半定量RT-PCR方法检测NaCl胁迫下杂花苜蓿mvNHX基因表达及体系优化

【目的】优化半定量RT-PCR反应体系,并用优化体系检测杂花苜蓿mvNHX基因的表达情况。【方法】提取用150 mmol/L盐浓度、处理不同时间的苜蓿叶片组织总RNA;反转录得到cDNA;利用优化半定量RT-PCR法检测。【结果】检测到mvNHX基因随胁迫时间基因表达量总体上逐渐升高。【结论】通过半定量RT-PCR法检测基因在胁迫条件的表达量的变化。同时对该方法进行优化,为进一步研究该基因克隆及其功能验证奠定了一定的实验基础。

黄花苜蓿MfNHX基因和MfP5 CS基因的克隆和序列分析

【目的】获得黄花苜蓿(Medicago falcata L.)的MfNHX基因和MfP5CS基因,并对这两个基因进行序列分析。【方法】利用Trizol总RNA提取试剂盒提取了新疆野生黄花苜蓿的总RNA,并用特异引物对其进行RT-PCR扩增,将得到的cDNA片段连接到pMD19-T载体上,最后将该载体转化大肠杆菌DH5α,并对阳性克隆进行了序列分析。【结果】MfNHX基因全长1 626 bp,Genbank登录号为GU265772;MfP5CS基因全长2 148 bp,Genbank登录号为GU180149。它们与紫花苜蓿核苷酸序列的同源性分别为99.63%和97.63%,与新牧1号杂花苜蓿核苷酸序列的同源性分别为99.45%和98.84%。【结论】研究已经获得MfNHX基因和MfP5CS基因,为进一步进行苜蓿抗逆境胁迫的研究奠定了基础。