信号转导与转录激活因子和肿瘤微环境对自然杀伤细胞功能及免疫监视影响的研究进展

自然杀伤(NK)细胞是先天性免疫系统的重要组成部分,通过细胞毒作用直接杀伤病毒侵染及恶性肿瘤转化的细胞,从而发挥机体的免疫监视功能,肿瘤细胞扩散转移是肿瘤治疗所面临的主要临床问题之一。NK细胞介导的免疫监视能有效防止肿瘤转移。本文主要对NK细胞的抗肿瘤作用、微环境对NK细胞杀伤功能的调控、信号转导与转录激活因子对NK细胞功能的影响进行综述,以期为后续NK细胞抗肿瘤的临床应用提供参考。

人血清中拉莫三嗪浓度快速测定的高效液相色谱法

目的建立简便快速测定人血清中拉莫三嗪(LTG)浓度的高效液相色谱法(HPLC)。方法采用甲醇和乙酸铅沉淀蛋白法处理LTG血清样本,以苯代三聚氰胺为内标,波长为207 nm的二极管阵列检测器检测LTG的响应度,采用ES Industries Sonoma C18(2)色谱柱(50.0 mm×2.1 mm,3μm)分离化合物,流动相A相为超纯水,B相为纯甲醇,体积分数20%甲醇洗脱,流速为0.6 mL·min^(-1),进样量20μL,柱温40℃,建立检测LTG最适的液相条件及预处理方法,并依据《中国药典》2015年版通则中"生物样品定量分析方法验证指导原则"对所建方法的选择性、标准曲线、精密度与准确度、残留及稳定性进行验证。结果 LTG在1.18~37.75 mg·L^(-1)范围内线性关系良好(r=0.999),在定量下限(1.18 mg·L^(-1))、低浓度(2.36 mg·L^(-1))、中浓度(18.88 mg·L^(-1))、高浓度(28.31 mg·L^(-1))LTG的批内与批间精密度的相对标准偏差均小于13.2%,准确度符合要求。经甲醇和乙酸铅沉淀蛋白法预处理过的LTG血清样本室温放置24 h后测定结果稳定,未经处理的血清样本于2~8℃冰箱存放1周后测定结果稳定。结论建立了分析速度快、操作简便、选择性好、灵敏度高、符合生物样品分析要求的测定LTG临床血药浓度的HPLC分析方法。

犬孕酮几种检测方法比较

犬是季节性发情动物，发情周期不同于其他动物，排卵时间在发情期间变化复杂，其最佳配种时间判定较网难。常规判定方法主要有滴血推定时间判定法、阴门观察推定法、阴门腹侧检查法、试情法等。仪器检测法主要有阴道镜检测法、阴道涂片检测法、孕酮检测法、唾液检测法、测卵仪检测法和超柃测法等。确定母犬排卵时间的范围最可靠的方法是测定孕酮。孕酮的测定方法主要有电化学发光法、免疫荧光法、ELISA法、放射免疫法。本文针对犬孕酮的检测方法进行综述。

T淋巴细胞对高脂饮食引起的肠道炎症的影响

目的:探讨T淋巴细胞在高脂饮食导致的肠道炎症中所起的作用。方法:采用了T淋巴细胞缺失(CD3ε敲除)的小鼠模型,C57BL/6J野生型小鼠作对照,高脂喂养16周。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测结肠组织中的炎性因子水平,苏木精-伊红(HE)染色直接观察肠道形态,检测肠道肌层厚度,同时通过免疫组织化学技术(IHC)观察肠道组织中免疫细胞的浸润情况。结果:高脂饮食饲喂小鼠16周后,小鼠体重明显增加。qRT-PCR检测显示,与正常饮食的野生型小鼠组相比,高脂饮食的野生型小鼠结肠组织中IL-1β(P<0. 01)、IL-5(P<0. 05)、TNF-α(P<0. 05)、IFN-γ(P<0. 05)以及IL-6(P<0. 05)表达水平明显上调; HE染色显示高脂饮食组结肠肌层明显变薄,同时免疫组化的结果显示结肠组织中巨噬细胞浸润增强。以高脂饮食野生型小鼠为对照,高脂饮食的T淋巴细胞缺失小鼠的结肠组织中IL-1β(P<0. 01)、IL-6(P<0. 05)、IFN-γ(P<0. 05)、IL-5(P<0. 05)以及TNF-α(P<0. 01)基因水平下调; HE染色显示高脂饮食的T淋巴细胞缺失小鼠结肠肌层增厚,同时免疫组化结果显示结肠组织中巨噬细胞浸润减少。结论:T淋巴细胞对高脂饮食导致的肠道炎症有促进作用。

部分规模化场猪瘟免疫状况监测与分析

养猪业迅速发展，规模也在逐年扩大，已成为农村经济的重要增长点和支柱产业。但是从不正规场家引进猪，防疫意识薄弱，卫生管理失误等众多原因，使许多传染病的发生和流行也变得相当复杂。猪瘟是危害养猪业最重要的疫病之一。目前我国猪瘟呈散发流行，其规模小，强度轻，无季节性，主要是非典型性猪瘟，种猪的持续感染和初生仔猪的先天感染较为普遍。免疫接种是预防猪瘟的重要措施。笔者对2015年3月到2016年5月期间部分规模化猪场的猪瘟免疫状况进行监测调查，并针对目前免疫状况的原因进行了分析和提出了对策，从而为猪场制定科学的免疫程序和猪场猪瘟的控制与净化提供科学依据。现将结果报告如下。

EGR1对HTLV-1病毒感染后宿主细胞自噬的影响

目的探讨早期生长反应基因1（EGR1）对成人T淋巴细胞白血病病毒1型（HTLV-1）感染后宿主细胞自噬的影响。方法获得病毒早期感染模型，免疫印迹检测病毒核心蛋白p19、宿主细胞EGRl的表达：荧光素酶报告基因检测EGRl的5’端调控序列转录活性；筛选有效的EGRlsiRNA，将EGR1 siRNA转染HeLa细胞，随后HTLV．1病毒阳性细胞系MT2与HeLa细胞进行共培养，免疫印迹检测病毒核心蛋白p19、EGR1、自噬相关蛋白LC3；real-timePCR检测病毒载量；免疫荧光检测自噬体数目。结果共培养后，宿主细胞EGR1蛋白表达和调控序列荧光素酶活性逐渐增强，且EGRl蛋白的表达与细胞自噬水平呈现正相关；筛选了有效的EGRlsiRNA，命名为siE2；共培养模型干扰EGRI的表达后，病毒核酸载量、核心蛋白p19的表达以及自噬相关蛋白LC3B／LC3A比例均下调，同时伴有胞内自噬体数目的减少（P〈0．01）。结论EGR1与HTILV-1感染后宿主细胞自噬水平和病毒复制密切相关。

甘露聚糖结合凝集素对白假丝酵母菌感染鼠体内Treg/Th17细胞免疫平衡的调节作用

目的研究甘露聚糖结合凝集素(mannan-binding lectin,MBL)对白假丝酵母菌感染鼠体内Th17、Treg细胞分化的调节。方法MBL基因敲除型(MBL^-/-)和野生型(WT)C57BL/6小鼠分4组,2×10^7CFU白假丝酵母菌(C.albicans)对感染组小鼠腹腔注射;感染3d后取小鼠肝脏和肾脏病理切片,HE染色和PAS染色观察小鼠病理组织学变化;7d后摘除小鼠眼球取静脉血流式细胞术分析小鼠体内Treg和Th17细胞;静脉抗凝血ELISA检测小鼠体内细胞因子IL-10和IL-17A的含量;颈椎脱臼处死小鼠后取脾脏细胞MACS磁性分选获得CD4^+T细胞,提取总RNA,qRT-PCR检测其体内Foxp3、RORγtmRNA的表达;取小鼠脾脏CD4^+T细胞,提取总蛋白,Western blot检测Foxp3、RORγt蛋白表达水平。结果成功建立了C.albicans感染鼠模型,和WT感染组相比较:流式分析显示MBL^-/-感染组小鼠体内Th17细胞亚型数目比例增高,Treg细胞亚型数目比例降低;ELISA结果显示MBL^-/-感染组小鼠体内IL-17A水平明显增高,IL-10水平降低;qRT-PCR结果显示MBL^-/-感染组小鼠体内转录因子RORγtmRNA表达升高,转录因子Foxp3mRNA表达降低;Western blot印迹结果表明MBL^-/-感染组小鼠体内RORγt蛋白表达量明显增多,而Foxp3蛋白表达量减少。结论在C.albicans感染中,MBL促进了CD4^+T细胞向Treg细胞亚型诱导分化,抑制了CD4^+T细胞向Th17细胞亚型的诱导分化,从而调节了C.albicans感染鼠体内Treg/Th17细胞的免疫平衡。

LC-MS/MS法测定人血浆中利培酮和9-羟基利培酮的浓度及临床应用

目的:建立简单快速的液相串联质谱法(LC-MS/MS)测定人血浆中利培酮及其代谢物9-羟基利培酮的浓度。方法:血浆样本采用甲醇沉淀蛋白法处理,以地西泮为内标,采用ES Industries Sonoma C18(2)色谱柱(100 mm×2.1 mm,3μm)分离化合物;流动相包括A-50%甲醇水溶液(含6 mmol·L^(-1)乙酸铵)、B-0.1%甲酸乙腈溶液;梯度洗脱,总流速0.60 mL·min-1;进样量10μL;柱温30℃。采用正离子MRM模式扫描,电喷雾电离,利培酮、9-羟基利培酮及地西泮内标离子通道分别为m/z411.3→m/z191.1、m/z427.2→m/z207.0和m/z285.1→m/z193.1。依据《中国药典》(2015年版)通则中9012"生物样品定量分析方法验证指导原则"对所建方法进行验证。结果:利培酮在0.16~101.40μg·L^(-1)的浓度范围内线性关系良好(r>0.999),9-羟基利培酮在0.40~256.80μg·L^(-1)浓度范围内线性关系良好(r>0.999);在定量下限,低、中、高浓度批内与批间精密度的标准偏差(RSD)均小于10.9%,准确度符合要求;含分析物血浆样品在不同储存条件下结果稳定。该法已成功应用于临床样本治疗药物监测。运用此方法监测分析一千多份临床样本得出总利培酮临床实际测定浓度范围为13.30~93.22μg·L^(-1)。结论:本研究建立了测定血浆中利培酮及其代谢物9-羟基利培酮浓度的快速、简便、实用的LC-MS/MS方法。利培酮临床实际测定浓度范围相比于神经精神药理学与药物精神病学协会专家组推荐治疗浓度范围更宽,且多次监测的患者中女性血药浓度相对于男性更趋于稳定。

甘露聚糖结合凝集素对Th17细胞诱导分化的影响

目的 研究甘露聚糖结合凝集素（mannan-binding lectin,MBL）对辅助性T细胞17（T helper cell 17,Th17）诱导分化的影响.方法 通过MACS分选器从人新鲜脐带血液中分选获得CD4＋T细胞,对照组用anti-CD3 McAb和anti-CD28 McAb活化CD4＋T细胞并加入适当浓度的IL-6和TGF-β1作为诱导剂,在对照组的基础上加入不同浓度的MBL作为实验组,细胞培养72 h后,利用流式细胞术（FACS）检测各组中Th17细胞比例变化情况;Q-PCR分别检测未加MBL对照组和不同浓度MBL实验组Th17细胞核转录因子维甲酸孤儿受体-γt（retinoid-related orphan receptor-γ-t,RORγt）mRNA表达水平;ELISA检测各组细胞上清液中IL-17A的含量;FACS检测Th17细胞在MBL-/-小鼠和WT小鼠中的变化.结果 FACS分析表明,经体外72 h培养,与对照组相比,MBL能够显著降低Th17细胞的比例;Q-PCR结果显示,MBL能够显著降低RORγt mRNA的表达;ELISA结果显示,MBL能够显著降低IL-17A的表达水平;动物实验结果表明,与WT小鼠相比,MBL-/-小鼠CD4＋RORγt＋Th17细胞比例显著上升.结论 MBL能够抑制CD4＋T细胞向Th17细胞诱导分化.

高效液相色谱-串联质谱方法测定血清中氨磺必利、舒必利、米那普仑、西酞普兰、文拉法辛及O-去甲文拉法辛浓度

目的:建立人血清中氨磺必利、舒必利、米那普仑、西酞普兰、文拉法辛及O-去甲文拉法辛浓度同时测定的LC-MS/MS方法,实现临床样本的血药浓度监测。方法:以去甲基氨磺必利和D,L-N,N-二去甲文拉法辛为内标,甲醇-乙腈溶剂沉淀蛋白;使用ES Sonoma C18(2)色谱柱(50 mm×2.1 mm,3μm)以甲醇和6 mmol·L^-1乙酸铵水溶液为流动相,梯度洗脱;使用三重四级杆进行检测,采用电喷雾的离子源,在正离子模式下以MRM的扫描模式进行定量分析。结果:方法经验证,空白基质的干扰小,注射完高浓度样品后在空白样品中的残留符合要求,高浓度样品可以稀释2倍后进行分析,基质因子变异系数RSD小于15%,处理后的样品12 h内分析稳定、未处理样本4℃冰箱存放1周稳定,氨磺必利在15.53~497.00 ng·mL^-1、舒必利在18.03~577.00 ng·mL^-1、米那普仑在7.91~253.05 ng·mL^-1、西酞普兰在9.71~310.62 ng·mL^-1、文拉法辛在8.62~275.83 ng·mL^-1、O-去甲文拉法辛在9.19~293.92 ng·mL^-1范围内均具有良好的线性关系(R2>0.99),方法的准确度高、精密度好。结论:该方法的样本处理简单,样本分析时间短,可以实现大量临床样本的快速分析,已成功应用于临床服用氨磺必利、舒必利、米那普仑、西酞普兰或文拉法辛的患者的血药浓度监测。

Westgard西格玛规则在血细胞分析室内质量控制方案设计中的应用

血细胞分析不仅是诊断各种血液病的主要依据,而且对其他系统疾病的诊断和鉴别诊断也可提供许多重要信息,是临床医学检验中最常用、最重要的基本检验内容。因此,实验室须采取相应的质量管理措施,以确保其检测结果的准确性。其中用全血质控物开展室内质量控制既是行业规范要求,也是实验室质量管理的重要手段,它在监测评价分析系统稳定性确保当天结果准确并及时发出中发挥着重要作用。