细胞生理条件下壳聚糖微胶囊包埋肝细胞

从乙酰化率15.3%的市售壳聚糖(F ifteen N-acety lated ch itosan,FNC)出发制备酰化率50%的壳聚糖衍生物(H a lf N-acety lated ch itosan,HNC),探讨其在细胞生理条件下与异丁烯酸(M ethacry lic ac id,M AA)-羟乙基异丁烯(Hydroxyethy l m ethacry late,HEM A)-甲基丙烯酸甲酯(M ethy l m ethacry late,MM A)三元共聚物(M AA-HEM A-MM A)制备微胶囊包埋肝细胞的可行性。微囊化细胞实验结果表明,与体外表面培养实验相比,生理条件下基于HNC构建的三维正电微环境有利于支持肝细胞的体外功能,且制备的微胶囊在培养过程中具有较好的渗透性及结构稳定性。

荧光标记复合PCR扩增微卫星位点的构建与优化

采用毛细管电泳技术,构建并优化了荧光标记复合PCR同时扩增多个微卫星位点。根据设计所扩增微卫星位点的期望长度,将9个微卫星位点分成两组,5个位点用FAM(蓝色)标记,4个位点用HEX(绿色)标记;两种荧光类型分组优化,用琼脂糖胶电泳检测。荧光标记的复合PCR扩增8个中华绒螯蟹样品的9个微卫星位点,采用ABI3730xl毛细管电泳检测,以ROX500(红色)为长度标准物,结果经Genemapper3.5软件分析,检测结果表明毛细管电泳检测荧光标记复合PCR产物不仅精确读取微卫星位点的长度(分辨率高达1bp),还能区分微卫星位点复制时滑链所引起的"回声斑";调整各微卫星位点引物比例使所有位点扩增强弱均匀。逐一检测复合PCR基本参数(dNTP浓度、PCR程序和模板DNA用量)对复合PCR产物的影响,优化PCR。结果表明通过毛细管电泳检测荧光标记复合PCR产物来读取微卫星位点的基因型具有精确性、高效性和稳定性。