探索使用网络药理学方法和动物实验研究中药茵陈治疗良性前列腺增生症(BPH)的作用机制。方法:通过TCMSP数据库筛选出茵陈有效成分及其靶点,经uniprot统一靶点简写;GeneCards、OMIM及GisGeNET数据库在线检索BPH的疾病靶点。在venny 2.1网站筛选出交集靶点并将交集靶点在线做“蛋白-蛋白”网络分析和GO、京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析。使用Cytoscape制作“成分-靶点-通路”网络图。建立BPH大鼠模型,使用茵陈药液灌胃治疗,采用酶联免疫方法检测靶蛋白表达。结果:茵陈中有12个有效成分,这些有效成分通过干预67个靶点调节多个分子通路,从而治疗BPH。槲皮素、茵陈色酮、β-谷甾醇、芫花素、茵陈黄酮、异鼠李素等是核心成分,肿瘤蛋白p53(TP53)、丝/苏氨酸蛋白激酶(AKT)1、表皮生长因子受体(EGFR)、JUN、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF)、血管内皮生长因子A(VEGFA)是核心靶点。GO分析结果显示,生物过程主要涉及细胞对激素反应和对脂质的反应等,细胞组分包含转录调节复合物、膜筏、质膜筏等,分子功能包含DNA结合转录因子结合、核受体活性和激酶调节活性等。KEGG分析结果显示磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)-AKT、缺氧诱导因子-1(HIF-1)、IL-17、TNF、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、EGFR、P53等信号通路与茵陈治疗BPH相关。动物实验结果显示,经茵陈治疗后前列腺重量减轻,血清TP53蛋白表达增加,血清AKT1、EGFR、JUN、IL-6、TNF、VEGFA等蛋白表达减少(均P<0.0001)。结论:茵陈作为治疗BPH的中药可以通过多种通路参与调控疾病靶点,具有良好的治疗效果和广泛的作用机制。

DIAPH3对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制

背景与目的:胃癌是消化系统常见的恶性肿瘤之一,但其发病机制尚不清楚。Diaphanous相关成蛋白3(diaphanous-related formin 3,DIAPH3)对多种肿瘤的发生、发展具有重要作用,但其在胃癌中的作用未见报道。探讨DIAPH3在胃癌组织中的表达及其对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法:利用基因表达谱分析(gene expression profiling interactive analysis,GEPIA)数据库在线分析DIAPH3在胃癌组织中的表达;收集2020年1月—2020年12月年新乡医学院第四临床学院病理科保存的62例胃癌患者的石蜡包埋组织及配对癌旁组织标本,采用免疫组织化学染色方法检测胃癌组织中DIAPH3的表达,并进行临床病理学相关性分析;采用蛋白质印迹法(Western blot)检测敲低或过表达DIAPH3后对DIAPH3、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)及N-钙黏蛋白(N-cadherin)蛋白质水平的变化。采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测敲低或过表达DIAPH3后对DIAPH3转录水平表达的影响。利用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)实验检测细胞增殖;利用划痕愈合实验检测细胞迁移;利用transwell小室实验检测细胞侵袭。结果:GEPIA数据库在线分析显示,与胃癌癌旁组织相比,DIAPH3 mRNA在胃癌组织中表达升高(P<0.05);胃癌组织中DIAPH3的阳性表达率为70.97%(44/62),高于胃癌癌旁组织16.13%(10/62),差异有统计学意义(P<0.01);与高中分化组比较,低分化组DIAPH3表达升高(P<0.05);与无淋巴结转移组相比,有淋巴结转移组DIAPH3表达升高(P<0.05)。干扰DIAPH3组细胞增殖活力、细胞迁移率和细胞侵袭数均低于阴性对照组(P<0.05);过表达DIAPH3组细胞增殖活力、细胞迁移率和细胞侵袭数均高于过表达对照组(P<0.05)。过表达DIAPH3后干扰cyclin D1,胃癌细胞株的增殖活力低于过表达DIAPH3组,高于过表达对照组(P<0.05)。过表达DIAPH3后干扰vimentin,胃癌细胞株的细胞迁移率和细胞侵袭数低于过表达DIAPH3组,高于过表达对照组(P<0.05)。与干扰对照组相比,干扰DIAPH3组E-cadherin蛋白质表达增加,DIAPH3、cyclin D1、vimentin和N-cadherin蛋白质表达降低(P<0.05);与过表达对照组相比,过表达DIAPH3组中E-cadherin蛋白质表达降低,DIAPH3、cyclin D1、vimentin和N-cadherin蛋白质表达增加(P<0.05)。在敲低或过表达DIAPH3胃癌细胞株中,DIAPH3在mRNA水平均显著降低或升高(P<0.05)。结论:DIAPH3可促进胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭,其作用与上调cyclin D1、促进上皮-间充质转化有关。

母体胚胎亮氨酸拉链激酶在肾透明细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨母体胚胎亮氨酸拉链激酶(MELK)在肾透明细胞癌中的表达以及与肾透明细胞癌患者临床病理特征的关系,并评估其对肾透明细胞癌细胞增殖的影响。方法从基因表达交互分析(GEPIA)在线数据库获得MELK在肾透明细胞癌中的表达情况以及与患者总生存期的关系。应用新乡市中心医院77例肾透明细胞癌患者的标本,通过免疫组化进一步证实,并分析MELK的表达情况与患者临床病理特征的关系。通过克隆形成实验和CCK-8实验探究MELK对肾透明细胞癌细胞增殖的影响。结果通过GEPIA数据库分析,MELK在肾透明细胞癌中呈明显高表达,高表达患者的总生存期明显降低。结合临床病理特征分析发现,MELK表达与肾透明细胞癌肿瘤直径具有相关性(P<0.05),与患者年龄、性别、肿瘤分化程度均无相关性。克隆形成实验和CCK-8实验表明MELK表达均促进了肾透明细胞癌细胞增殖(均P<0.05)。结论MELK能促进肾透明细胞癌细胞的增殖,可为其治疗提供一种新的治疗策略。

基于网络药理学及实验验证探讨雷公藤治疗肾癌的作用机制

目的采用网络药理学和实验验证的方法探索雷公藤治疗肾癌的作用机制。方法利用中药系统药理学(TCMSP)数据库与分析平台筛选雷公藤的有效成分,并通过Swiss数据库预测雷公藤的靶点。自DisGeNET、GeneCards和OMIM数据库收集肾癌相关靶点,并通过Venny 2.1.0获得交集靶点。使用STRING数据库和Cytoscape软件绘制蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络,并进行基因本体(GO)及京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析。通过Cytoscape软件构建"成分-靶点-通路"网络。诱导肾癌皮下移植瘤模型,将裸鼠随机分为对照组和治疗组,每组5只,治疗组灌胃615 mg/ml雷公藤溶液(将1 845 mg雷公藤颗粒溶于3 ml水)2.46 g/kg,10 μl/次,1次/d,共给药21 d;对照组灌胃等量生理盐水。每5天测量1次肿瘤体积,并采用酶联免疫法检测丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(AKT1)、信号转导子与转录激活子3(STAT3)、肿瘤坏死因子(TNF)、T肿瘤蛋白p53(TP53)、JUN、丝裂原激活蛋白激酶8(MAPK8)和MAPK14表达情况。结果筛选出雷公藤有效药物成分28个,潜在靶点117个。识别出13 425个相关疾病靶点,最后获得113个药物和疾病交集靶点。在PPI网络中,AKT1、STAT3、TNF、TP53、JUN、MAPK8和MAPK14是核心靶点。GO分析显示BP主要包括核受体活性、配体激活的转录因子活性、RNA聚合酶特异性DNA结合转录因子结合、核类固醇受体活性、肾上腺素能受体活性等;CC主要包括对激素的反应、细胞对脂质的反应、积极调节细胞迁移、对TNF的反应、炎症反应、细胞对激素刺激的反应、对缺氧的反应、对金属离子的反应等;MF涉及膜筏、膜微区、质膜的外侧、膜侧、质膜筏、突触前膜、小窝、转录调控复合体、突触后膜、突触膜等。KEGG分析显示雷公藤治疗肾癌涉及脂质和动脉粥样硬化、晚期糖基化终末产物-晚期糖基化终末产物受体(AGE-RAGE)、TNF、Toll样受体、磷脂酰肌醇3-激酶-蛋白激酶B(PI3K-Akt)和MAPK等信号通路。实验验证结果显示雷公藤治疗后肿瘤体积减小(P<0.05),TP53蛋白表达增加(P<0.001),AKT1、STAT3、TNF、JUN、MAPK8和MAPK14蛋白表达均降低(均P<0.001)。结论预测了雷公藤治疗肾癌的靶点及信号通路,为进一步研究其保护机制及临床应用提供参考依据。

Rab8a在结直肠癌中的表达及其对癌细胞增殖、迁移的影响

Rab8a是Ras小GTPase超家族成员之一,研究显示其在子宫内膜癌及肝细胞癌中发挥重要作用。而关于Rab8a在结直肠癌(colorectal cancer,CRC)中的表达及功能目前尚不清楚。该研究首先利用GEPIA数据库分析Rab8a在包括结、直肠腺癌在内的多种临床常见恶性肿瘤中的表达情况,发现Rab8a在包括结、直肠腺癌在内的多种肿瘤组织中表达上调;实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)、Western blot及免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)检测结果显示:Rab8a在结直肠癌细胞和组织中高表达,且其表达与肿瘤分化等相关临床病理参数相关;一系列的体外功能实验结果显示,Rab8a的外源性过表达可以促进结直肠癌细胞的增殖和迁移,而干扰其表达可以抑制结直肠癌细胞的增殖和迁移;荧光显微镜观察、Western blot及TOP/FOP-Flash报告基因实验结果显示,Rab8a的过表达可以诱导结直肠癌细胞的上皮–间质细胞转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)并增强细胞内Wnt/β-catenin信号通路活性。总之,该研究证实了Rab8a在结直肠癌中表达上调,并可能通过激活Wnt/β-catenin信号通路诱导肿瘤细胞发生EMT进而促进其增殖和迁移。