高效抑制小鼠精子zfx基因shRNA分子的筛选

zfx是小鼠X性染色体上的特异基因，可能与X精子的发生有关，沉默或下调该基因的正常表达可影响X精子的正常发育，使后代性别比列发生偏移。本实验为了筛选对小鼠zfx基因有效的shRNA分子，利用RNAi技术针对X精子zfx基因组mRNA的不同外显子选取10个干扰靶位，成功构建了10个shRNA质粒表达载体；通过对体外培养的生精细胞zfx基因的干扰试验，并用qRT—PCR方法检测生精细胞中zfxmRNA的表达丰度。结果显示：有4个干扰质粒组对zfx基因表达抑制明显，抑制率为33．47％～92．61％，其中pqz1、pqz3和pqz4等3个表达质粒抑制效果最好，抑制率分别为70．1％（P〈0．05）、85％（P〈0．05）和92．61％（P〈0．01），表明这3个质粒能明显抑制小鼠生精细胞中zfx基因的表达。

逆转录病毒介导的RNAi抑制小鼠生精细胞Zfy基因表达的研究

为了构建逆转录病毒RNAi(RNA interference)载体靶向抑制小鼠生精细胞Zfy基因的表达,检测Zfy基因的沉默效果。将构建好的逆转录病毒RNAi载体转染经分离培养的小鼠生精细胞,筛选出稳定转染的单克隆细胞扩大培养,应用qRT-PCR检测各试验组细胞Zfy基因mRNA的表达情况。结果显示,转染逆转录病毒RNAi载体的生精细胞Zfy基因mRNA的表达水平显著降低,与阴性对照和空白对照相比差异极显著(P<0.01);阴性对照与空白对照之间差异不显著(P>0.05)。因此,逆转录病毒RNAi载体可以稳定、高效抑制Zfy基因的表达,为进一步探究Zfy基因在小鼠生精过程中的作用和功能奠定了基础。