引导编辑技术的研究进展及应用

以CRISPR/Cas9为基础的引导编辑系统是新开发出的一种基因编辑技术,可以精确实现12种碱基的互换、插入和缺失,并且不需要产生双链断裂和引入外源供体DNA。本文从基因编辑的发展、引导编辑系统的原理、特点、优化、脱靶效应、在动植物和基因治疗研究中的应用、引导编辑系统的设计等几方面进行综述,为促进相关领域的科研工作者了解引导编辑系统及进一步利用引导编辑系统在动植物科学基础研究和育种方面的应用提供指导。

比较CRISPR/Cas9和PE技术对HEK293T细胞中eGFP基因的编辑效率影响

为了构建增强型eGFP(Enhanced GFP)基因CRISPR/Cas9和引导编辑(Prime Editing,PE)相关载体,确定CRISPR/Cas9和PE对eGFP基因的编辑效率,本研究通过生物信息学对eGFP基因进行靶位点分析,人工合成eGFP sgRNA/15 bp缺失的pegRNA及niRNA,构建LentiCRISPRV2-eGFP sgRNA、15 bp缺失的pU6-eGFP-pegRNA和U6-eGFP-niRNA质粒;培养293T细胞,利用荧光倒置显微镜、流式细胞仪和HiTOM深度测序,检测eGFP基因的FITC-A-Mean和细胞发生的编辑类型,同时预测不同编辑类型蛋白结构变化。结果发现,eGFP-sgRNA组的FITC-A-Mean显著低于阴性对照组;eGFP-PE2组的FITC-A-Mean极显著低于阴性对照组;eGFP-PE3b组的FITC-A-Mean极显著低于阴性对照组;Hi-TOM测序表明eGFP-sgRNA、eGFP-PE2和PE3b的编辑效率分别为20.420%、36.735%和40.180%;PE3b较PE2编辑效率提升3.445%;eGFP野生型蛋白二级结构中延伸链最多达到83个(34.73%),eGFP-CRISPR/Cas9-1bp插入蛋白二级结构中无规则卷曲达到144个(56.69%);eGFP-PE-15 bp缺失蛋白中延伸链最多达到85个(36.32%)。本试验成功构建LentiCRISPRV2-eGFP sgRNA、15 bp缺失的pU6-eGFP-pegRNA和U6-eGFP-niRNA质粒,转染后绿色荧光强度均极显著降低,CRISPR/Cas9编辑存在多种编辑形式,而PE编辑除15 bp缺失的精准编辑外存在比例较少的碱基替换,表明利用PE编辑系统可以实现精准编辑,为研究动物功能基因和精准分子育种领域奠定基础。

绵羊TMEM182基因克隆、生物信息学及组织表达谱分析

【目的】本试验旨在克隆绵羊TMEM182基因编码区(CDS)全长序列,并通过在线软件分析TMEM182基因结构和表达蛋白序列,以探究其在绵羊各部位组织中表达水平的变化。【方法】从绵羊尾部脂肪组织中克隆获得TMEM182基因,利用在线生物学信息软件对TMEM182蛋白的理化性质、亲疏水性、跨膜区、糖基化位点、信号肽、二级结构、三级结构和蛋白互作等进行预测分析。同时,采用实时荧光定量PCR方法检测TMEM182基因在绵羊13个组织中的相对表达量,这些组织包括大脑、小脑、心、肾、脾、肝、肺、皮肤、卵巢、尾部脂肪、皮下脂肪、肾周脂肪和肌肉。【结果】绵羊TMEM182基因CDS区全长序列为690bp,编码229个氨基酸,TMEM182基因序列在不同物种间具有较高的保守性。生物信息学预测分析显示,TMEM182属于稳定的疏水性蛋白,具有跨膜结构,无信号肽,具有3个N-糖基化位点,其蛋白二级结构主要由无规则卷曲(38.43%)和2α螺旋(30.57%)组成,而延伸链(24.89%)和β转角(6.11%)的占比相对较少,三级结构预测结果与二级结构预测结果相符。实时荧光定量PCR结果显示,TMEM182基因在肌肉、心和脂肪中表达量显著高于肝、肾、大脑、小脑、皮肤等其它部位组织(P<0.05)。【结论】成功克隆了绵羊TMEM182基因的CDS区片段,分析了该基因在绵羊肌肉组织和脂肪组织中特异性表达。这些研究结果为进一步探究TMEM182基因在绵羊肌肉生长发育和脂肪沉积过程中的分子作用机制提供了理论依据。

细毛羊主要毛用性状检测及其评定方法

羊毛品质的检测方法、检测标准在推动毛纺工业发展、羊毛贸易以及细毛羊育种中具有重要作用。通过归纳国内外相关文献及标准,总结了国内外主要毛用性状及其检测标准;依据已有标准并结合国内在生产中的实际应用,详细介绍了2个羊毛产量性状与6类羊毛品质性状的客观测定方法,最后系统介绍了澳大利亚和中国开发的羊毛表型目测评定方法。文章可为开展羊毛纤维品质的统一测定和评估提供参考。

特克赛尔羊×阿勒泰羊F_(2)绵羊肉质嫩度全基因组关联分析

为了定位影响绵羊嫩度相关SNP位点及其重要候选基因,该研究选取462只特克赛尔羊×阿勒泰羊F_(2)绵羊,其中公羔229只、母羔233只,所有试验羊均在统一条件下饲养至8月龄后进行屠宰,利用C-LM4嫩度仪对嫩度进行测定,利用Illumina绵羊高密度(600K)SNP芯片进行基因分型,使用GEMMA软件的MLM模型对嫩度性状进行全基因组关联分析。结果表明,经质控后,剩余613178个SNPs位点用于全基因组关联分析,发现9个潜在SNPs位点与嫩度相关,分别分布在2、6、23、24号染色体上。根据基因生物学功能及相关研究文献,推测EREG、AREG、PDE1A基因参与肌肉再生、肌纤维形成等生物学过程,可作为影响嫩度的重要候选基因。研究结果可为利用分子生物学方法改良绵羊肌肉嫩度提供科学依据。

不同因素对特哈杂交绵羊消化道线虫感染情况的影响

【目的】研究季节、性别、组别和群别对特克塞尔和哈萨克(以下简称特哈)杂交绵羊中消化道线虫(gastrointestinal nematodes,GIN)感染强度、体重、红细胞比容和特异性抗体免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG)含量的影响,为绵羊消化道线虫的防治和抗消化道线虫育种等方面的研究提供参考依据。【方法】采集特哈杂交绵羊直肠粪便及颈静脉血液,称量体重。用饱和盐水漂浮法对消化道线虫虫卵进行定性检测,运用改良的McMaster法进行消化道线虫虫卵计数,计算感染率和感染强度;使用兽用全自动血液细胞分析仪对血液进行红细胞比容检测;制备线虫L3期幼虫体细胞抗原,运用间接ELISA法测定绵羊血清中特异性抗体IgG含量。【结果】特哈杂交绵羊消化道线虫感染率较高,为94.44%,呈中度感染,鉴定出毛圆属线虫(Trichostrongylus spp.)、捻转血矛线虫(Haemonchus contortus)、奥斯特属线虫(Ostertagia spp.)、羊仰口线虫(Bumastomum trigonocephalum)、夏伯特属线虫(Chabertia spp.)、马歇尔属线虫(Marshallagia spp.)、细项属线虫(Nematodirus spp.)、食道口属线虫(Oesophagostomum spp.)和球鞘毛首线虫(Trichuris globuulosa)共9种消化道线虫。季节对绵羊消化道线虫感染强度和体重有显著影响(P<0.05),春季绵羊消化道线虫感染强度显著高于夏季(P<0.05),夏季绵羊体重显著高于春季(P<0.05)。性别对绵羊消化道线虫感染强度、体重和红细胞比容有显著影响(P<0.05),公羊消化道线虫感染强度显著高于母羊(P<0.05),公羊体重显著高于母羊(P<0.05),母羊红细胞比容显著高于公羊(P<0.05)。组别对体重有显著影响(P<0.05),F2×哈绵羊体重显著高于F2和F2×F1绵羊(P<0.05),F1×F1绵羊体重显著高于F2×F1绵羊(P<0.05),F2×F2绵羊体重显著低于其余组别的绵羊(P<0.05)。群别对绵羊消化道线虫感染强度有显著影响(P<0.05),1群绵羊消化道线虫感染强度显著高于2和3群(P<0.05),3群绵羊消化道线虫感染强度显著高于2群(P<0.05)。所有因素均对特异性抗体IgG含量没有显著影响(P>0.05)。【结论】季节、性别、组别和群别对绵羊消化道线虫感染情况存在影响,可根据因素对感染情况的影响和各因素不同水平之间的差异对绵羊选择不同的防治措施,为抗消化道线虫育种策略提供理论依据。

影响绵羊卵母细胞回收效率因素的研究

为优化卵母细胞采集方法、提高绵羊卵巢资源利用率奠定基础,该试验利用屠宰绵羊卵巢,研究采卵人员及采卵工具(注射器、负压泵)对卵母细胞回收效率的影响。结果表明:不同人员对卵母细胞回收数量和质量均存在极显著差异(P<0.01);哈萨克羊/阿勒泰羊卵母细胞回收数量和质量显著低于湖羊(P<0.05);不同规格注射器针头,对绵羊卵母细胞回收数量和质量存在极显著差异(P<0.01),且9号针头(兽用)采卵效果较优;真空负压泵对卵母细胞的回收效果显著高于注射器(P<0.05)。可见,注射器采集卵母细胞对技术人员的熟练程度要求较高,采用真空负压泵采卵方法卵母细胞回收效率显著高于注射器采卵方法。

绵羊抗消化道线虫感染育种技术研究进展

由消化道线虫感染引起的疾病是影响绵羊健康和生产力最重要的因素之一,对该病传统的预防方法是使用化学驱虫药和加强饲养管理。但随着抗药虫株的出现和蔓延,严重的药物残留和环境污染问题,使传统的化学防治方法受到了严峻的挑战。随着分子遗传学技术的进步及其在绵羊抗消化道线虫感染育种中的应用,提高绵羊对消化道线虫的抗病性,是预防该病的重要补充策略。大量研究表明传统表型选择性状面宽,但遗传进展缓慢,准确性差;分子标记确定性高,但抗性性状由微效多基因控制,基因间又存在互作,单独用分子标记辅助选择全面性不足,应将二者相结合。虽然已筛选出大量的消化道线虫的抗性遗传标记及候选基因,但抗病作用机制复杂,尚处于试验研究状态;抗病性状和生产性状之间的关联还需要进一步研究。本文对绵羊抗消化道线虫感染育种技术及筛选的基因位点进行了全面的综述,指出了目前研究中的不足,为今后绵羊抗消化道线虫感染育种研究提供了参考。

基于微卫星多重PCR技术的特克塞尔×哈萨克杂交羊亲子鉴定

本研究旨在建立一套适用于特克塞尔×哈萨克杂交羊亲子关系的鉴定体系。试验选取11个微卫星标记位点进行组合扩增,通过优化微卫星标记位点组合的引物浓度、退火温度及反应体系等条件,建立了4组多重PCR体系,对多重PCR扩增产物采用毛细管电泳进行基因型分型,经PROSize3.0软件读取基因型分型结果,Cervus 3.0软件分析群体的遗传多样性,鉴定特克塞尔×哈萨克级进F2代(特哈级进F2)和横交F2代(特哈横交F2)的亲子关系。结果表明,特哈级进F2和特哈横交F2的等位基因数为180和140、平均等位基因数为16.364和12.727、平均观测杂合度(Ho)为0.533和0.544、平均期望杂合度(He)为0.807和0.831、平均多态信息含量(PIC)为0.783和0.803。对特哈级进F2和特哈横交F2两个品种70只候选亲本和64只候选子代的11个微卫星标记位点进行亲子关系鉴定,结果表明:当双亲基因型未知时的累积排除概率(CE-1P)为0.9995和0.9997;当单亲基因型已知时的累积排除概率(CE-2P)均达到1.0000;双亲基因型已知的累计排除概率(CEPP)均达到1.0000。说明选择的11个微卫星标记位点具有高度的多态性和较高的排除概率,适用于遗传分析和个体的亲子鉴定。利用微卫星标记建立的特克塞尔×哈萨克杂交羊亲子鉴定体系为分析绵羊群体遗传多样性和辅助育种工作提供了理论依据。

特克赛尔羊×阿勒泰羊F2代部分肉质性状的全基因组关联分析

本研究测定了462只特克赛尔羊×阿勒泰羊杂交F2代羊背最长肌的肉质性状,利用全基因组关联分析(GWAS)方法初步筛选肉质性状(熟肉率、失水率)的候选基因,并通过QQ-plot图对群体层化效应进行了检测。结果表明,以上肉质性状群体层化分析没有发现明显的整体系统偏差,也不存在明显群体层化效应。关联分析结果表明共有16个SNP位点达到基因组显著水平,其中与熟肉率显著相关的位点8个,与失水率显著相关的位点8个。根据基因注释和文献检索结果,推测DOCK4、AOAH和CREB5基因可作为影响绵羊熟肉率的候选基因,所筛选出的候选基因主要通过调控肌纤维类型、参与肌肉生长过程等途径影响熟肉率;推测PRKCE和PRKG1基因可作为影响绵羊失水率的候选基因,筛选出的候选基因主要通过调控细胞分化、肌肉收缩、脂肪生成及参与肌动蛋白细胞骨架等作用而影响失水率。本研究结果将为改良绵羊肉质嫩度、多汁性提供候选分子标记,为地方品种绵羊标记辅助选择提供新的思路。

选择信号分析及其对绵羊功能基因的挖掘进展

绵羊经过长期自然和人工选择,形成了丰富多样的品种资源,并为人类提供肉、奶、毛、皮等生活物资。选择发生时伴随着选择信号的产生,常见的选择信号有群体分化、基因组多样性下降且存在高频等位基因的区域及被选择区域长范围扩展单倍型纯合等。针对不同类型的选择信号衍生出了相应的分析方法,如基于群体分化分析、基于基因组杂合度分析、基于单倍型和连锁不平衡分析和基于等位基因频率谱分析等。近年来,随着高通量测序技术的发展,研究人员通过对绵羊进行选择信号分析,挖掘出大量与经济性状相关的功能基因,为绵羊分子育种提供了更多的遗传信息。作者对选择信号的分类与检测方法及其对绵羊功能基因的筛选进行了介绍,并对选择信号分析的应用方向和研究前景进行了展望,旨在为选择信号分析在绵羊遗传育种中的应用提供借鉴。

阿勒泰羊FKBP5基因的克隆及其在组织中的表达

【目的】研究FKBP5基因和蛋白在绵阿勒泰羊不同组织、不同卵泡发育时期中的表达和定位情况。【方法】利用PCR法扩增获得阿勒泰羊FKBP5基因CDS区全长序列,并构建分子系统进化树;利用Real-time qPCR和Western Blot检测阿勒泰羊卵巢等不同器官和组织中FKBP5基因和蛋白的表达量;利用Real-time qPCR技术检测FKBP5基因在阿勒泰羊不同大小卵泡及黄体中的表达情况;利用免疫组化技术检测FKBP5蛋白在阿勒泰羊卵巢中的表达定位。【结果】阿勒泰羊FKBP5基因CDS区序列全长1390 bp,编码462个氨基酸;绵羊与山羊和牛的亲缘关系较近,与鸡(禽类)亲缘关系较远;FKBP5基因和蛋白在绵羊心脏、肝脏、脾脏、肺、肾脏、子宫、卵巢、输卵管和睾丸中均有表达,其中在输卵管中表达量最高,接下来依次是肝脏、脾脏、子宫、卵巢和睾丸等器官和组织,在心脏、肺和肾脏中表达量较低;FKBP5基因在大卵泡中的表达量最高,且极显著高于卵巢、小卵泡和黄体(P<0.01),其次是卵巢和小卵泡,在黄体中表达量最低;FKBP5基因在大、小卵泡不同细胞中的表达情况略有不同。其在大卵泡膜细胞中的表达极显著高于其他各类细胞(P<0.01),而在大卵泡GCs中的表达量也显著高于小卵泡的GCs、膜细胞以及大、小卵泡的卵丘细胞(P<0.05);FKBP5蛋白在阿勒泰羊初级卵泡、次级卵泡、黄体组织和大、小有腔卵泡的卵母细胞、卵丘细胞、颗粒细胞及膜细胞中均有表达。【结论】推测FKBP5基因可能在阿勒泰羊卵泡发育过程中发挥一定作用。

特哈杂交羔羊消化道线虫的遗传参数估计及其与生长性状关系

旨在分析特哈杂交羔羊的组别、性别、群别、母羊年龄、出生类型等固定效应对消化道线虫虫卵数和早期生长性状的影响,目标性状包括羔羊每克粪便中的虫卵数(FEC)、羔羊初生重(BW)、羔羊断奶重(WW)、羔羊6月龄体重(6WT)、羔羊出生到6月龄平均日增重(ADG)。对目标性状作出遗传参数估计(遗传力、方差组分、遗传相关和表型相关),为绵羊的遗传改良提供数据参考。使用ASReml软件进行分析,先利用混合线性模型分析固定效应对绵羊的消化道线虫虫卵数和早期生长性状的影响,再使用多性状动物模型对目标性状进行遗传参数估计。研究表明,羔羊的组别和群别对所有性状影响极显著(P<0.001);性别对虫卵数、初生重、断奶重和平均日增重影响极显著(P<0.001);母羊年龄对初生重影响极显著(P<0.001),对虫卵数、断奶重无显著影响(P>0.05);出生类型对初生重、断奶重、6月龄重、平均日增重影响极显著(P<0.001);FEC、BW、WW、6WT、ADG的遗传力分别为0.142、0.156、0.365、0.294、0.024;FEC与BW(-0.889)之间均呈现出比较高的负遗传相关,FEC与6WT(0.096)、ADG(0.152)之间呈较低正遗传相关,与WW(-0.574)之间呈负遗传相关。因此,在遗传改良和选育过程中,不仅要提高对线虫感染的控制,还要重视并改善绵羊的管理方式、生长环境。本研究估计了特哈杂交羔羊消化道线虫虫卵数及早期生长性状的遗传参数,可为下一步的遗传改良提供理论参考。

绵羊断奶体重以五日龄划分的校正

旨将不同日龄羔羊断奶重校正为同一日龄,弥补羔羊断奶重误差的缺陷。以特哈杂交F2代断奶羔羊体重与断奶天数为变量做散点图,判断为线性回归关系。将群体划分为单胎公羊、单胎母羊、双胎公羊、双胎母羊四个水平。通过统计软件SPSS26.0建立线性回归方程,将断奶日龄以五天划分为一组,取组限中数带入回归方程中为断奶重的校正日龄值。校正系数为校正日龄体重值除以断奶重的理论值,校正体重为校正系数乘以实际体重。单胎公羊、单胎母羊、双胎公羊、双胎母羊四种类型的断奶日龄与断奶重的回归方程分别为y=0.205x+12.404;y=0.195x+11.472;y=0.212x+3.218;y=0.216x+1.203。四组类别的相关系数分别为0.468、0.571、0.503、0.516,均有极显著的影响(P<0.01),并大于总体相关系数。为羔羊断奶重的选种选育提供了良好的科学理论基础。

绵羊不同部位脂肪沉积表型性状的相关分析

通过F1代横交获得特克塞尔羊和哈萨克羊的F2代337只,对8月龄F2代羔羊胴体5个不同部位的脂肪沉积性状(尾部脂肪重、背部脂肪厚、肾脏脂肪重、肠系脂肪重及胴体脂肪含量值)进行相关性分析,从而筛选活体状态下可测量的、与脂肪沉积密切相关的表型及参数。结果表明:横交F2代不同部位的脂肪沉积表型存在显著差异,背部脂肪厚与其他各部位脂肪沉积变化均显示出极显著正相关(P<0.01);筛选可活体测量的早期生长性状出生重、断奶重、活重和眼肌面积,其中,活重与各部位脂肪沉积量均达到极显著相关(P<0.01),眼肌面积与背部、肾脏和肠系呈极显著相关(P<0.01);通过回归分析将背部脂肪厚和活重确定为解释参数。

伊犁不同地区绵羊消化道线虫和球虫感染的季节动态调查

为了解伊犁不同地区绵羊消化道线虫和球虫季节性感染情况,在2019年的春、夏、秋、冬4个季节采集伊犁昭苏和尼勒克地区7337份粪便样本,采用饱和盐水漂浮法鉴定感染种类,采用改良麦克马斯特法定量检测,计算感染率及感染强度。结果表明:伊犁两个地区绵羊消化道线虫和球虫的感染率较高,消化道线虫呈中度感染,球虫呈轻度感染,初步鉴定出9种消化道线虫和12种绵羊艾美尔属(Eimeria spp.)球虫;昭苏地区绵羊消化道线虫平均感染强度极显著高于尼勒克地区(P<0.01),尼勒克地区球虫感染率和平均感染强度极显著高于昭苏地区(P<0.01);两个地区绵羊消化道线虫和球虫平均感染强度呈现出春季最高、夏季次之、冬季最低的流行规律;春季和冬季,昭苏地区绵羊消化道线虫平均感染强度极显著高于尼勒克地区(P<0.01);除了冬季,其他季节尼勒克地区球虫平均感染强度极显著高于昭苏地区(P<0.01);使用驱虫药伊维菌素和阿苯达唑后,绵羊消化道线虫和球虫的平均感染强度均显著降低(P<0.01),但消化道线虫虫卵转阴率、减少率均高于球虫。可见伊犁两个地区因气候温度等的不同,对绵羊消化道线虫和球虫感染情况有一定的影响。

特克塞尔与哈萨克羊杂交F_(2)代胴体性状的多元分析

实验旨在研究特克塞尔×哈萨克羊杂交F_(2)代的尾部脂肪大小对胴体性状的影响。选用体况良好的520只8月龄羔羊,运用SPSS与R语言对羔羊的表型数据进行主成分与聚类分析,研究尾部脂肪的分化情况,并对杂交F_(2)代各类型尾脂羊屠宰前体重、胴体重、断奶重及脂肪沉积性状进行差异比较分析。结果发现,主成分分析中41个表型值提取到9个主成分,累计贡献率达到87.694%,屠宰前体重、胴体重、断奶重与5个脂肪表型性状的特征值较高;聚类分析结果可将杂交F_(2)代分为A型、B型、C型和D型4个类型;D型的屠宰前体重、断奶重与A型屠宰前体重、断奶重差异不显著,C型背膘厚极显著高于A型,B型的屠宰前体重、胴体重、断奶重极显著高于A型、C型和D型。B型、C型和D型间背膘厚差异不显著。综上,杂交F_(2)代的尾部脂肪发生性状分离,屠宰前体重随着尾部脂肪的增加而下降,结合特克塞尔与哈萨克羊的体型外貌特征,C型和D型更趋近于哈萨克羊,B型则更趋近于特克塞尔羊。

特克塞尔×哈萨克羊微卫星标记位点多态性与生产性状的关联分析

【目的】利用微卫星标记分析特克塞尔×哈萨克羊群体的遗传多样性,并与生产性状进行关联分析,为该品种的遗传育种和性状改良提供分子标记。【方法】选取11个微卫星标记,采用PCR扩增和毛细管电泳技术检测108只特克塞尔×哈萨克羊杂交群体的遗传多样性,并对各位点不同基因型与生产性状进行关联分析。【结果】11个标记位点在该群体中共检测到91个等位基因,平均等位基因数为8.273,平均观测杂合度为0.428,平均期望杂合度为0.815,平均多态信息含量为0.789。关联分析发现如下位点与相应性状之间呈极显著或显著相关:AMEL、ETH152、INRA006和INRA023与初生重、断奶重、宰前重和胴体重;CSRD247与胴体长、腿垂直长;INRA005、MAF214和MCM527与腿会斜长、腿耻斜长和踝骨宽;INRA172和OARFCB20位点与臀宽、胸宽和肩宽;INRA063与胸深。【结论】11个微卫星标记位点在该群体中具有较丰富的遗传多态性,且与生产性状均有不同程度的关联性,可以为特克塞尔×哈萨克羊性状改良和育种工作提供分子标记。

绵羊体外胚胎高效利用的研究

【目的】比较绵羊卵母细胞体外受精后卵裂快慢对胚胎发育潜能及移植怀孕率的影响。【方法】使用因卵巢粘连无法作为超排供体的成年杜泊母羊,常规激素诱导卵泡超数发育,手术或屠宰回收卵丘—卵母细胞复合体(COCs),进行体外成熟(IVM),体外受精(IVF)和体外培养(IVC)。分别统计受精24、36、48 h卵裂情况及第7天的囊胚率,并按实验设计进行移植,统计怀孕率。其中,受精24 h及之前卵裂的记为卵裂快组,受精24 h之后卵裂的胚胎记为卵裂慢组。【结果】(1)卵裂快组胚胎占总胚胎数比例达77.85%,极显著高于卵裂慢组的22.15%(P<0.01);(2)卵裂快组囊胚率极显著高于卵裂慢组(68.95%vs 26.91%,P<0.01);(3)卵裂快组的早期胚胎移植单枚或双枚,怀孕率差异不显著(64.05%vs 65.62%,P>0.05);(4)卵裂慢组的早期胚胎移植两枚的怀孕率极显著高于移植单枚的结果(33.89%vs 11.67%,P<0.01),但均极显著低于卵裂快组的胚胎(P<0.01);(5)囊胚单、双胚移植怀孕率无显著差异(69.33%vs 70.46%,P>0.05);(6)受精后24 h或48 h移植,对怀孕率没有影响;(7)从形态上无法判断早期胚胎的质量。【结论】绵羊体外早期胚胎,卵裂快组单枚移植,卵裂慢组双枚移植,囊胚单枚移植,能提高胚胎利用率。

ASIP基因编辑细毛羊自然突变和编辑基因型的遗传研究

为了探究控制毛色的多拷贝基因(ASIP)编辑细毛羊自然突变(D_(9)、D_(5))和编辑突变的遗传特征和规律,分别将深棕色毛色表型的F_(0)代基因编辑中国美利奴细毛羊公羊与白色表型野生型母羊,有深色斑点表型的F_(0)代基因编辑母羊与野生型公羊交配,获得白色表型和深棕色及斑点状毛色表型F_(1)代个体23只。通过分析F_(0)、F_(1)代基因编辑羊ASIP基因的自然突变和编辑突变基因型,掌握编辑基因型的遗传规律和特征,以及自然突变、编辑突变与毛色表型的相关性。结果表明:F_(0)代基因编辑个体的4种主要编辑基因型(4bp碱基缺失、5bp,12bp碱基插入、27bp碱基缺失伴随1bp碱基插入及2bp碱基缺失)均在17只F_(1)代基因编辑羊得到遗传(另6只为野生型)。基因突变与毛色表型的相关性分析结果表明,D_(9)或D_(5)自然突变、ASIP基因编辑突变和拷贝数共同影响或决定基因编辑中国美利奴羊毛色图案的形成。