新疆5种臭阿魏对小鼠宫颈癌U14细胞的体内外抑制作用研究

目的研究新疆5种臭阿魏乙醇提取物的体内及体外对鼠源性宫颈癌U14细胞的抑制作用。方法制备新疆5种臭阿魏根的乙醇提取物,MTT比色法检测5种臭阿魏乙醇提取物的不同浓度组(9.375、18.75、37.5、75、150、300μg/mL)对小鼠宫颈癌U14细胞的增殖抑制作用。建立宫颈癌U14小鼠荷瘤模型,随机分组后连续灌胃给药12 d,剥取肿瘤组织,计算各组抑瘤率。检测各组小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、血肌酐(Cre)、胱抑素C(Cyc C)的值。HE染色观察各组肿瘤病理组织形态。结果大果阿魏、新疆阿魏、托里阿魏、阜康阿魏、圆锥茎阿魏乙醇提取物对小鼠宫颈癌U14细胞的IC_(50)分别为50.84、59.55、133.4、181.7、202.2μg/mL,提示大果阿魏抑制作用最强,新疆阿魏次之,托里阿魏、阜康阿魏、圆锥茎阿魏的抑制作用较差。大果阿魏与新疆阿魏高、低剂量组小鼠的瘤重与模型组相比较明显减轻(P<0.05)。5种臭阿魏均有一定抑瘤作用,其中大果阿魏高、低剂量组及新疆阿魏高、低剂量组的抑瘤效果更好,抑瘤率分别为47.12%、45.19%、49.10%、40.13%。与正常对照组相比,各阿魏给药组对小鼠肝、肾功能均无明显影响,顺铂组的胱抑素C显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论大果阿魏及新疆阿魏的乙醇提取物抗宫颈癌活性好。

新疆5种香阿魏醇提物抗胃癌作用初步研究

目的探讨新疆5种香阿魏(准噶尔阿魏、多伞阿魏、山地阿魏、全裂叶阿魏、荒地阿魏)醇提物的抗胃癌作用。方法以质量浓度分别为0,0.3,1,3,10μg/mL的香阿魏乙醇提取物干预成年血管标记绿色荧光转基因斑马鱼胚胎模型,荧光显微镜下观察斑马鱼节间血管长度并计算血管新生抑制率。以香阿魏乙醇提取物干预人胃癌细胞SGC-7901,采用划痕愈合实验检测细胞迁移情况并计算迁移率,MTT法检测细胞增殖情况并计算增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡情况并计算凋亡率,实验均设正常对照(培养基+细胞)。结果准噶尔阿魏、多伞阿魏、山地阿魏、全裂叶阿魏、荒地阿魏醇提物的模型斑马鱼胚胎节间血管新生抑制率分别为50.12%,1.14%,1.37%,7.80%,8.98%;多伞阿魏及荒地阿魏醇提物作用48 h时的细胞迁移率分别为(8.54±7.68)%及(26.88±4.95)%,均显著低于正常对照的(90.68±5.19)%(P<0.05);上述5种香阿魏醇提物对于细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为70.91,108.69,71.48,61.20,81.20μg/mL;细胞凋亡率分别为29.50%,12.30%,24.90%,33.40%,14.00%。结论新疆5种香阿魏均可有效发挥抑制血管生成、细胞迁移、细胞增殖及促细胞凋亡的作用;其中准噶尔阿魏和全裂叶阿魏醇提物的抗胃癌作用较好。

5种新疆香阿魏对结肠癌细胞增殖抑制、促凋亡及逆转耐药作用的研究

通过MTT法和流式细胞术检测5种新疆香阿魏(准噶尔阿魏、多伞阿魏、山地阿魏、全裂叶阿魏、荒地阿魏)乙醇提取物对小鼠结肠癌CT-26.WT细胞的增殖抑制及促凋亡作用,并通过MTT法检测5种新疆香阿魏乙醇提取物对人结肠癌耐长春新碱HCT-8/VCR细胞的安全给药浓度及逆转耐药作用。结果发现,5种新疆香阿魏乙醇提取物均对小鼠结肠癌CT-26.WT细胞有增殖抑制作用;全裂叶阿魏、准噶尔阿魏乙醇提取物的抑制作用较好,IC_(50)值分别为20.93 mg·L^(-1)、22.19 mg·L^(-1)。全裂叶阿魏乙醇提取物对小鼠结肠癌CT-26.WT细胞有较明显的促凋亡作用,凋亡率达到90.26%。5种新疆香阿魏乙醇提取物均可抑制HCT-8/VCR细胞的增殖,其中逆转耐药作用最佳的是准噶尔阿魏乙醇提取物。表明,全裂叶阿魏、准噶尔阿魏对CT-26.WT细胞的增殖抑制、促凋亡作用较明显,并且准噶尔阿魏对HCT-8/VCR细胞具有较好的逆转耐药作用,准噶尔阿魏、全裂叶阿魏均具有一定的抗肿瘤效果,值得更进一步的深入研究。

托里阿魏挥发油的GC-MS指纹图谱及抗宫颈癌作用研究

目的建立托里阿魏挥发油的气相色谱-质谱(GC-MS)指纹图谱,并考察托里阿魏挥发油的抗宫颈癌作用。方法采用有机溶剂提取法提取托里阿魏根的挥发油,并通过GC-MS鉴定所含成分。通过MTT比色法考察不同浓度托里阿魏挥发油对人宫颈癌Hela细胞增殖的抑制作用。采用Transwell法检测托里阿魏挥发油对人宫颈癌Hela细胞迁移、侵袭能力的影响。应用流式细胞术检测托里阿魏挥发油作用下的细胞凋亡率。结果托里阿魏挥发油中鉴别出58种化学成分,含量最多的是孕酮。托里阿魏挥发油对人宫颈癌Hela细胞的增殖有一定的抑制作用,IC50为55.21μg/ml。托里阿魏高、低剂量组与对照组相比,迁移和侵袭细胞数量显著减少(P<0.01)。结论托里阿魏挥发油中含量最高的是酮类化合物。托里阿魏提取物有一定的抗肿瘤作用。

基于快速型心律失常大鼠模型优选白喉乌头炮制品

目的优选可预防模型大鼠快速型心律失常的白喉乌头炮制品。方法采用哈萨克族炮制法,分别浸泡白喉乌头生品12 h和24 h,加甘草和黑豆共同煎煮1,2,3,4 h,得8种炮制品。将96只大鼠随机分为空白对照组(等体积生理盐水),模型组(等体积生理盐水),白喉乌头生品药物组(简称生药组,0.4 g/kg),白喉乌头炮制品8个组(1.2 g/kg,分别记为12 h-1 h组、12 h-2 h组、12 h-3 h组、12 h-4 h组、24 h-1 h组、24 h-2 h组、24 h-3 h组、24 h-4 h组),胺碘酮组(5 mg/kg),各8只。各组大鼠每天1次灌胃相应药物或生理盐水,连续14 d后空白对照组大鼠尾静脉注射等体积生理盐水,其余各组大鼠均注射10 mg/mL乌头碱(3.125 mg/kg)以复制快速型心律失常模型。检测大鼠的心电图,显微镜下观察大鼠的心脏组织病理形态,采用酶联免疫吸附法检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)水平,检测心肌三磷酸腺苷(ATP)酶活性,采用免疫组化染色法检测心脏组织Cx45蛋白表达水平。结果24 h-1 h组大鼠未出现心室颤动(室颤)、室性心动过速(室速)、期前收缩(早搏)症状,其余炮制品7个组及胺碘酮组大鼠均出现早搏及室速的时间均晚于模型组。模型组大鼠心肌纤维排列紊乱,心肌纤维断裂较多;炮制品8个组及胺碘酮组大鼠心肌纤维排列均较规则,心肌纤维断裂较少,心肌细胞水肿损伤程度降低。与模型组比较,炮制品8个组大鼠心肌组织的SOD,Cx45蛋白表达水平,以及24 h-2 h组、24 h-3 h组Ca^(2+)-ATP酶水平均显著升高(P<0.05);生药组、12 h-1 h组、12 h-2 h组、24 h-1 h组大鼠血清MDA水平均显著降低(P<0.05);各给药组(除24 h-2 h组、24 h-3 h组外)大鼠血清cTnI水平均显著降低(P<0.05);各给药组(除24 h-3 h组外)大鼠血清CK-MB水平均显著降低(P<0.05)。结论哈萨克族炮制法制成的白喉乌头炮制品对模型大鼠快速型心律失常均有一定预防作用,其中以24 h-1 h炮制品效果较显著。

苏葶宣肺颗粒的制备工艺及初步药效研究

目的优选苏葶宣肺颗粒的最佳提取工艺和成型工艺,并探讨其对气管平滑肌的作用。方法采用L9(34)正交设计实验法,以迷迭香酸和黄芩苷的含量以及浸膏得率为指标,考察提取次数、提取时间和加水倍量对苏葶宣肺颗粒提取工艺的影响,优选苏葶宣肺颗粒的最佳提取工艺。以制粒情况、成型率、吸湿率、休止角及溶解度为评价指标,对辅料种类和药辅比例等因素进行考察,确定最佳制剂成型工艺。制备大鼠离体气管环后浸泡于K-H液,采用BL-420S生物机能系统测定其张力变化,分别观察苏葶宣肺颗粒对大鼠正常离体气管和磷酸组胺(His)、乙酰胆碱(ACh)致痉的大鼠离体气管张力的影响,计算解痉率。结果苏葶宣肺颗粒的最佳提取工艺为:加10倍量水,浸泡30 min,提取2次,每次提取60 min。3批正交验证实验综合评分均数为92.07,RSD为0.51%。最佳成型工艺为:浸膏、糊精、淀粉按3∶2.5∶4的比例制成软材,用10目筛网制成颗粒。苏葶宣肺颗粒对大鼠正常离体气管平滑肌具有舒张作用,对ACh和His致大鼠离体气管平滑肌收缩均有一定的解痉作用。结论本文建立了苏葶宣肺颗粒稳定可行的制备工艺,为后续的研发、质量控制奠定了基础。苏葶宣肺颗粒对离体气管平滑肌有舒张作用,其机制可能与抗组胺和抑制胆碱受体有关。

基于细胞和动物实验的新疆5种阿魏抗结肠癌的作用研究

目的 体外细胞实验研究新疆5种阿魏及不同极性部位对人结肠癌HCT 116细胞的增殖抑制、促凋亡作用,体内研究新疆5种阿魏对结肠癌CT-26小鼠的影响。方法 新疆5种阿魏及不同极性部位干预人结肠癌HCT 116细胞,采用MTT比色法检测吸光度OD值,计算增殖抑制率,应用流式细胞术检测细胞凋亡率。建立BALB/c结肠癌CT-26小鼠肿瘤模型,随机分为正常组、模型组、顺铂组和5种阿魏低、高剂量组。连续灌胃给药10 d,第11天处死小鼠,取出肿瘤、脾、肾与胸腺,计算各组小鼠的脏器指数与抑瘤率。结果 对于人结肠癌HCT 116细胞,多伞阿魏、准噶尔阿魏、新疆阿魏的乙醇提取物抑制作用较好,IC分别为26.06、28.31、42.27μg/mL,托里阿魏抑制作用较弱,IC为131.61μg/mL,圆锥茎阿魏作用最弱,IC为261.77μg/mL;准噶尔阿魏石油醚部位、二氯甲烷部位、乙酸乙酯部位对人结肠癌HCT 116细胞的抑制作用均很明显,水饱和正丁醇部位抑制作用较弱,而水提部位几乎没有作用。新疆5种阿魏中,准噶尔阿魏对于人结肠癌HCT 116细胞的促凋亡作用较好。对于结肠癌CT-26小鼠,与正常组相比,新疆5种阿魏给药组小鼠的脾重、肾重、胸腺重及其脏器指数均有降低趋势,与阳性药物顺铂组作用趋势一致;从抑瘤效果来看,准噶尔阿魏高低剂量组抑瘤率分别为61.73%、67.40%。结论 准噶尔阿魏抗结肠癌作用较好,值得更进一步的深入研究。

天香丹胶囊预处理激活ERα介导的AKT/eNOS通路减轻大鼠心肌缺血-再灌注损伤的实验研究

目的:观察天香丹(TXD)胶囊通过雌激素受体(ER)α介导的蛋白激酶B(AKT)/内皮型一氧化氮合酶(eNOS)通路对大鼠心肌缺血-再灌注损伤的改善作用,并探讨其作用机制。方法:将70只SD雌性大鼠随机分为正常对照组(Control组,10只)和去卵巢组(OVX组,60只),OVX组摘除双侧卵巢。将OVX组分为假手术组(Sham组)、模型组(MIRI组)及雌二醇组(OVX+MIRI-E2组,0.8 mg/kg)、OVX+MIRI-TXD高剂量组(0.6 g/kg)、OVX+MIRI-TXD中剂量组(0.4 g/kg)、OVX+MIRI-TXD低剂量组(0.2 g/kg),每组10只,连续灌胃给药60 d。通过结扎心脏冠状动脉左前降支30 min后再灌注60 min方法建立大鼠心肌缺血-再灌注损伤模型。记录各组大鼠心脏血流动力学指标;苏木精-伊红(HE)染色观察心肌组织形态学变化,微量法检测大鼠血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、总抗氧化能力(T-AOC)、一氧化氮(NO)水平;酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清雌二醇水平;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测心肌组织雌激素受体ERα、AKT蛋白磷酸化水平、eNOS磷酸化水平。结果:与MIRI组比较,OVX+MIRI-E2组及OVX+MIRI-TXD各剂量组大鼠心脏血流动力学指标、心肌组织形态结构改善,血清LDH、CK和MDA含量降低,NO、SOD和ERα蛋白含量升高,抗氧化能力、AKT和eNOS磷酸化水平增强(P<0.05)。结论:TXD胶囊预处理可减轻大鼠心肌缺血-再灌注损伤,其机制可能与激活ERα介导的AKT/eNOS信号通路、增加内源性NO释放、舒张血管、减轻心脏负荷和心肌需氧量、对心肌缺血的保护作用有关。

天香丹减轻心肌缺血损伤的作用机制研究

目的研究天香丹胶囊激活雌激素受体α(ERα)抑制铁死亡减轻心肌缺血损伤的机制。方法将70只SD雌性大鼠(210±40)g随机分组,建立去势模型,灌胃60 d,可逆性结扎冠状动脉(冠脉)左前降支30 min,进行心功能数据实时监测;检测血清中雌激素和cTnI含量;检测心肌组织中丙二醛(MDA)、氧化型谷胱甘肽(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)、Fe2+含量;苏木精-伊红(HE)染色观察心肌组织形态;Western blot检测心肌中的蛋白ERα、长链脂酰CoA合成酶4(ACSL4)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、铁蛋白重链1(FTH1)。结果去势后,各组比空白组雌激素水平显著降低;在给药60 d后,给药组比模型组雌激素水平升高,而肌钙蛋白(cTnI)含量降低;给药组比模型组Fe2+、MDA含量降低,GSH-PX、SOD含量增加;HE染色显示给药组对心脏表现出不同程度的保护作用;Western blot结果显示给药组比模型组中ERα、GPX4、FTH1的蛋白表达增强,而ACSL4蛋白的表达显著减小,差异有统计学意义(P<0.05)。结论通过上述试验推测天香丹胶囊激活ERα,升高GPX4、FTH1表达,降低ACSL4表达,降低氧化应激水平,抑制铁死亡,从而减轻心肌缺血损伤。

新疆4种阿魏乙醇提取物抗宫颈癌细胞活性的研究

目的研究新疆4种阿魏(荒地阿魏、多伞阿魏、山地阿魏、准噶尔阿魏)乙醇提取物的抗宫颈癌活性。方法制备新疆4种阿魏根乙醇提取物,以不同浓度(9.375、18.750、37.500、75.000、150.000、300.000 mg/L)干预人宫颈癌Hela细胞,通过MTT法检测吸光度(OD值),求得细胞增殖抑制率及IC_(50),应用流式细胞术分别检测4种阿魏乙醇提取物的细胞凋亡率。取KM小鼠110只,随机分为空白对照组、模型对照组、顺铂组、给药高剂量组、给药低剂量组,除空白对照组外,其他各组将小鼠宫颈癌U14细胞注射于小鼠右肢腋下,造模后第2天灌胃,给药高、低剂量组分别灌胃新疆4种阿魏乙醇提取物1.5 g/kg生药、0.75 g/kg生药,空白对照组、模型对照组灌胃给药相同比例的空白乳剂,连续灌胃12 d,各组末次灌胃1 h后摘眼球取血,取出肿瘤、脾、肾、胸腺,分别测定抑瘤率、脾、肾、胸腺指数,使用全自动生化分析仪器分析测定血清中丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转氨酶和胱抑素C的水平,HE染色观察肿瘤组织形态。结果荒地阿魏、多伞阿魏、山地阿魏、准噶尔阿魏对人宫颈癌Hela细胞有抑制作用,IC_(50)分别为25.67、32.67、50.03、54.07μg/mL;对人宫颈癌Hela细胞有促进凋亡作用,凋亡率分别为54.82%、48.99%,51.83%、69.75%。与模型对照组比较,荒地阿魏、多伞阿魏、山地阿魏、准噶尔阿魏高、低剂量给药组瘤重均明显降低,其抑瘤率分别为85.49%、69.15%、29.02%、78.09%、82.16%、55.09%、72.76%、88.67%。与顺铂组比较,新疆4种阿魏瘤重无显著性差异(P>0.05)。与空白对照组比较,模型对照组的脾脏、胸腺明显增大,顺铂组脾脏、胸腺质量降低,山地阿魏、准噶尔阿魏胸腺质量降低,差异有统计学意义(P<0.05),其他阿魏对脾脏、胸腺质量无明显影响;新疆4种阿魏对肾脏质量均无明显影响(P>0.05),新疆4种阿魏对谷丙转氨酶、谷草转氨酶、胱抑素C均无明显影响,顺铂组的胱抑素C值明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。HE染色肿瘤组织,阿魏各给药组肿瘤细胞体积减小。结论荒地阿魏、多伞阿魏、山地阿魏、准噶尔阿魏乙醇提取物具有较强的抗宫颈癌活性。

基于网络药理学的准噶尔乌头炮制品抗卵巢癌作用机制研究

目的运用网络药理学探讨准噶尔乌头炮制品抗卵巢癌的作用机制。方法根据准噶尔乌头与乌头属植物具有化学亲缘性的特点,利用中药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP)、中药分子机制的生物信息学分析工具(BATMAN-TCM)等数据库并结合文献收集、筛选准噶尔乌头及其炮制品、乌头属植物有效活性成分。利用Swiss、GeneCards、基因表达数据库(GEO)等数据库预测药物和疾病的靶点。采用Draw Venn Diagram软件识别准噶尔乌头炮制品抗卵巢癌关键靶点,在Cytoscape 3.6.1软件中构建"疾病-药物-成分-靶点"网络。利用String数据库和Cytoscape 3.6.1软件构建关键靶点蛋白互作网络图;利用DAVID和R软件对关键靶点进行富集分析。结果得到准噶尔乌头炮制品抗卵巢癌的有效活性成分27个,关键靶点152个。准噶尔乌头碱、脱氧乌头碱、次乌头碱等可能是主要活性成分,其作用于PIK3CA、PIK3CB、PIK3CD、PIK3CG、表皮生长因子受体(EGFR)等靶点,参与癌症途径信号通路、PI3K-Akt信号通路、血管内皮生长因子(VEGF)信号通路、缺氧诱导因子-1(HIF-1)信号通路等多条信号通路,发挥抗卵巢癌作用。结论准噶尔乌头炮制品抗卵巢癌具有多成分、多靶点、多通路的特点,为开发具有民族特色的抗卵巢癌新药提供了思路。

紫草油软膏质量标准的研究

目的建立医院制剂紫草油软膏的质量标准。方法通过薄层色谱法对紫草油软膏中的紫草进行定性的鉴别,通过紫外-可见分光光度法对软膏中羟基萘醌总色素(以左旋紫草素计)进行含量的测定。结果薄层色谱鉴别专属性良好,紫外-可见分光光度法测定左旋紫草素的线性范围在12.12~36.36μg/mL,呈良好的线性关系,方法学考察符合含测要求。结论本文所建立的方法操作方便简单、数据精确稳定,为紫草油软膏的质量标准提供了依据。

基于网络毒理学与分子对接技术初步探究准噶尔乌头炮制减毒的作用机制

目的采用网络毒理学与分子对接技术初步探究准噶尔乌头炮制减毒的作用机制。方法通过中药系统药理学分析平台(TCMSP)、毒理学数据库(TOXNET)、反向药效团匹配数据库(Pharmmapper)和文献筛选准噶尔乌头的毒性成分和潜在靶点,乌头碱和准噶尔乌头碱为准噶尔乌头炮制前的主要成分,经炮制后乌头碱主要水解生成苯甲酰乌头原碱,准噶尔乌头碱结构稳定,未发生变化。比较毒理基因组学数据库(CTD)、疾病靶点筛选数据库(TTD)、疾病基因数据库(DisGeNET)、基因名片数据库(GeneCards)挖掘心脏毒性靶点。通过韦恩平台(Venny)获取准噶尔乌头心脏毒性的关键靶点,再从关键靶点中获取乌头碱、准噶尔乌头碱和苯甲酰乌头原碱的交集靶点。采用R软件对关键基因功能注释分析,运用Cytocape 3.7.2绘制准噶尔乌头-作用靶点关系网络图。辅以分子对接技术和心肌细胞H9c2对炮制前后主成分-准噶尔乌头碱、乌头碱和苯甲酰乌头原碱的心脏毒性进行验证。结果共得到准噶尔乌头毒性成分18个,关键靶点22个。草乌甲素、3-脱氧乌头碱、准噶尔乌头碱、乌头碱为准噶尔乌头的主要毒性成分,通过作用于丝裂原激活蛋白激酶1(MAPK1)、丝裂原激活蛋白激酶14(MAPK14)、血清白蛋白(ALB)等靶点,介导有丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路、白细胞介素17(IL-17)信号通路、叉头框蛋白O(FoxO)信号通路等途径,诱发心脏毒性作用。分子对接验证了准噶尔乌头的主要毒性成分草乌甲素、乌拉尔宁、准噶尔乌头碱等,与ALB、MAPK1、胰岛素样生长因子1受体(IGF1R)等靶点的结合潜能较好。心肌细胞实验结果显示乌头碱、准噶尔乌头碱和苯甲酰乌头原碱的IC_(50)分别为0.357、0.617、1.070 mg/mL,乳酸脱氢酶(LDH)释放量和细胞凋亡率均随药物浓度增加而升高(乌头碱>准噶尔乌头碱>苯甲酰乌头原碱),乌头碱的心脏毒性最大,大约是其水解产物苯甲酰乌头原碱的3倍。结论准噶尔乌头炮制品通过多成分多靶点多通路介导心脏毒性发生。准噶尔乌头经炮制后心脏毒性降低,减毒机制可能与调控纤溶酶原(PLG)靶点有关。

复方没食子软膏抗过敏、止痒、抗炎作用研究

目的探讨复方没食子软膏的抗过敏、止痒、抗炎作用。方法建立2,4-二硝基氯苯(DNCB)致小鼠迟发型超敏反应模型,实验分为正常对照组,模型组,阳性药物组,赋形剂组及复方没食子软膏低、中、高剂量组,测量小鼠左右耳中部厚度并计算耳肿胀度,称定脾脏和胸腺质量,并计算脾脏系数和胸腺系数;苏木素-伊红染色,观察耳廓组织炎性反应。小鼠颈背部皮下注射4-氨基吡啶(1 mg/kg)、尾静脉注射0.02%右旋糖酐-40(5 mL/kg)致小鼠瘙痒,记录30 min内小鼠的舔体次数和抓挠次数。以右耳内外侧均匀涂抹二甲苯(0.03 mL)致小鼠耳廓肿胀,称定左右耳廓相同部位质量,计算小鼠耳肿胀度。结果与模型组比较,阳性药物组和复方没食子软膏低、中、高剂量组小鼠给药后第1,2,3次激发(第11,14,17天)耳肿胀度均显著降低(P<0.05或P<0.01),耳片组织角化过度、表皮增厚程度均减轻,表皮/真皮内淋巴细胞、巨噬细胞、嗜酸性粒细胞等炎性细胞浸润减少,耳片组织病理形态改善。与模型组比较,阳性药物组和复方没食子软膏低、中、高剂量组小鼠30 min内的舔体次数均显著减少,阳性药物组和复方没食子软膏中、高剂量组小鼠30 min内的抓挠次数均显著减少(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,阳性药物组和复方没食子软膏低、中、高剂量组小鼠耳肿胀度均显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论复方没食子软膏具有一定的抗过敏、止痒及抗炎作用。

乌贝肠胃胶囊质量标准及指纹图谱研究

目的:建立乌贝肠胃胶囊的质量标准及其指纹图谱,完善其质量评价方法。方法:采用薄层色谱法(TLC)鉴别乌贝肠胃胶囊;用高效液相色谱法(HPLC)建立乌贝肠胃胶囊的指纹图谱并测定其含量;运用SPSS 21.0软件进行聚类分析、主成分分析以评价乌贝肠胃胶囊的综合质量。结果:薄层色谱鉴别专属性良好;桂皮醛、去氢木香内酯质量浓度的线性范围分别为0.0080~0.0780 mg/mL、0.0050~0.0550μg/mL(r均大于0.999),精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于3%,平均加样回收率分别为102.43%(RSD=2.60%,n=6)、101.25%(RSD=0.8%,n=6)。10批乌贝肠胃胶囊共有14个共有峰,相似度为0.943~0.990。其中指认了4个化合物,包括桂皮醛、胡椒碱、木香烃内酯、去氢木香内酯。聚类分析与主成分分析结果一致,10批样品可分为5类,其中S1、S7、S8聚为一类,S2为一类,S3、S4、S5聚为一类,S6为一类,S9、S10聚为一类,并得到3个主成分因子在此评估中有主要的优势。结论:新建立的中药复方制剂乌贝肠胃胶囊质量标准、含量测定方法和HPLC指纹图谱稳定,为全面控制制剂的质量提供了依据。

洋甘菊活性组分对LPS诱导人支气管上皮细胞的保护作用及机制研究

目的基于驱动蛋白家族3A基因(Kif3a)和Sonic hedgehog(SHH)信号通路探讨洋甘菊活性组分对脂多糖(LPS)诱导的人支气管上皮细胞(16HBE)的保护作用及机制。方法用脂多糖诱导人支气管上皮细胞建立哮喘炎症细胞模型。CCK-8法检测不同浓度洋甘菊活性组分对脂多糖诱导人支气管上皮细胞的增殖的抑制作用,筛选出最佳洋甘菊活性组分给药浓度。将细胞分为空白对照组、脂多糖模型组、阳性药物组(1μmol·L^(-1)地塞米松干预2 h)、洋甘菊活性组分组(200μg·mL^(-1),48 h)。Annexin V/PI结合流式细胞术检测各组的凋亡率。实时荧光PCR法和Western blot法检测Kif3a、SHH、Ptch1和Gli1的mRNA和蛋白表达变化。结果脂多糖干预后,可显著降低人支气管上皮细胞活力(P<0.05),并诱导其细胞凋亡(P<0.01)。洋甘菊活性组分在浓度200μg·mL^(-1)处理48 h时,可以显著逆转脂多糖对细胞的损伤并促进增殖(P<0.01),减弱脂多糖诱导的细胞凋亡(P<0.01)。与空白对照组比较,脂多糖诱导的人支气管上皮细胞内Kif3a在mRNA水平和蛋白表达水平显著降低(P<0.05),SHH、Ptch1、Gli1在mRNA水平和蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与脂多糖模型组相比较,洋甘菊活性组分处理后可显著逆转mRNA水平和蛋白表达(P<0.05),增加Kif3a的mRNA水平和蛋白表达水平,并降低SHH、Ptch1、Gli1的mRNA水平和蛋白表达(P<0.05)。结论脂多糖诱导人支气管上皮细胞损伤,下调Kif3a水平从而上调SHH、Ptch1、Gli1水平,调控SHH信号通路处于异常激活状态。洋甘菊活性组分可显著逆转脂多糖诱导的细胞炎症损伤,上调Kif3a水平,下调SHH、Ptch1、Gli1水平,通过Kif3a调控SHH信号通路,对脂多糖诱导的人支气管上皮细胞发挥保护作用,改善哮喘气道炎症。

没食子软膏对二硝基氯苯致大鼠湿疹的保护作用及机制研究

目的:分析没食子软膏治疗大鼠湿疹可能的作用机制。方法:选取健康SD大鼠60只,按随机数字表法分为正常组、模型组、阳性组(地塞米松)、没食子软膏低剂量组、没食子软膏中剂量组、没食子软膏高剂量组,除正常组外,其余组均利用7%二硝基氯苯丙酮溶液涂抹背颈部皮肤构建湿疹大鼠模型,模型建立成功后各组连续给予相应药物14 d,取样。试剂盒检测大鼠血液学;苏木精-伊红(HE)染色观察湿疹大鼠病灶处皮肤组织的病理改变;免疫组织化学法测定皮肤中白细胞介素-4受体α、白细胞介素-5、JAK1、p-信号转导及转录激活因子6蛋白表达水平;荧光定量PCR(qRT-PCR)测定皮肤中PI3K、AKT基因表达水平。结果:没食子软膏低剂量组、没食子软膏高剂量组可以显著降低湿疹大鼠血液中单核细胞百分比,没食子软膏中剂量组、没食子软膏高剂量组可以显著降低湿疹大鼠血液中嗜酸性粒细胞百分比;没食子软膏可以显著改善湿疹大鼠的皮肤病理特征,下调皮肤中白细胞介素-4受体α、白细胞介素-5、JAK1、p-STAT6蛋白表达水平,PI3K、AKT基因表达水平。讨论:没食子软膏能够起到治疗湿疹大鼠的作用,其机制可能与影响JAK1/STAT6/PI3K/AKT信号通路有关。

基于网络药理学和分子对接技术探究丹参-红景天抗心肌缺血的作用机制

目的基于网络药理学和分子对接技术研究丹参-红景天药对治疗心肌缺血(MI,myocardial ischemia)的潜在机制。方法初步基于中药系统药理分析平台TCMSP和文献筛选丹参和红景天活性成分,自GeneCards及其他数据库可以确定MI的靶点。之后,选择活性成分相应靶点以及疾病靶点之间的交集位置。另外,引入STRING数据库分析各个靶点彼此之间的影响,使用R软件中的Cluster Profiler包分析生物功能和信号通路富集。基于Cytoscape应用建立起蛋白质-蛋白质关联性以及组分靶链路体系,确定主要的活性物质以及靶点。Vina软件用于将核心靶蛋白与药物活性成分对接。结果筛选共得到342个药物潜在靶点,2241个MI潜在靶点,201个共有靶点;GO富集分析得到3276条(P<0.05);KEGG富集分析得到188个(P<0.05);分子对接结果表明靶蛋白与药物活性成分结合较密切。结论丹参-红景天药对可能作用于STAT3、JUN、AKT1和MAPK3等调节炎症、细胞凋亡和增殖做为治疗MI的分子机制,反映出中药对MI治疗通过多靶点和多途径的特点,为进一步揭示其药理基础提供新思路。

紫草油软膏微生物限度检查方法适用性研究

目的建立医院制剂紫草油软膏的微生物限度检查方法。方法对5种不同试验菌株进行回收比值测定,并对其进行控制菌适用性试验,确定紫草油软膏的微生物限度检查方法。结果各试验菌的回收比值在0.5~2之间,控制菌检查中试验组可检出试验菌。结论紫草油软膏可按常规方法进行的微生物限度检查。

三种阿魏不同极性部位的抗炎活性谱效关系研究

建立脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7炎症模型,采用Griess试剂法检测NO含量,通过双变量Pearson相关分析法,将新疆阿魏、阜康阿魏、多伞阿魏不同极性部位的HPLC图谱与NO含量进行相关性分析,筛选出3种阿魏的抗炎活性部位。结果表明,3种阿魏95%乙醇提取物、二氯甲烷部位、乙酸乙酯部位均有显著抗炎活性(P<0.01或P<0.05),3种阿魏水部位均无明显抗炎活性;新疆阿魏和阜康阿魏在保留时间68 min、75 min处及阜康阿魏和多伞阿魏在保留时间86 min处具有显著抗炎活性的共有色谱峰分别为化合物fekrynol(托里阿魏诺醇)、lehmannolol(大果阿魏醇)和lehmannolone(大果阿魏酮),其可能是阿魏的抗炎活性成分。