绵羊生殖道提取物生物活性物质检测

目的检测绵羊生殖道提取物生物活性物质。方法以健康、新鲜、雌性绵羊生殖器官为实验材料,采用各种生物活性检测方法对绵羊生殖道提取物的活性物质进行了检测。结果绵羊生殖道提取物具有红细胞凝集、胰蛋白酶抑制剂活性、抗菌活性、抗血浆凝固活性、抗补体活性和低溶血活性,无胰蛋白酶水解活性、局部出血活性。结论首次证实绵羊生殖道存在抗菌活性物质和蛋白酶抑制剂活性物质。

生物信息学对扩展莫尼茨绦虫cDNA文库Cavβ基因分析与B细胞抗原表位预测

【目的】分离和鉴定扩展莫尼茨绦虫(Moniezia expansa)电压门控钙通道β亚基(Cavβ)基因,预测蛋白二级结构和B细胞抗原表位,从而探讨Cavβ在寄生虫病治疗中所起的作用。【方法】构建扩展莫尼茨绦虫成虫cDNA文库,随机挑取重组阳性克隆进行测序,对部分序列进行引物步移法测序,获取全长cDNA序列;采用生物信息学方法对其对应的蛋白进行二级结构和B细胞抗原表位的预测。【结果】获得扩展莫尼茨绦虫Cavβ基因,全长946 bp,编码180个氨基酸,理论分子质量为19.788 8 kD,等电点为5.06,属于Cachannel B超家族。二级结构以无规则卷曲为主,结构预测存在4个可能的B细胞抗原表位。【结论】研究对于扩展莫尼茨绦虫Cavβ基因的获得和B细胞抗原表位的预测,为该基因功能的试验性鉴定工作奠定了基础。

鹅多杀性巴氏杆菌OmpH的扩增与生物信息学分析

为扩增鹅多杀性巴氏杆菌OmpH基因,预测OmpH蛋白二级结构和B细胞抗原表位,通过PCR扩增测序及生物信息学分析技术对该基因序列进行开放阅读框(ORF)的寻找、编码氨基酸的推导及蛋白质二级结构的初步预测等,探讨了鹅多杀性巴氏杆菌OmpH基因在免疫保护中的作用。结果表明:鹅多杀性巴氏杆菌OmpH基因全长1537bp,ORF包含1056bp编码351个氨基酸;二级结构以无规则卷曲为主,有少量的α-螺旋和延伸带;推测OmpH蛋白有1个细胞黏附位点、3个糖基化位点。该研究为分析鹅多杀性巴氏杆菌外膜蛋白理化特性、制备单克隆抗体和设计表位疫苗等奠定了理论基础。

应用RNA干扰技术抑制捻转血矛线虫H11基因研究

【目的】为了检测RNAi沉默H11基因能否模拟H11疫苗免疫效果。【方法】针对H11基因序列设计并合成特异性dsRNA,通过浸泡方式分别将dsRNA导入捻转血矛线虫感染性L3期幼虫体内,利用实时荧光定量PCR分析H11基因在L3期幼虫中的转录抑制效果,同时,将H11-dsRNA浸泡L3期幼虫24 h后感染绵羊,定期采集绵羊粪便检查虫卵数,第30 d后剖检绵羊皱胃,检查荷虫数的变化。研究H11基因的沉默对捻转血矛线虫减虫率和减卵率的疫苗免疫效果。【结果】实时荧光定量PCR检测表明:试验组中H11基因的相对含量显著低于对照组(P<0.01),在浸泡72 h后,H11-dsRNA组基因的表达量仅为对照组的21.33%。绵羊体内干扰沉默效果显示,试验组H11干扰组虫卵减少率为41.02%,减虫率为39.6%。【结论】研究通过浸泡法导入的dsRNA能有效抑制H11基因的转录,同时H11基因的沉默与幼虫的发育密切相关,为捻转血矛线虫及其它寄生线虫的基因功能研究提供一种新的方法。

犬瘟热病毒巢式RT-PCR检测方法的建立及初步应用

【目的】建立一种犬瘟热病毒(CDV)RT-nested PCR检测方法。【方法】根据CDV弱毒株Onderstepoort的核衣壳蛋白(NP)基因序列设计套式引物,进行特异性、敏感性、重复性实验。【结果】特异性试验表明,该方法可以特异扩增出CDV NP基因片段,但从RNA病毒狂犬病病毒(RV)、DNA病毒犬细小病毒(CPV)以及正常Vero细胞中均未扩增出该条带。敏感性试验表明,RT-PCR可以扩增10-3稀释度的病毒RNA,而建立的RT-nested PCR可以扩增10-6稀释度的病毒RNA,后者的敏感性明显高于前者。重复性实验表明,不同情况下的3次重复实验,结果相同。用RT-nested PCR对石河子地区疑似感染CDV的病料进行检测,结果表明,该研究建立的RT-nested PCR不仅能有效的检测CDV感染,而且能够检测不同组织的样品。【结论】建立的RT-nested PCR检测方法,适用于动物CDV的快速诊断和流行病学调查。

牛病毒性腹泻病毒结构蛋白基因的克隆及其B细胞抗原表位的预测

【目的】以免疫信息学和反向疫苗学为理论根据,应用生物信息学相关软件和方法,对BVDV结构蛋白(Structural Protein,SP)的二级结构的不同方面及其B细胞表位进行了预测,综合评价了BVDV结构蛋白的抗原特异性细胞表位,并计算出一些潜在的抗原位点。【方法】利用RT-PCR扩增法获得牛病毒性腹泻病毒结构蛋白序列,通过克隆、测序分析结构蛋白基因的基因组序列和蛋白序列,采用DNAStar Protean软件对结构蛋白的二级结构、可塑性、亲水性、表面可及性及抗原指数等参数进行综合分析,并预测其B细胞的抗原表位分布。【结果】P14、gp48和gp53蛋白含有的细胞优势抗原表位较多,有的甚至有可能成为优势抗原表位或对优势抗原表位有协同作用。【结论】与已鉴定的B细胞抗原表位相比,试验所用方法预测的结果有较高的准确度,是一种较为先进的表位研究方法。

副猪嗜血杆菌分离方法的探索及临床病料的分离

以猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,App)标准菌株1、2、7型为研究对象,对其生长特性以及部分药物敏感性进行试验,探索副猪嗜血杆菌的分离培养方法。试验证明,在加入40μL/mL自制V因子脑心浸液培养基中App生长速度极快,6 h即有简单菌落形成,18 h后长成圆形灰白色半透明的黏液样小菌落,在麦康凯培养基上不生长,绵羊血琼脂上有溶血现象。同时实验还发现,在培养基中添加50μg/mL万古霉素或375μg/mL林可霉素可有效抑制革兰阳性菌及部分革兰阴性菌的生长,可以提高分离效率。采用以上培养基对北疆地区部分猪场采集的肺脏、鼻拭等进行细菌的分离鉴定,结果分离到2株副猪嗜血杆菌(Hps)。