环鸟苷酸腺苷酸合成酶-环鸟苷酸腺苷酸-干扰素基因刺激分子信号通路在结核性胸膜炎大鼠中的作用

目的探讨环鸟苷酸腺苷酸合成酶(cGAS)-环鸟苷酸腺苷酸(cGAMP)-干扰素基因刺激分子(STING)信号通路在结核性胸膜炎大鼠中的作用。方法30只6周龄无特定病原级Sprague Dawley雄性大鼠适应性饲养5 d后随机分为对照组、模型组和cGAS抑制剂组,每组10只。3组大鼠适应性饲养5 d后于右侧腹股沟内侧皮内注射100μL卡介苗(BCG)悬液(0.06 mg);接种5周后,模型组和cGAS抑制剂组大鼠于右侧肋弓角顶点注射1 mL结核分枝杆菌H37RV悬液(0.03 mg),建立结核性胸膜炎大鼠模型;对照组大鼠仅接种BCG,不注射结核分枝杆菌H37RV悬液。cGAS抑制剂组大鼠自造模第2天尾静脉注射cGAS抑制剂RU.521(600μg·L^(-1))200μL,每日1次,连续7 d;对照组和模型组大鼠尾静脉注射等体积的生理盐水。第8天脱颈处死大鼠,立刻从大鼠剑突侧处沿胸骨剪开皮肤和胸骨,暴露胸腔和纵隔,观察大鼠胸腔积液的分布情况,收集、记录胸腔积液量;并观察胸膜粘连情况,采用胸腔积液中纤维蛋白原(FBG)水平和胸腔粘连带数量评分评估大鼠胸腔积液粘连性;取胸膜组织标本,以体积分数10%甲醛溶液固定。测量各组大鼠切片中平面状态下的胸膜厚度,苏木精-伊红(HE)染色观察各组大鼠胸膜组织病理学改变,采用Western blot法检测各组大鼠胸膜组织中cGAS和STING蛋白表达,采用酶联免疫吸附试验法检测各组大鼠胸膜组织中cGAMP蛋白和胸腔积液中基质金属蛋白酶(MMP)-1、MMP-9、白细胞介素(IL)-1、IL-6、可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)水平。结果模型组和cGAS抑制剂组大鼠胸腔积液显著多于对照组,胸膜厚度显著大于对照组(P<0.05);cGAS抑制剂组大鼠胸腔积液显著少于模型组,胸膜厚度显著小于模型组(P<0.05)。cGAS抑制剂组大鼠胸腔积液中FBG水平、胸腔积液粘连性评分显著低于模型组(P<0.05)。HE染色显示,对照组大鼠肺间质和胸膜内血管排列、形态正常,胸膜无明显异常;模型组大鼠肺间质和胸膜内血管充血扩张,胸膜内可见大量中性粒细胞和淋巴细胞浸润、纤维组织增生、上皮样细胞团及凝固型坏死;与模型组相比,cGAS抑制剂组大鼠肺间质和胸膜内血管充血减轻,胸膜内中性粒细胞、淋巴细胞浸润减少,少量纤维组织增生,上皮样细胞团及凝固型坏死减少。模型组和cGAS抑制剂组大鼠胸膜组织中cGAS、cGAMP、STING蛋白表达显著高于对照组(P<0.05),cGAS抑制剂组大鼠胸膜组织中cGAS、cGAMP、STING蛋白表达显著低于模型组(P<0.05)。模型组和cGAS抑制剂组大鼠胸膜组织中MMP-1、MMP-9、IL-1、IL-6、sICAM-1水平显著高于对照组(P<0.05),cGAS抑制剂组大鼠胸膜组织中MMP-1、MMP-9、IL-1、IL-6、sICAM-1水平显著低于模型组(P<0.05)。结论结核性胸膜炎大鼠胸膜组织中cGAS、cGAMP、STING蛋白表达上调,抑制cGAS-cGAMP-STING信号通路活性可以改善大鼠的结核性胸膜炎,cGAS-cGAMP-STING信号通路可能参与了结核性胸膜炎的发生和发展。

结核感染T细胞斑点试验中结核特异性抗原/植物血凝素比值对肺外结核的诊断价值

目的探讨结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)中结核特异性抗原(TBAg)/植物血凝素(PHA)比值在肺外结核(EPTB)诊断中的应用价值。方法选择2018年1月至2020年1月新乡医学院第一附属医院收治的522例疑诊的EPTB患者为研究对象,根据最终是否诊断为EPTB,将患者分为EPTB组(n=209)和非EPTB组(n=313)。2组患者均行T-SPOT.TB检测,比较2组患者T-SPOT.TB检测结果阳性率、PHA斑点形成细胞(sfc)数、早期分泌靶向抗原6(ESAT-6)sfc数、培养滤液蛋白10(CFP-10)sfc数及TBAg/PHA比值。比较ESAT-6 sfc数、CFP-10 sfc数及TBAg/PHA比值对EPTB的诊断价值。结果EPTB组和非EPTB组患者T-SPOT.TB检测结果阳性率分别为88.5%(185/209)和24.3%(76/313);EPTB组患者T-SPOT.TB检测结果阳性率显著高于非EPTB组(χ^(2)=206.840,P<0.05)。EPTB组患者T-SPOT.TB检测结果中ESAT-6 sfc数、CFP-10 sfc数、TBAg/PHA比值均显著高于非EPTB组,PHA sfc数显著低于非EPTB组(P<0.05)。根据受试者工作特征(ROC)曲线,TBAg/PHA比值诊断EPTB的特异度显著高于ESAT-6 sfc数和CFP-10 sfc数(P<0.05);ESAT-6 sfc数、CFP-10 sfc数、TBAg/PHA比值诊断EPTB的ROC曲线下面积和灵敏度比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论TBAg/PHA比值可显著提高T-SPOT.TB诊断EPTB的特异度,在EPTB诊断中具有较好的应用前景。

左氧氟沙星对肺结核大鼠肺组织自噬及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B通路的影响

目的探讨左氧氟沙星对肺结核大鼠肺组织自噬及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路的影响。方法按照随机数字表法将50只大鼠分为正常组、模型组及低、中、高剂量左氧氟沙星组,每组10只。正常组大鼠经尾静脉注射生理盐水,其余组大鼠经尾静脉注射结核杆菌悬液制备肺结核模型。造模后第2天开始,低、中、高剂量左氧氟沙星组大鼠每日分别灌胃6.5、13.0、26.0 mg·kg-1左氧氟沙星生理盐水溶液2 mL,正常组和模型组大鼠每日灌胃等体积的生理盐水,连续2个月。给药结束后处死大鼠取肺组织,采用苏木精-伊红染色观察各组大鼠肺组织病理学变化,免疫组织化学染色法检测各组大鼠肺组织中自噬标志分子微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)的表达,实时荧光定量聚合酶链反应和Western blot分别检测各组大鼠肺组织中Beclin1、Atg5、PI3K、磷酸化Akt(p-Akt)mRNA和蛋白表达。结果正常组大鼠肺组织未见炎症反应;模型组大鼠肺组织结构破坏,出现大量结核结节,呼吸道周围症性细胞浸润明显,肺实质有肺泡管、肺泡腔不规则扩大,出现干酪样坏死;低、中、高剂量左氧氟沙星组大鼠肺组织病理损伤程度较模型组明显改善,并随着药物处理剂量增加,损伤程度逐渐减轻。模型组和低、中剂量左氧氟沙星组大鼠肺组织中LC3B阳性细胞数显著多于正常组(P<0.05);高剂量左氧氟沙星组大鼠肺组织中LC3B阳性细胞数与正常组比较差异无统计学意义(P>0.05);低、中、高剂量左氧氟沙星组大鼠肺组织中LC3B阳性细胞数显著少于模型组(P<0.05);中剂量左氧氟沙星组与低、高剂量左氧氟沙星组大鼠肺组织中LC3B阳性细胞数比较差异无统计学意义(P>0.05);高剂量左氧氟沙星组大鼠肺组织中LC3B阳性细胞数显著少于低剂量左氧氟沙星组(P<0.05)。模型组和低、中剂量左氧氟沙星组大鼠肺组织中Beclin1 mRNA表达水平显著高于正常组(P<0.05);高剂量左氧氟沙星组与正常组大鼠肺组织中Beclin1 mRNA表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。与正常组比较,模型组和低、中、高剂量左氧氟沙星组大鼠肺组织中Atg5 mRNA表达水平显著升高,PI3K、p-Akt mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。与模型组比较,低、中、高剂量左氧氟沙星组大鼠肺组织中Beclin1、Atg5 mRNA表达水平显著降低,PI3K、p-Akt mRNA表达水平显著升高(P<0.05)。低、中剂量左氧氟沙星组大鼠肺组织中Beclin1、Atg5、PI3K mRNA表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05);中剂量左氧氟沙星组大鼠肺组织中p-Akt mRNA表达水平显著高于低剂量左氧氟沙星组(P<0.05)。与低剂量左氧氟沙星组比较,高剂量左氧氟沙星组大鼠肺组织中Beclin1、Atg5 mRNA表达水平显著降低,PI3K、p-Akt mRNA表达水平显著升高(P<0.05)。与中剂量左氧氟沙星组比较,高剂量左氧氟沙星组大鼠肺组织中Beclin1、Atg5 mRNA表达水平显著降低,PI3K、p-Akt mRNA表达水平显著升高(P<0.05)。与正常组比较,模型组和低、中剂量左氧氟沙星组大鼠肺组织中Beclin1蛋白表达水平显著升高,PI3K、p-Akt蛋白表达水平显著降低(P<0.05);高剂量左氧氟沙星组和正常组大鼠肺组织中Beclin1、PI3K、p-Akt蛋白表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05);模型组和低、中、高剂量左氧氟沙星组大鼠肺组织中Atg5蛋白表达水平均显著高于正常组(P<0.05)。与模型组比较,低、中、高剂左氧氟沙星量组大鼠肺组织中Beclin1、Atg5蛋白表达水平显著降低,PI3K、p-Akt蛋白表达水平显著升高,且呈剂量依赖性(P<0.05)。结论左氧氟沙星可能通过激活肺组织中PI3K/Akt信号通路、抑制自噬相关蛋白表达,降低肺结核大鼠肺细胞自噬水平,减轻肺损伤。

外周血Blimp1、IFN-γ、IL-10水平与重症肺结核的相关性分析

目的研究外周血B淋巴细胞诱导成熟蛋白1(Blimp1)、γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-10(IL-10)水平与重症肺结核(PTB)患者预后的相关性。方法收集本院2018年1月至2019年3月结核内科收治的重症肺结核患者92例作为研究对象,另选择同期来本院体检的42例正常健康人作为对照组。所有研究对象均采集空腹外周血标本,检测其单个核细胞Blimp1、IFN-γ、IL-10水平,分析上述因子与重症肺结核患者临床病理参数和预后的相关性。结果研究组患者Blimp1、IFN-γ、IL-10水平显著高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);急性生理与慢性健康(APACHE-Ⅱ)评分≥21分、多器官功能障碍评分(MODS)≥5分和预后差的患者Blimp1、IFN-γ、IL-10水平显著高于APACHE-Ⅱ评分<21分、MODS评分<5分和预后良好患者,差异具有统计学意义(P<0.05);单因素以及多因素Cox回归分析均证实高Blimp1、高IFN-γ、高IL-10、APACHE-Ⅱ评分≥21分和MODS评分≥5分均是导致重症肺结核患者预后不良的独立危险因素(P<0.05)。结论重症PTB患者外周血单个核细胞Blimp1、IFN-γ、IL-10水平呈高表达状态,且其高表达与预后密切相关。