端粒酶逆转录酶和端粒重复结合因子2在大鼠心肌细胞发育过程中的表达

目的:观察大鼠心肌细胞发育过程中端粒酶逆转录酶(TERT)和端粒重复结合因子2(TRF2)的表达,探讨TERT活性与心肌细胞分化和发育的关系。方法:应用免疫组化方法分别检测胎鼠孕16d、出生后2、5、10、20d的大鼠心脏标本,观察TERT和TRF2的表达和分布。结果:TERT分布于胎鼠心肌细胞的胞质和细胞核中,出生后2～20d,TERT在胞质的表达呈下降趋势。TRF2主要分布在胎鼠心肌细胞的胞核中,出生后5～20d,TRF2表达阳性的心肌细胞数目逐渐减少。结论:在大鼠心肌细胞发育过程中,TERT和TRF2的表达下调促使部分细胞永久地退出细胞周期而进入终末分化;TERT活性受到了心肌细胞发育过程的调节。

缝隙连接蛋白43在培养的新生大鼠心室肌细胞中的时空表达

目的探讨连接蛋白43(Cx43)在培养的新生大鼠心室肌细胞中的时空表达变化规律。方法利用免疫细胞化学方法及免疫电镜技术,观测培养2、4、8、10、12、16、20、26、30d大鼠心室肌细胞Cx43蛋白的表达;结果培养第2d心肌细胞开始表达Cx43,表达部位主要在细胞质中,呈点状;第4d细胞质中点状分布减少,主要集中在细胞膜连接处;第10d在细胞连接处增多,呈条、链状分布;以后基本恒定,无明显变化;第30d时Cx43颗粒出现紊乱分布;结论Cx43在培养的新生大鼠心肌细胞中的表达随培养时间延长而出现位置和量的变化,与培养心肌细胞的生长、发育及功能变化一致。

常氏肝癌细胞cDNA文库的构建及ADAMs相关基因的免疫筛选与序列分析

抽提常氏肝癌细胞的总RNA ,以oligo(dT)为引物 ,通过两次转换模板 ,采用LD PCR合成全长cDNA ,在cDNA两端引入SfiⅠ的酶切位点。以λTriplEX2为载体经过包装后构建了常氏肝癌细胞cDNA表达文库。以ADAMs通用抗体 ,用免疫筛选技术从常氏肝癌cDNA文库中筛选出 2 2个阳性克隆 ,经测序分析和BLAST检索 ,证实其中一个为新基因 ,部分区域具有蛋白酶的功能 ,对该基因进行了GenBank登录 ,获注册号为AY0 780 70。

胰岛素对大鼠心肌成纤维细胞增殖的影响

[目的]研究胰岛素对体外培养的心肌成纤维细胞增殖的影响,探讨胰岛素在心肌肥厚中的作用。[方法]胰蛋白酶消化法和差速贴壁法体外培养和纯化新生大鼠心肌成纤维细胞,不同浓度的胰岛素处理48h后,用免疫细胞化学法显示成纤维细胞中cyclinE的表达,并进行图像分析,检测胰岛素对成纤维细胞增殖的影响。[结果]胰岛素作用后,成纤维细胞中cyclinE的表达较空白对照组有所上升(P﹤0.05)。[结论]胰岛素有促进成纤维细胞增殖的作用。

大鼠心肌细胞黏附分子N-cadherin表达的时空分布方式

目的 探讨大鼠心肌细胞发育过程中黏附分子N cadherin的时空分布方式以及心肌细胞中N cadher in表达的增龄变化规律。 方法 应用SP免疫组织化学方法分别检测胎鼠、新生鼠、幼年、青年、中年和老年大鼠的心肌细胞黏附分子N cadherin的表达 ,并使用HIPAS 10 0 0图像分析仪进行定量分析。 结果 细胞黏附分子N cadherin在大鼠的心房、心室、乳头肌、室间隔等处均有表达。胎鼠心肌细胞中N cadherin分散地分布于细胞表面和胞浆中 ,出生后到幼年时期逐渐向心肌细胞端 端的闰盘处集中 ,青年、中年和老年大鼠N cadherin典型地分布在心肌细胞末端的闰盘处。图像分析表明 :心室心肌细胞N cadherin的表达随年龄变化而递增。 结论 在大鼠心肌发育过程中 ,N cadherin的表达存在增龄变化 ;以N cadherin介导的细胞黏合连接与闰盘的发育有着密切的联系 ;黏合连接提供的细胞间机械偶联对于稳定细胞与细胞之间的联系有重要意义。

人心肌细胞粘着斑蛋白α-catenin表达的增龄变化

目的 探讨在人心脏发育过程中心肌细胞粘着斑蛋白α catenin表达的增龄变化规律。方法 应用S P免疫组化方法分别对新生儿和成年人的心肌细胞α catenin的表达进行检测。结果 细胞粘着斑蛋白α catenin在心房、心室、乳头肌、室间隔等处的心肌细胞中均有表达。新生儿时期大量的α catenin呈斑块状聚集在心肌的端闰盘处 ,少量分布于心肌细胞的侧面连接处和胞浆中 ;成年人心肌细胞的α catenin典型地分布于细胞末端的闰盘处。结论 在人的心肌发育过程中 ,α catenin的表达分布存在增龄变化 ;α

胎儿心肌细胞TERT和cyclinD1的表达

目的探讨端粒酶逆转录酶(telomerasereversetranscriptase,TERT)和细胞周期素cyclinD1的表达与胎儿心肌细胞增殖、分化的关系。方法应用S-P免疫组化方法分别对不同月份的胎儿心肌细胞TERT和cyclinD1蛋白表达进行检测。结果胎儿左心室心肌细胞核中TERT和cyclinD1的表达随月份的增长而减少。结论TERT和cyclinD1表达下调可能促使部分细胞永久地退出细胞周期而进入终末分化。

褐家鼠精母细胞中联会复合体的研究Ⅳ.常染色体联会复合体的发育和偶线期节的研究

采用表面铺展-SDS处理、硝酸银和磷钨酸（Phosphotungsticacid，PTA）染色电镜技术，研究了褐家鼠精母细胞中常染色体联会复合体（Synaptonemacomplex，SC）的发育及偶线期节（Zygotenenodule，ZN）。在褐家鼠精母细胞的细线期，常染色体轴心（Axialcores，ACs）已形成，同源轴心在空间上靠近，偶线期SCs开始形成，到粗线期SCs完全形成，于双线期SCs开始解体。在双线期除了个别SCs侧生组分分开外，大多数SCs发生碎片化（fragmentation）．在偶线期未配对的ACs和SCs侧生组分及中央组分上均发现电子密度高的球形或椭圆形的节状结构──偶线期节，ZNss在同源染色体配对过程中起很重要的作用。

一种简便高效的改良降落PCR

降落 (touchdown ,TD)PCR通常涉及 1 5个退火温度 ,程序设计复杂。报道了一种简便高效的改良降落PCR ,只需 5个降落退火温度 ,以杜氏盐藻 (Dunaliellabardawil)基因组为模板 ,设计一对引物扩增胡萝卜素生物合成相关 (carotenebiosynthesisrelated ,cbr)基因的第 3外显子。实验证实该方法程序简单 ,比标准降落PCR步骤简化 70 % ,且产物的特异性及效率都有较大提高。

大鼠心脏连接蛋白43表达的增龄变化

目的 探讨大鼠心脏连接蛋白 4 3(Cx4 3)表达的增龄变化规律。 方法 应用SP免疫组织化学方法 ,检测 2 1例幼年组、青年组和老年组大鼠心肌细胞Cx4 3的蛋白表达。 结果 1 Cx4 3主要在心室肌表达。 2 幼年大鼠心室肌的Cx4 3多数已聚集于端闰盘处 ,少数仍呈斑点状散在分布 ,而乳头肌等处的Cx4 3主要分布于细胞表面。青年和老年大鼠的Cx4 3典型地分布于端闰盘处。 结论 Cx4

成人与新生儿心脏连接蛋白43表达差异

目的 探讨成人与新生儿心脏连接蛋白 4 3(Cx4 3)表达差异。 方法 应用SP免疫组织化学和图像分析方法 ,观测成人与新生儿心脏Cx4 3的蛋白表达。 结果 1 新生儿心脏Cx4 3在心房和心室均呈斑点状遍布于心肌细胞侧面连接处和细胞质内 ,闰盘处极少。 2 成人Cx4 3表达在心房肌非均质分布于细胞侧面连接处和端闰盘处 ;心室肌典型地排列在闰盘处。 3 图像分析表明 ,心肌细胞Cx4 3分布密度 ,新生儿心房 <心室 ,成人心房 >心室。成人心房、心室均低于新生儿。 结论 新生儿Cx4 3主要分布于心肌细胞侧连接处 ,成人心房和心室存在差异。Cx4 3分布密度新生儿心房 <心室 ,成人心房 >心室 ;成人心脏低于新生儿。提示 ,Cx4 3有增龄变化。

大鼠心脏Cx43、Cx45表达的差异

连接蛋白(Cx)组成心脏的间隙连接,为心脏细胞间通讯提供代谢偶联和电偶联,并为心肌的同步收缩提供低电阻传导途径.

胎儿心脏连接蛋白43的表达

目的:研究胎儿心脏不同部位连接蛋白43(Cx43)的表达。方法:应用SP免疫组化方法和图像处理系统,分析和比较胎儿心脏不同腔室心肌细胞Cx43的表达。结果:(1)胎儿心脏Cx43的蛋白表达在心脏4个腔均有,呈斑点状遍布于整个心房肌和心室肌的细胞质内和细胞膜表面,少数位于闰盘处。(2)Cx43主要在心室肌表达,心房较少。左、右心房肌和房间隔之间及左、右心室肌和室间隔之间的分布相似。结论:胎儿心脏Cx43蛋白表达主要分布于心肌细胞质内和细胞表面。心室表达多于心房,这种差异可能与胎儿期心房和心室之间功能差异有关。

心房纤颤患者心房肌Cx43的蛋白表达

目的 :研究房颤患者心房肌细胞连接蛋白 43 (Cx43 )的蛋白表达。方法 :应用SP免疫组化方法 ,比较正常和房颤患者心房肌Cx43的表达。结果 :( 1 )正常心房肌细胞Cx43呈斑点状或带状 ,大量分布于细胞侧连接处。部分位于闰盘处。 ( 2 )房颤患者心房肌细胞Cx43颗粒发生重排 ,杂乱地分布于心肌的各个部位。房颤时间长者 ,部分Cx43移入细胞质中 ,表现为某些区域极度增加或减少。 ( 3 )房颤患者心房肌细胞Cx43的蛋白表达量未发生显著变化。结论 :Cx43在房颤患者心房肌细胞发生重排 ,呈无序分布 ,可能是心房纤颤发病的原因之一 ;并提示房颤仅对Cx43的表达形式产生影响。

大鼠心脏缺血对间隙连接蛋白Cx43分布的影响

目的:探讨大鼠心脏缺血区心肌间隙连接蛋白43(Connexin 43,Cx43)的分布特征。方法:结扎大鼠冠状动脉前降支造成心肌缺血模型。用免疫组织化学法显示心肌缺血区、边缘带及非缺血区Cx43的分布。结果:缺血中心区和边缘区Cx43表达明显紊乱。缺血中心区心肌细胞端-端相接处的Cx43严重消失,重接排列到细胞侧-侧相接处。边缘区Cx43阳性颗粒开始从细胞端-端处向四周扩散,非缺血区Cx43的表达与正常心肌相同。结论:急性短时间心肌缺血时Cx43已开始大量扩散和重新分布, 可能是导致心功能异常的结构基础。

利用SRY基因和微卫星标记鉴定反刍动物性别

以反刍动物为研究对象,应用多重PCR技术扩增绵羊基因组中X、Y染色体上的4个微卫星标记和SRY基因,根据基因型进行性别鉴定,试图通过一次DNA扩增同时提供性别鉴定和基因分型的信息。结果表明所设计SRY基因的引物具有高度特异性,是性别鉴定的主要依据,而Y染色体上的MCM158、MAF45两标记由于特异性不好,因此不适用于性别鉴定,对于X染色体上所选的两标记MILVET09和AE25只能进一步验证所鉴定的雄性个体。得出结论在被检个体中,能同时扩增出SRY基因、MCM158、MAF45,X染色体上MILVET09和AE25,且X染色体上的MILVET09、AE25基因型为纯合子的个体为正常的雄性;被检个体中只有Y染色体上MCM158、MAF45和X染色体上MILVET09、AE25的扩增产物,而没有SRY基因的扩增产物,则被检个体为雌性,且MILVET09、AE25的基因型对雌性个体的性别判断无影响。MCM158、MAF45两标记基因型不影响个体的性别鉴定结果。

新生儿心肌连接蛋白43、45的表达

目的 研究新生儿心肌不同部位连接蛋白 4 3、4 5 (Cx4 3、Cx4 5 )表达的差异。方法 应用SP免疫组化方法 ,分析和比较 6例新生儿心不同腔室心肌细胞Cx4 3、Cx4 5的表达。结果 1 新生儿心肌Cx4 3的蛋白表达在心四个腔均有表达 ,呈斑点状遍布于整个心房肌和心室肌的细胞质内和细胞膜表面 ,少数位于闰盘处 ;Cx4 3、主要在心室肌表达 ,心房较少 ;2 Cx4 3与Cx4 5的分布类似 ,但远少于Cx4 3。结论 Cx4 3主要分布于新生儿心肌细胞质内和细胞表面。心室表达多于心房 ,Cx4 5和Cx4 3分布相似 ,但不如Cx4 3丰富。

心房纤颤患者心房Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的变化

目的:探讨心房纤颤患者心房胶原的组织学分布和Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达的变化。方法:应用Masson和SP免疫组化染色方法,结合数字图像分析方法,观测正常人和心房纤颤患者心房胶原的组织学和Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达。结果:(1)正常心房Ⅰ、Ⅲ型胶原广泛分布,均可分为粗、细不等的条状纤维。(2)心房纤颤患者心房Ⅰ和Ⅲ型胶原表达,仅部分区域发生极度重排;其心肌细胞间隙增大,胶原松散、断裂或大量聚集。(3)正常心房肌Ⅰ型胶原含量较Ⅲ型胶原多;心房纤颤组Ⅰ型和Ⅲ型胶原含量明显增多。结论:心房纤颤心肌的间质松散,胶原增多。Ⅰ和Ⅲ型胶原纤维形态上的变化可能是心房纤颤时心功能异常所致。

大鼠心肌钙黏蛋白表达的增龄变化

目的探讨大鼠心肌细胞发育过程中钙黏蛋白(cadherin)的分布方式以及心肌细胞中cadherin表达的增龄变化规律。方法应用S-P免疫组化方法分别检测幼年、青年、中年和老年大鼠的心肌细胞钙黏蛋白cadherin的表达。结果细胞钙黏蛋白cadherin在大鼠的心房、心室、乳头肌、室间隔等处均有表达。幼年时期cadherin阳性颗粒大部分集中在心肌细胞端-端的闰盘处,青年、中年和老年大鼠cadherin典型的分布在细胞心肌末端的闰盘处。结论在大鼠心肌发育过程中,cadherin的表达存在增龄变化;以cadherin介导的细胞黏合对闰盘的形成是必备的,黏合连接稳定了细胞间的联系并且有利于心肌细胞收缩的同步化。

不同年龄小鼠房室结的光镜观察和定量分析

目的 :研究小鼠房室结组织结构和年龄变化。方法 :用石蜡切片 ,HE和Masson染色 ,光镜观测 ,用图像分析仪分析房室结区的组织结构特点。结果 :小鼠房室结位于中心纤维体前下方 ,房室隔右侧的心内膜下 ,主要由P细胞和T细胞构成。 3例有副房室结存在。 6天鼠、2月鼠和 1 0～ 1 2月鼠P细胞的面积分别是 1 2 4 5 0 ,1 90 0 0 ,1 1 5 1 0 μm2 ;T细胞的面积分别为 1 1 3 2 0 ,1 3 6 5 0和 1 1 4 80 μm2 。胶原占房室结的面积分别是 1 2 85 % ,2 5 5 4%和 2 3 44%。结论 :小鼠房室结的P细胞和T细胞随年龄的增长而增大 ,但 1 0～ 1 2月期接近 6天期大小。