黄连和枸杞子对抗精神病药奥氮平引起胰岛素抵抗的干预研究

目的:针对抗精神病药奥氮平引起的胰岛素抵抗不良反应,探讨常用中药黄连、枸杞子的保护作用和可能机制。方法:采用长期服用奥氮平构建的大鼠胰岛素抵抗模型,评价黄连、枸杞子对胰岛素抵抗和相关炎症因子的干预作用。结果:黄连和枸杞子均可显著降低奥氮平引起的胰岛素抵抗指数(P<0.05),并可显著降低模型鼠血浆中炎症因子IL-1 β,IL-6和TNF-α的水平(P<0.05);蛋白印迹实验还证实黄连和枸杞子改善胰岛素抵抗的作用表现为显著降低脂肪组织中NF-κB的表达量,以及降低胰岛素抵抗相关蛋白脂肪酸转运酶(Fatty acid translocase,FAT)、蛋白质酪氨酸磷酸酶-1B(Protein tyrosine phosphatase-1B,PTP-1B)、香叶基香叶基焦磷酸合成酶(Geranylgeranyldiphosphate synthase,GGPPS)、G蛋白偶联受体激酶2(G protein-coupled receptor kinase 2,GRK2)、甘油三酯脂肪酶(Adipose triacylglyceride lipase,ATGL)的表达水平。结论:黄连和枸杞子可以通过降低胰岛素水平、炎症因子和胰岛素抵抗相关蛋白,来改善奥氮平引起的胰岛素抵抗,对于预防或降低奥氮平不良反应具有良好的应用前景。

利用Cre-loxP系统研究细胞间mRNA的传递

目的利用Cre-loxP重组酶系统研究mRNA在细胞间传递过程及意义。方法构建和筛选稳定表达Cre重组酶的供体细胞及稳定表达loxP-DsRed-loxP-eGFP的受体细胞。将供、受体细胞共培养或在Transwell^TM中共培养,设置单独受体细胞组为对照,72 h后观察统计各组受体细胞eGFP阳性率,利用细胞免疫荧光细胞染色检测eGFP阳性细胞中Cre表达情况,并探讨供体细胞死亡、细胞膜纳米管、Rho相关激酶(ROCK)信号通路对Cre mRNA传递的影响。结果将供、受体细胞共培养72 h后发现,共培养组eGFP为阳性,单独受体细胞组、Transwell^TM共培养组eGFP均为阴性,表明细胞接触可以介导Cre mRNA传递,免疫荧光染色结果显示Cre蛋白可在受体细胞中翻译和入核。此外,Cre mRNA的传递主要通过活细胞,而膜纳米管及ROCK信号通路抑制剂可部分阻滞该过程。结论mRNA可以通过细胞间接触在活细胞中传递,进入受体细胞后还可翻译成蛋白质发挥生物学功能。

槲皮素治疗联合运动训练对脑卒中后大鼠抑郁样行为影响的研究

目的:探讨槲皮素治疗联合运动训练对脑卒中模型大鼠抑郁样行为的治疗作用。方法:将50只大鼠随机分为假手术组(sham)、卒中抑郁组(PSD)、槲皮素组(QUE)、运动组(EXE)和槲皮素+运动组(QUE+EXE)。通过大脑中动脉闭塞(MCAO)技术制备大鼠卒中后抑郁模型。通过悬尾实验(TST)和糖水偏爱实验(SPT)来评估各组大鼠抑郁样行为;利用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组大鼠血清和前额叶皮质中肿瘤坏死因子α(TNF-a)和白细胞介素1-β(IL-1β)的含量;利用Western Blot检测各组大鼠前额叶皮质中脑源性神经生长因子(BDNF)、原肌球蛋白受体激酶B (Trk-B)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)和β-连环蛋白(β-catenin)的表达。结果:行为学检测结果显示PSD组大鼠不动的时间显著增加(P<0.05),同时糖水摄入量及糖水偏爱百分比均显著下降(P<0.05),而槲皮素和运动训练均逆转了这些行为(P<0.05)。ELISA检测显示PSD组大鼠血清及前额叶皮质中TNF-α和IL-1β表达升高(P<0.05),而槲皮素和运动训练均不同程度使其表达降低(P<0.05)。Western Blot检测显示PSD组前额叶皮质中BDNF、Trk-B和β-catenin的蛋白表达下降(P<0.05),GSK-3β表达升高(P<0.05),而槲皮素和运动训练均上调了脑卒中模型大鼠前额叶组织中BDNF、Trk-B和β-catenin的表达(P<0.05)。结论:运动训练改善了MCAO诱导的大鼠卒中后抑郁样行为,槲皮素治疗联合运动训练可能通过抑制脑卒中模型大鼠前额叶皮质中的炎症因子并上调BDNF/Trk-B/β-catenin系统发挥抗抑郁作用。

奥氮平诱导雄性大鼠产生胰岛素抵抗的机制研究

目的探讨奥氮平诱导雄性Sprague Dawley(SD)大鼠产生胰岛素抵抗的机制。方法将20只雄性SD大鼠随机分为对照组和奥氮平组,每组10只;奥氮平组大鼠每日给予1.5 mg·kg^-1奥氮平灌胃,对照组大鼠给予等量生理盐水灌胃,连续8周。于给药前及给药后第1~8周测2组大鼠空腹血糖(FBG),并记录大鼠体质量。给药后2、4、6、8周取大鼠尾静脉血,采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测血浆胰岛素水平,并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);给药后第8周,行口服糖耐量实验(OGTT);并于给药后第8周末取大鼠白色脂肪组织及大脑前额叶皮质,Western blot法检测2组大鼠白色脂肪组织中早期生长反应因子-1(Egr-1)、香叶基香叶基二磷酸合成酶(GGPPS)、胰岛素受体底物-1(IRS-1)蛋白表达水平,ELISA检测2组大鼠白色脂肪组织及大脑前额叶皮质中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平。结果给药前2组大鼠体质量比较差异无统计学意义(P>0.05);给药后第1~8周,2组大鼠体质量均呈稳定上升,但2组大鼠体质量比较差异无统计学意义(P>0.05)。给药前及给药后1~2周,2组大鼠FBG比较差异无统计学意义(P>0.05);给药后3~8周,奥氮平组大鼠FBG高于对照组(P<0.05);给药后第2、4、6、8周,奥氮平组大鼠胰岛素水平、HOMA-IR高于对照组(P<0.05)。奥氮平组和对照组大鼠OGTT曲线下面积分别为932.4±51.5和762.8±90.7,奥氮平组大鼠OGTT曲线下面积大于对照组(P<0.05);奥氮平组大鼠白色脂肪组织中Egr-1、GGPPS、IRS-1蛋白相对表达量高于对照组(P<0.05)。奥氮平组大鼠白色脂肪组织中TNF-α、IL-1β和IL-6水平高于对照组(P<0.05)。2组大鼠大脑前额叶皮质中TNF-α、IL-1β和IL-6水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论奥氮平可诱导雄性SD大鼠产生胰岛素抵抗,且胰岛素抵抗的形成可能与白色脂肪组织中Egr-1、GGPPS、IRS-1和炎性因子水平显著增高有关。

基于人体成分数据建立预测老年人衰弱的机器学习模型

背景目前衰弱评估量表众多,多数指标难以客观定量。人体成分分析仪能快速获得与衰弱评估相关的定量数据,在大数据的挖掘与分析中机器学习具有一定的优势。目的 建立基于人体成分数据的机器学习模型,评价其诊断预测衰弱的价值。方法 2021年4-6月收集北京10个社区65岁以上老年人体检数据,以Fried衰弱表型量表作为衰弱诊断的金标准,筛选相关指标,建立随机森林、支持向量机、logistic回归和XGBoost模型,运用ROC曲线、敏感度和特异性等评价模型的预测效能。结果 共纳入558例数据进行建模分析,其中衰弱前期122例,非衰弱436例。随机森林算法筛出年龄、50 kHz全身相位角、骨骼肌质量、体脂百分比等10个重要性靠前的特征,并据此建立四个预测模型。Logistic回归模型的整体预测效能最高,ROC曲线下面积达到0.872,敏感度和特异性分别为78.38%和80.15%,预测准确率为79.76%。另外三种模型的整体效能差异不大,预测准确率均超过75%。结论 基于人体成分数据建立的logistic回归模型在预测老年人衰弱的效能上高于其他机器学习模型,且预测准确率较高,可用于衰弱的早期临床诊断。

北京社区老年男性衰弱现状及其影响因素

目的分析慢病、躯体功能、骨骼肌质量、脂肪等因素对老年男性衰弱患者的影响。方法2021年4月至6月,共纳入北京市社区658名≥60岁老年男性为研究对象。采用Fried衰弱表型(FP)诊断是否衰弱,衰弱期或衰弱前期老年人纳入衰弱组(n=124),其余为非衰弱组(n=534)。采用Charlson共病指数(CCI)评估慢病患病情况。测试躯体功能并采用人体成分分析仪分析骨骼肌、脂肪等体成分。采用SPSS 26.0统计软件进行数据分析。根据数据类型分别采用t检验、Mann-Whitney U检验或χ2检验进行组间比较。应用logistic回归分析衰弱的影响因素。结果单因素分析结果显示,衰弱组与非衰弱组患者年龄、身高、体质量、骨骼肌质量指数、体脂肪量、内脏脂肪面积、基础代谢率、蛋白质、骨矿物质含量、握力、步速及5次起坐时间情况比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。衰弱组CCI较非衰弱组明显增高,其中高血压、冠心病、糖尿病、低骨量、前列腺增生、慢性支气管炎、慢性肾病患者比例较高,差异均有统计学意义(P<0.05)。校正年龄、身高、体质量后,多因素logistic回归分析结果显示,CCI(OR=1.256,95%CI 1.012~1.558,P=0.039)、低骨量(OR=2.312,95%CI 1.308~4.088,P=0.004)和5次起坐时间(OR=1.110,95%CI 1.022~1.205,P=0.013)是衰弱的独立影响因素。结论CCI增高、低骨量和5次起坐时间延长与衰弱的发生密切相关。

氧化应激在衰弱发病机制中的作用

衰弱包括躯体衰弱、认知衰弱与社会心理衰弱,衰弱老年人表现为多个器官和系统生理储备功能下降,当遇到微小的刺激如呼吸道感染、微创手术等,便可引发慢病加剧、再住院、跌倒、谵妄、失智、失能,甚至死亡等一系列不良事件。衰弱的本质是动态的,个体从健康、衰弱前、衰弱再到失能是一种连续演变的过程,经过早期干预,衰弱可在一定程度上逆转,从而减少生理储备的损失。因此,研究衰弱的发病机制,明确与衰弱相关的生物标志物并尽早识别非常重要。氧化应激在衰弱的发病机制中起了重要作用,本文对氧化应激在衰弱发生中的作用进行探讨,重点论述氧化应激标志物、抗氧化防御系统及氧化应激相关线粒体功能障碍与衰弱的关系。

IKKβ缺失和NF-κB p65缺失对小鼠成骨细胞分化的影响

目的:探讨IKKβ和NF-κB p65缺失对小鼠成骨细胞分化的影响。方法:使用CRISPR/Cas9基因编辑工具分别敲除小鼠前成骨细胞MC3T3-E1中的Ikbkb或Rela基因,获得不表达IKKβ或NF-κB p65蛋白的Ikbkb^(-/-)MC3T3-E1和Rela^(-/-)MC3T3-E1细胞。用10 mmol/Lβ-甘油磷酸+50 mg/L抗坏血酸诱导MC3T3-E1、Ikbkb^(-/-)MC3T3-E1、Rela^(-/-)MC3T3-E1细胞成骨分化。诱导培养4 d后,qPCR法检测细胞中成骨分化标志性基因Sp7、Alpl、Spp1、Bglap mRNA的表达,Western blot法检测细胞中成骨分化相关蛋白ALPL、FZD9的表达;16 d后,茜素红染色法检测细胞外基质矿化水平。结果:诱导培养后Ikbkb^(-/-)MC3T3-E1细胞中Sp7、Alpl、Bglap mRNA表达以及ALPL、FZD9蛋白表达高于MC3T3-E1细胞和Rela^(-/-)MC3T3-E1细胞(P<0.010);Ikbkb^(-/-)MC3T3-E1细胞外基质矿化水平高于MC3T3-E1和Rela^(-/-)MC3T3-E1细胞(P<0.010),而Rela^(-/-)MC3T3-E1与MC3T3-E1细胞比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:IKKβ缺失与NF-κB p65缺失在成骨细胞分化过程中的功能可能不同,IKKβ缺失促进成骨细胞分化,而NF-κB p65缺失则无此作用。

C1型尼曼-匹克病小鼠肝脏功能及病理变化

目的探讨晚期(P60)Npc1^(-/-)小鼠肝脏功能和病理变化,为C1型尼曼-匹克病(NPC1)患者肝脏的病理发生及临床治疗提供实验依据。方法小鼠称重后,眼内眦取血检测血清中乳酸脱氢酶(LDH)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)的活性变化,评价Npc1^(-/-)小鼠的肝功能变化;取肝组织进行石蜡和冷冻切片,通过HE染色和油红O染色评估肝脏组织的形态变化和脂肪储存情况,以及Masson染色评估肝脏组织胶原沉积情况;Real-time PCR和Western blotting分别检测肝脏组织促炎症因子,白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α的mRNA和蛋白水平表达情况;TUNEL染色评估肝脏组织凋亡情况。结果与Npc1^(+/+)小鼠相比,Npc1^(-/-)小鼠的体重及肝脏系数显著降低(P<0.001);LDH、ALT及AST活性显著升高(P<0.001);HE染色发现,Npc1^(-/-)小鼠肝脏组织形态改变明显,出现大量泡沫细胞;油红O染色显示,Npc1^(-/-)小鼠肝脏脂肪含量显著降低;Real-time PCR显示,Npc1^(-/-)小鼠肝脏组织IL-1β、IL-6和TNF-α表达均显著升高(P<0.01,P<0.05和P<0.001),同时,Western blotting也显示,3个因子的蛋白表达均显著升高(P<0.05,P<0.05和P<0.01),证实Npc1^(-/-)小鼠肝脏晚期发生炎症反应;Masson染色未发现Npc1^(-/-)小鼠肝脏纤维化的发生;TUNEL染色显示,Npc1^(-/-)小鼠肝脏组织凋亡细胞数量增加。结论 Npc1基因突变导致肝脏组织形态发生改变,大量的巨噬细胞聚集引发炎症反应,而炎症反应的发生可能是引起肝脏细胞凋亡和肝功能受损的重要途径之一。

临床衰弱量表与Fried表型Edmonton量表在北京养老机构人群中的应用

目的又观察临床衰弱量表(CFS)与Fried衰弱表型量表(FFP)、Edmonton衰弱量表(EFS)在养老机构人群中评估衰弱的表现。方法2021年10-12月采用方便抽样方法选取北京地区4所养老机构60岁及以上老年人167例为研究对象。采用CFS、FFP、EFS进行衰弱评估,比较评估结果的一致性和差异性,分析各量表评分与健康指标的相关性,并通过受试者工作特征曲线(ROC)比较3种量表识别失能的能力。结果CFS的衰弱检出率最高为35.33%(59/167),高于FFP的23.35%(39/167)(χ^(2)=9.500、P=0.002)和EFS的24.55%(41/167)(χ^(2)=7.605、P=0.005),CFS与FFP、CFS与EFS、FFP与EFS的结果一致性检验Kappa值分别为0.461、0.465、0.441(均P<0.001)。校正年龄和性别后,仅CFS评分与慢病数量呈正相关(r=0.190、P=0.018);CFS、FFP、EFS评分均与握力、简易躯体功能评估(SPPB)、简易精神状态量表(MMSE)呈负相关(均P<0.05),与老年人抑郁量表(GDS-15)呈正相关(均P<0.05),且EFS评分与握力的相关系数低于CFS、FFP评分(-0.248比-0.431,P=0.009;-0.248比-0.536,P<0.001);CFS、FFP评分与PhA呈负相关(r=-0.189、-0.243,P=0.016、0.002)。ROC分析结果显示,CFS、FFP和EFS评分识别失能的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.87、0.78、0.76(均P<0.001),CFS高于FFP(Z=2.175、P=0.030)和EFP(Z=2.585、P=0.010)。结论在养老机构人群中CFS具有较好的衰弱检出率和失能识别能力,有助于衰弱老年人的及时干预和养老机构的医疗照护决策。

脑苷肌肽对APP/PS1阿尔茨海默病模型小鼠脑内胶质纤维酸性蛋白和神经元核抗原表达的影响

目的研究脑苷肌肽对APP/PS1阿尔茨海默病模型小鼠脑内胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元核抗原(NeuN)表达的影响。方法5月龄APP/PS1双转基因模型小鼠36只,数字抽签随机分为模型组(氯化钠6.6 ml·kg-1·d-1腹腔注射)、脑苷肌肽组(脑腺苷肌肽6.6 ml·kg-1·d-1腹腔注射)、多奈哌齐组(多奈呱齐2 mg·kg-1·d-1灌胃),每组12只,同月龄C57BL/6J小鼠12只为正常对照组,连续给药6周,取脑组织进行免疫组化染色检测β淀粉样蛋白(Aβ)、GFAP及NeuN的表达并定量分析。结果免疫组化染色结果显示,模型组小鼠的Aβ、GFAP表达均高于正常对照组,(0.147±0.068)%比0%、(61.750±22.020)个比(26.000±4.598)个(均P<0.05),NeuN的表达低于正常对照组,0.021±0.002比0.032±0.003(P<0.05);脑苷肌肽组及多奈哌齐组的Aβ(0.058±0.055)%和(0.057±0.045)%、GFAP表达(38.250±5.418)个和(36.130±5.963)个均低于模型组(均P<0.05),NeuN的表达0.029±0.004和0.027±0.003均高于模型组(P<0.05),脑苷肌肽组Aβ、GFAP、NeuN的表达水平与多奈哌齐组比较差异无统计学意义(均P>0.05)。结论脑苷肌肽具有多靶点的神经保护作用,该作用可能是通过降低AD小鼠的Aβ、GFAP表达水平并上调NeuN的表达实现。

C1型尼曼–匹克病小鼠雄性不育的睾丸病理研究

该文主要研究C1型尼曼–匹克病小鼠(Npc1–/–小鼠)雄性不育的睾丸病理变化,并进一步探讨Npc1基因对雄性不育的影响。随机选取P60的Npc1–/–和Npc1+/+雄鼠各12只,观察隐睾发生率;然后,随机选取P20、P40和P60的Npc1–/–和Npc1+/+雄鼠睾丸组织,统计睾丸重量并计算睾丸指数, HE染色观察生殖细胞层数并测量生精小管直径, PAS糖原染色观察生殖细胞周期并统计精母细胞在总细胞数中的相对百分比,油红O染色观察间质细胞的脂质存储;最后,随机选择P60的Npc1–/–和Npc1+/+雄鼠睾丸,通过TUNEL染色观察生殖细胞凋亡,并通过Western blot检测凋亡蛋白Cleaved-caspase-3、Cleaved-caspase-9、p53、Bax和Bcl-2的表达水平。结果显示,与Npc1+/+雄鼠相比, Npc1–/–雄鼠均有隐睾发生,睾丸重量和睾丸指数均显著降低(P<0.05, P<0.001),生殖细胞层数不明显,生精小管管径显著减小(P<0.001),生精周期不规律且精母细胞数量显著减少(P<0.001),间质细胞的脂质存储显著减少(P<0.001);生殖细胞凋亡大幅增加(P<0.001), Cleaved-caspase-3、Cleaved-caspase-9、p53、Bax表达量显著升高(P<0.001),Bax/Bcl-2比率显著升高(P<0.001)。该文结果提示, Npc1基因突变导致隐睾、睾丸结构异常、间质细胞脂质储存减少及生殖细胞凋亡,因此, Npc1基因可能成为研究男性不育的新靶点。

老年衰弱患者的脂肪酸代谢组学特征

目的探究脂肪酸在老年衰弱患者中的代谢特征及其作为衰弱的生物标志物的价值。方法募集49例老年人,其中非衰弱19例、衰弱前期和衰弱期各15例。采用靶向代谢组学检测血清脂肪酸含量,包括38种短、中、长链脂肪酸。结果在老年衰弱患者的血清中检测到9种长链脂肪酸含量较高,其中二同型-γ-亚麻酸的水平每升高1个单位,疲乏的风险增加1.056倍(OR=2.056,95%CI:1.147~3.687,P=0.016)。未发现衰弱前期与非衰弱组间的代谢差异。分别有3、7种长链脂肪酸与握力、步速呈负相关,γ-亚麻酸与体质指数(BMI)、体脂率、内脏脂肪面积等反映脂肪组织的指标均呈正相关,但未发现骨骼肌、实验室指标与脂肪酸之间的相关性。共涉及5条代谢通路与衰弱相关,分别是脂肪酸合成、脂肪酸代谢、线粒体脂肪酸链延长、亚油酸代谢和α-亚麻酸代谢。结论二同型-γ-亚麻酸、γ-亚麻酸等9种不饱和脂肪酸可能是老年衰弱患者的潜在生物标志物,但脂肪酸代谢组学用于识别衰弱前期老年人的价值有待进一步研究。