PK-15细胞中猪瘟病毒的增殖特点研究

为探讨猪瘟病毒(CSFV)感染PK-15细胞后的病毒增殖特点,以CSFV Shimen株细胞毒和PK-15细胞为研究材料,通过建立病毒感染细胞模型,将已感染靶细胞连续传至3代,采用IDEXX CSFV抗原检测试剂盒、反转录PCR(RT-PCR)和免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)检测CSFV复制水平和感染情况。结果表明,成功建立细胞感染模型且无细胞病变产生;CSFV抗原检测试剂盒和RT-PCR检测结果显示,随细胞传代次数的增加,CSFV复制水平明显提高;同代次细胞随培养时间的延长,CSFV复制水平也逐渐提高,且靶细胞的培养方式对CSFV的增殖效果有明显影响;IPMA检测结果表明,相同条件下,靶细胞对CSFV敏感性存在明显不同,随培养时间的延长,阳性细胞数量逐渐增加并且感染程度逐渐加强。以上结果表明,病毒感染时间、阳性细胞数量、培养方式及细胞敏感性是影响CSFV体外增殖效果的重要因素,研究结果为进一步提高CSFV体外增殖滴度奠定了基础。

3T3-L1前脂肪细胞中Ghrelin对miRNAs表达的影响

为探讨3T3-L1前脂肪细胞增殖分化过程中Ghrelin对microRNAs(miRNAs)表达的影响,将pcDNA3.1(+)-Ghrelin转染至3T3-L1前脂肪细胞,real-time PCR检测10种miRNA的表达变化,并对显著差异表达的miRNA进行生物信息学分析。结果显示,pcDNA3.1(+)-Ghrelin的表达明显上调,约是对照组的5倍;real-time PCR结果显示,miR-125b-5p(P<0.05)表达显著上调,miR-21a-5p(P<0.01)、miR-30c-5p(P<0.05)、miR-181-5p(P<0.01)表达显著下调;生物信息学分析结果显示,预测调节的1062个靶基因与细胞的生长、分化和发育功能相关,核因子1b(Nfib)是其共同调节的重要潜在靶基因;丝裂原活化蛋白激酶(MAPK signaling pathway)和成脂基因信号通路是其调节差异最为显著的信号通路,与脂肪细胞的增殖和分化密切相关。结果表明,Ghrelin可通过调节miRNA的表达影响3T3-L1前脂肪细胞的增殖和分化。研究结果为进一步探讨Ghrelin发挥效应的分子调节机制和分子调控网络奠定了基础。