雷公藤甲素对类风湿关节炎破骨细胞分化影响及机制

目的探讨雷公藤甲素(TP)对类风湿关节炎(RA)破骨细胞(OC)分化的影响及其机制。方法选取2019年9月—2020年8月到我院进行治疗的RA病人20例,分离RA病人外周血单个核细胞(PBMC),通过核因子κB受体活化因子配体(RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)诱导培养为OC,分别用不同浓度的TP(浓度为10、20、40 nmol/L)干预OC,记为TP各剂量组,未经过TP干预的OC作为对照组。使用细胞计数试剂盒(CCK-8)法测定细胞增殖,流式细胞术测定细胞凋亡,ELISA法检测相关炎症因子表达,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定标志性基因和分化相关转录因子表达,蛋白质印迹(Western blot)测定p-IκB蛋白以及分化相关转录因子蛋白表达。结果与对照组比较,TP各组RA-OC存活率及炎症因子表达呈剂量效应关系降低(F=95.702~185.246,P<0.01),RA-OC凋亡率升高(F=306.798,P<0.01);而Trap、Ctsk、CTR、MMP-9 mRNA表达下调(F=141.455~266.411,P<0.01),NFATcl、c-Fos、c-Jun mRNA和蛋白表达均降低,p-IκB蛋白表达也相应降低(F=130.683~351.640,P<0.01)。结论TP可能通过抑制NF-κB信号通路减轻RA病人OC分化,并抑制细胞增殖和炎症反应,以及诱导OC凋亡。

miR-122-5p对类风湿关节炎滑膜细胞增殖与凋亡的影响及其机制

目的 研究miR-122-5p对类风湿关节炎(RA)滑膜细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法 运用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)分别检测正常关节滑膜细胞、RA滑膜细胞中miR-122-5p以及盘状结构域受体激酶(DDR2)的表达。实验分为阴性对照(miR-NC)组(转染mimic NC序列)、miR-122-5p寡核苷酸模拟物(miR-122-5p)组(转染miR-122-5p模拟物mimics)、miR-122-5p特异性寡核苷酸抑制剂阴性对照(anti-miR-NC)组、miR-122-5p特异性寡核苷酸抑制剂(anti-miR-122-5p)组、miR-122-5p+pcDNA组(共转染miR-122-5p mimics和空载体(pcDNA))、miR-122-5p+pcDNA-DDR2组(共转染miR-122-5p mimics和DDR2过表达载体(pcDNA-DDR2)),用脂质体法转染至RA滑膜细胞。采用Western blot方法检测细胞中DDR2、P21和Survival的蛋白表达,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞中miR-122-5p与DDR2的结合力。结果 与正常滑膜细胞相比较,RA滑膜细胞中miR-122-5p的表达显著降低,DDR2的表达显著升高(t=27.714~48.853,P<0.001)。过表达miR-122-5p可抑制RA滑膜细胞增殖,促进其凋亡(t=16.716~121.500,P<0.001)。miR-122-5p可抑制野生型DDR2细胞的荧光活性。过表达DDR2可以逆转miR-122-5p对RA滑膜细胞的增殖抑制和凋亡促进作用(t=106.335~327.990,P<0.001)。结论 miR-122-5p可抑制RA滑膜细胞的增殖,促进其凋亡,其机制可能与靶向DDR2有关。