非探针法高分辨率熔解曲线(HRM)对FecB基因分型方法的研究

为了建立一种基于非探针法高分辨率熔解曲线(HRM)技术对绵羊FecB基因高效分型的方法,试验选用健康、成年绵羊48只,利用HRM和限制性片段长度多态性(PCR-RLFP)对绵羊多胎主效基因FecB基因进行分型效果研究。结果表明:FecB基因具有3种基因型,分别是野生型(AA)37.50%、杂合型(GA)33.33%、纯合突变型(GG)29.17%;通过对基因测序比对、HRM和PCRRLFP结果的准确率比较,HRM的准确率达到了95.83%(46/48),高于RLFP的分型结果,所需试验时间大大缩短。说明非探针法HRM技术是一种高效率、节省人工的FecB基因分型方法。

不同荧光染料对绵羊FecB基因HRM分型效果影响的实验研究

高分辨率熔解曲线(HRM)是基于新型饱和荧光染料的基因分型技术,本实验旨在研究荧光染料类型、添加量以及添加方式对HRM分型效果的影响。实验分析了3种荧光染料(LC Green、JJ Green、SYBR Green I)、不同荧光染料浓度、染料添加方式对HRM分型差异的比较。结果表明:3个染料中LC Green效果最佳,JJ Green次之,而SYBR Green I不及前两种;染料添加量会对HRM分型产生较大的影响,染料添加量为0.8μL时为最优反应量;而染料添加方式对分析结果没有影响。

绵羊FecB基因非探针法HRM分型技术条件优化研究

本文通过对影响高分辨率熔解曲线(HRM)的因素分析,旨在建立适合绵羊FecB基因分型的最优反应体系。试验分别对扩增子长度、引物量、Mg2+浓度和模板量等因素进行研究。结果表明,不同因素都会对HRM分析结果有影响,绵羊FecB基因非探针法HRM分型的最优反应条件为:引物添加量0.6μL,Mg2+浓度2.4 mmol/L^3.2 mmol/L,模板量50 ng,以及扩增产物为115 bp。