源于Paecilomyces sp.FLH30内切β-1,3(4)葡聚糖酶基因在毕赤酵母中的表达

【目的】β-1，3（4）-葡聚糖酶是一种重要的工业用酶，广泛地应用于饲料业、酿造业及纺织业。【方法】以来源于Paecilomyces sp．FLH30的葡聚糖酶基因为研究对象。据毕赤酵母GS115对密码子的简并性和偏爱性，对来源于淡紫拟青霉（Paecilomyces lilacinus）β-1，3（4）-葡聚糖酶基因进行了优化，通过全基因技术合成了全长基因GLUnm并构建重组酵母表达载体pPIC9K—GLUnm，用SacI线性化重组质粒pPIC9K—GLUnm，电击转化至毕赤酵母GS115中进行表达。【结果】通过表型筛选，遗传霉素抗性筛选，经PCR鉴定表明，葡聚糖酶基因整合至酵母染色体DNA中。在试管中经甲醇诱导表达，并测定葡聚糖酶酶活性。在试管水平表达的酶活性是0．68IU／mL，即可以认为在摇瓶表达水平的初始酶活性为0．68IU／mL，将此菌株在摇瓶水平表达，酶活性在表达84h为最高，是11．26IU／mL。【结论】重组β-1，3（4）-葡聚糖酶的最适pH为5．0，最适反应温度为50℃，在pH5．0～8．0，温度37—50℃的条件下较稳定。