大型医院综合科研实验室人员生物安全教学的实践与体会

目前，国内大型医院特别是各医科大学教学医院，纷纷建立自己的中心实验室，为医学科研和研究生培养提供场所，保证大型仪器和专职科研人员等资源的集约式使用，易于形成良好的学术交流氛围，有益于科研产出。但大型实验室由于人员流动性大，所涉及试剂、动物和各种生物标本种类繁多，容易造成各类安全特别是生物安全事件。实验室生物安全是指为避免微生物和医学实验室各种活动中生物因子对人、环境和社会造成的危害或潜在危害，而采取的防护措施、人员培训及管理措施，以达到对人、环境和社会的安全防护目的的一种综合行为。但目前，在国内进行系统生物安全教学的实验室非常有限，近期，本实验室将实验室生物安全教育作为研究生入室后的培训课程，对研究生们的生物安全和自身防护意识的培养起到了很好效果，现将本实验室的教学实践和体会总结如下。

打造特色技术平台，加快研究生科研产出——医院中心实验室通用技术平台建设的体会

大型医院中心实验室是我国培养医学相关专业研究生的重要基地，技术平台的建设是保障实验室高效运行的基础。本文结合本单位实际，在充分调研医学科学学位研究生关于医学实验技术需求的基础上，就如何建立和完善具有一定特色的通用医学实验技术平台，加快研究生科研产出进行分析和讨论。

梯度洗脱高效液相法测定脑组织三磷酸腺苷及其代谢产物

梯度洗脱高效液相法测定脑组织三磷酸腺苷及其代谢产物Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆａｄｅｎｏｓｉｎｅｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔｅａｎｄｉｔｓｍｅｔａｂｏｌｉｔｉｅｓｉｎｂｒａｉｎｔｉｓｓｕｅｂｙｇｒａｄｉｅｎｔｅｌｕｔｉｏｎｈｉｇｈ－ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ...

巴马汀对糖尿病小鼠主动脉的保护作用及机制研究

目的:研究巴马汀对糖尿病小鼠主动脉的保护作用并探讨其机制。方法:8周龄db/db小鼠32只随机分为糖尿病模型组、巴马汀低剂量组[75 mg/(kg·d)]、中剂量组[150 mg/(kg·d)]、高剂量组[300 mg/(kg·d)],并以8只db/m小鼠作为对照组。各组小鼠经灌胃给药12周,糖尿病模型组和对照组小鼠给予等量的生理盐水。通过HE染色观察各组小鼠主动脉组织病理变化情况;通过透射电镜检测各组小鼠主动脉超微结构变化;检测各组小鼠空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)和血脂(总胆固醇和甘油三脂);并检测各组小鼠血清中总抗氧化力(total antioxidant capacity,T-AOC)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、活性氧(reactive oxygen species,ROS)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的水平;通过Western blot检测各组小鼠主动脉组织中血红素加氧酶1(heme oxygenase-1,HO-1)和核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)的表达。结果:HE染色结果表明巴马汀治疗后的小鼠主动脉组织病变程度明显降低;透射电镜结果表明巴马汀治疗后的小鼠主动脉组织超微结构损伤显著减轻;与糖尿病模型组小鼠相比,巴马汀治疗后的小鼠空腹血糖和血脂均显著降低(P=0.000,P=0.000);血清MDA和ROS水平均明显降低(P=0.000,P=0.000),而SOD活性和T-AOC则均显著增强(P=0.000,P=0.000),主动脉组织中Nrf2和HO-1蛋白的表达水平明显提高(P=0.000,P=0.000),并且各剂量组间差异均显著(P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000)。结论:巴马汀可以有效保护db/db小鼠主动脉组织,其机制可能与降低糖尿病小鼠的空腹血糖和血脂含量,激活Nrf2/HO-1信号通路并减轻氧化应激反应有关。

护理干预对腹腔热疗联合TP方案治疗中晚期卵巢癌的影响

目的:探讨护理干预对腹腔热疗联合TP方案治疗中晚期卵巢癌的影响。方法:选取接受腹腔热疗联合TP方案治疗的中晚期卵巢癌患者234例,随机分为对照组和干预组各117例。对照组给予常规护理,干预组在化疗和热疗前、中、后提示患者注意事项、密切关注患者生命体征及给予相关护理。对比分析2组患者近期疗效、不良反应和远期生存率。结果:干预组近期总有效率为69.2%,显著高于对照组的51.2%(P<0.01);2组患者白细胞减少和过敏反应发生率差异均无统计学意义(P>0.05),干预组恶心呕吐、肝功能损伤发生率均低于对照组(P<0.05)。干预组1年和3年生存率分别是86.3%和54.7%,均高于对照组的72.6%和41.9%(P<0.05)。结论:合理的护理干预方案不仅有助于腹腔热疗联合TP方案治疗中晚期卵巢癌患者近期疗效的提高,减少治疗后并发症,还能提高患者远期生存率。

脾切除后兔红细胞膜表面形态改变的观察

本文应用扫描电镜技术研究日本大耳白兔脾切除后红细胞膜表面形态改变。正常红细胞形态为双面凹形,脾切除后出现明显的异形红细胞,其大小不一,形态不规则,部分红细胞膜表面可见一个或多个半球形隆起。结果表明脾脏对维持正常红细胞形态非常重要,单核吞噬细胞系统及淋巴结不能完全替代这种功能。

肺癌患者IL－2RmRNA表达的临床意义

制备了人ＩＬ－２ＲａｃＤＮＡ探针，采用斑点印迹杂交法对４６例肺癌患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）ＩＬ－２ＲｍＲＮＡ的表达水平进行研究。结果发现ＩＬ－２ＲｍＲＮＡ的表达程度与肿瘤转移关系密切。肺癌无转移组：ＩＬ－２ＲｍＲＮＡ表达显著高于对照组与转移组（Ｐ＜０．００１），且与患者的组织学类型及病期有明显关系。转移组：ＩＬ－２Ｒ表达显著低于对照组（Ｐ＜０．００１），提示此组病人存在免疫抑制．其抑制可能存在细胞活化阶段或ＩＬ－２Ｒ的转录水平。同期所测血清肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）在两组患者无明显差异。本组结果提示：ＩＬ－２ＲｍＲＮＡ表达水平与患者预后密切相关。

CA125在胃癌中的表达及c-Jun对CA125的调节机制

目的探讨糖类抗原CA125在胃癌中的表达差异,及在胃癌细胞中转录因子c-Jun对CA125的转录调节水平和可能的调控机制。方法 (1)选取胃癌患者(恶性组)、健康体检者(正常对照组)的血清为研究对象。检测血清CA125含量差异,检测胃癌患者血清CA125含量水平,并分析其与临床各参数间关系。(2)在胃癌细胞株823和803中,敲低c-Jun的表达水平,利用蛋白印迹法及实时定量PCR分别检测、分析CA125的蛋白和核酸水平变化。(3)敲低c-Jun的表达水平,利用荧光素酶报告基因实验检测CA125的转录活性。结果 CA125在胃癌组患者血清中的含量显著高于正常组(P<0.05),单因素结果分析显示胃癌患者外周血中CA125含量与肿瘤的浸润深度、远处转移、淋巴转移相关(P<0.05)。同时,体外实验提示,敲低胃癌细胞803、823中c-Jun的表达,发现CA125的mRNA水平也随即下调(P<0.05),但其蛋白水平并未受影响,而且通过荧光素酶报告基因实验发现,干扰c-Jun可显著抑制CA125基因启动子的转录活性,荧光素酶活性差异有统计学意义(P<0.05)。结论 CA125作为一种肿瘤标记物在胃癌中的表达存在差异,其差异、转移等因素可能受细胞内转录因子c-Jun的调节。

利用Excel程序对医药学计数资料进行χ^2检验

目的 介绍一种简单、方便、快速的方法 ,对需进行 χ2 检验的医药学数据进行统计处理。方法 利用Excel程序 ,通过一定的公式输入 ,使其自动计算。结果 利用该法只需第一次在自己的计算机上输入公式 ,以后只将数据改变 ,即刻给出该组数据的 χ2 值和P值。结论 该法方便、准确。

抗肺癌单抗3C_9识别的抗原检测及其血清诊断价值初步探讨

采用单克隆抗体BA—ELISA结合抑制法,检测了血清中抗肺癌单抗3C_9识别的抗原(3C_9Ag),共检测肺癌50例,健康成人40例,肺部非肿瘤疾病21例。同时用放免法测定血清CEA。研究发现:3C_gAg对肺癌诊断敏感性为76％,特异性90.5％,准确性为80.3％;在NSCLC具有较高阳性率,其明显升高见于Ⅱ、Ⅲ期肺癌病人。与CEA相比,3C_9Ag在诊断肺癌的敏感性、准确性方面更为优越;二者联合检测可提高肺癌检出率。

Mibefradil通过下调FoxO1表达改善HepG2细胞的胰岛素抵抗

目的探索Mibefradil在体外对胰岛素抵抗HepG2细胞的作用。方法将HepG2细胞分为对照组、棕榈酸盐(Palmitate,PA)诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗模型组、药物溶剂(DMSO)组、低剂量(0.025μmol/L)Mibefradil组、高剂量(0.05μmol/L)Mibefradil组,通过检测各组糖原合成及葡萄糖消耗,观察Mibefradil对胰岛素抵抗HepG2细胞的改善作用。用qRT-PCR、Western blot检测各组Fox O1,糖异生、糖原分解限速酶,即:磷酸烯醇式丙酮酸羧基激酶(PEPCK)、葡萄糖-6-磷酸激酶(G6Pase)的mRNA、蛋白相对表达量,明确转录因子Fox O1及其靶基因的表达水平。结果相比于对照组,HepG2细胞胰岛素抵抗模型组的糖原合成量[(3.28±0.74)μg/μL vs(9.14±0.33)μg/μL,P<0.01]及葡萄糖消耗量[(1.31±0.49)nmol/μg vs(5.87±2.26)nmol/μg,P<0.01]明显下降;经Mibefradil干预后,胰岛素抵抗HepG2细胞的糖原合成及葡萄糖消耗得到明显改善,且高剂量组的糖原合成[(7.09±0.60)μg/μL vs(5.73±0.16)μg/μL,P<0.01)]及葡萄糖消耗[(6.45±0.02)nmol/μg vs(5.61±0.29)nmol/μg,P<0.01]显著高于低剂量组,表明Mibefradil可改善HepG2细胞的胰岛素抵抗。qRT-PCR及Western blot检测结果表明,胰岛素抵抗HepG2细胞的Fox O1、PEPCK、G6Pase的表达量均显著增加(P<0.01);经Mibefradil干预后,其表达量呈剂量依赖性下降(P<0.05)。结论Mibefradil对胰岛素抵抗HepG2细胞具有改善作用,此作用可能与下调Fox O1的表达有关。

心内直视手术中血浆乳酸含量的观察

保持酸碱平衡是低温体外循环下心内直视手术中至关重要的问题,对于心脏复苏、术后心血管功能的稳定都有重要意义。本文观察了心内直视术73例259次血浆乳酸含量,并探讨其与酸碱平衡的关系,现报道如下。

单核巨噬细胞摄取极低密度脂蛋白机制的初步研究

目的 探讨单核巨噬细胞摄取极低密度脂蛋白 (VLDL)的机制和途径。 方法 观察单核巨噬细胞结合VLDL的活性、载脂蛋白E(apoE)配体活性及清道夫受体A(SRA)抗体的作用 ,分析VLDL对单核巨噬细胞SRAmRAN、蛋白质表达以及VLDL受体 (VLDLR)基因转录的影响。 结果 (1)单核巨噬细胞既能结合VLDL ,又能结合缺乏apoE配体活性的VLDL(tryp VLDL) ,其总结合能力与2种脂蛋白浓度呈显著正相关 (前者r1=0 71,后者r2 =0 6 3) ,但与结合VLDL能力相比 ,巨噬细胞结合tryp VLDL的能力下降约 5 0 % ;(2 )SRA抗体对单核巨噬细胞结合12 5I VLDL活性无显著影响 ;(3)VLDL显著增加巨噬细胞VLDLR基因转录 ,而对巨噬细胞SRAmRNA及蛋白质表达作用不明显。 结论 单核巨噬细胞可能通过apoE依赖 (可能是VLDLR)或非依赖途径介导的VLDL摄取 ,SRA在此过程中不起重要作用。

长链非编码RNA KCNQ1DN对尿源干细胞的干性调控研究

目的:探讨长链非编码RNA KCNQ1DN在尿源干细胞干性调控中的作用。方法:收集健康成人(n=6)尿液,提取尿源干细胞并传代培养,分别收集P3、P5和P7代尿源干细胞,并应用实时荧光定量PCR(RTPCR)检测KCNQ1DN基因表达水平。构建靶向干扰KCNQ1DN的慢病毒载体LV3-shKCNQ1DN,转染P2代尿源干细胞并培养96小时后荧光显微镜观察感染效率,RT-PCR检测KCNQ1DN的表达,CCK8法检测细胞的增殖,RT-PCR和Western blotting检测干性相关转录因子c-Myc、Nanog、Rex1的mRNA及蛋白的表达。结果:随着尿源干细胞传代代数的增加,KCNQ1DN的表达量逐渐升高(P<0.05)。shKCNQ1DN转染尿源干细胞后KCNQ1DN的表达显著降低(P<0.01),敲低尿源干细胞中KCNQ1DN的表达能够促进尿源干细胞的增殖并上调干性相关转录因子c-Myc、Nanog和Rex1mRNA及蛋白的表达。结论:随着尿源干细胞的生长,长链非编码RNA KCNQ1DN的表达逐步被激活,并对尿源干细胞的干性起到负性调控作用。

沉默PES1基因表达对结肠癌细胞恶性表型的抑制作用

目的 :探讨核仁蛋白PES1(pescadillo homolog 1)对结肠癌细胞恶性表型的影响。方法 :构建针对PES1基因的sh RNA干扰质粒,将其转染结肠癌HCT116细胞,经G418筛选耐药细胞克隆,蛋白质印迹法验证靶基因的沉默效果。采用MTT法、平板克隆形成实验、裸鼠成瘤实验、Transwell迁移及侵袭实验和FCM法分别检测沉默PES1表达对HCT116细胞增殖、克隆形成、体内成瘤、体外迁移和侵袭以及凋亡的影响,并采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测细胞增殖和凋亡相关蛋白的表达水平。结果 :成功获得PES1稳定低表达的结肠癌HCT116细胞。沉默PES1表达后,HCT116细胞的增殖、克隆形成和裸鼠体内成瘤能力均明显降低(P值均<0.01),细胞迁移和侵袭能力明显减弱(P值均<0.01),细胞凋亡水平明显提高(P<0.05)。PES1表达被抑制后,HCT116细胞中细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P值均<0.01),而Bcl-2相互作用杀伤蛋白(Bcl-2 interacting killer,BIK)、prune同源蛋白2(prune homolog 2,PRUNE2)和基质金属蛋白酶组织抑制因子3(tissue inhibitor of matrix metalloproteinase 3,TIMP3)的m RNA表达水平明显升高(P值均<0.01)。结论 :PES1可能对结肠癌细胞的多种恶性表型起促进作用。