高脂高糖与低剂量链脲佐菌素诱导的糖尿病肾病大鼠模型的建立

目的建立高脂高糖与低剂量链脲佐菌素(STZ)诱导的SD大鼠的早期糖尿病肾病(DN)模型,模拟早期DN的病理改变及肾功能改变。方法将SPF级正常雄性SD大鼠30只按照体重随机分为正常组、模型组。正常组大鼠给予普通饲料喂养,模型组大鼠高脂饲料喂养8周后,腹腔注射STZ 35 mg/kg,形成糖尿病模型后,继续高脂高糖饲料喂养4周后,观察两组大鼠肾脏病理改变、生化及肾功能各项指标的改变情况。结果模型组大鼠体重显著低于正常组(P<0.01),而随机血糖值显著高于正常组(P<0.01),且达到糖尿病成模标准。模型组大鼠血清胰岛素水平显著低于正常组,相对肾重、24 h尿微量白蛋白、α1-微球蛋白、β2-巨球蛋白值显著高于正常组,差异有高度统计学意义(P<0.01)。模型组病理特征表现为肾小球基底膜增厚,系膜增宽,肾小球及肾小管糖原物质、胶原纤维聚集等。结论此造模方法可模拟早期DN的基本特征。

两色金鸡菊乙酸乙酯提取物对糖尿病大鼠视网膜VEGF和ICAM1表达的影响

目的探讨两色金鸡菊提取物对糖尿病大鼠血管内皮生长因子（VEGF）和细胞间黏附分子1（ICAM1）表达的影响。方法采用高糖、高脂喂养联合腹腔注射链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）建立2型糖尿病SD大鼠模型,成模大鼠随机分为正常组、模型组、阳性药二甲双胍组及两色金鸡菊乙酸乙酯提取物高、中、低剂量组共6组,每组10只。给药4w后,采用免疫组织化学染色法检测各组大鼠视网膜中VEGF和ICAM1蛋白的表达。结果与正常组比较,模型组大鼠视网膜VEGF和ICAM表达水平明显提高（P〈0.05）;与糖尿病模型组比较,两色金鸡菊乙酸乙酯提取物中剂量组糖尿病大鼠视网膜VEGF和ICAM1的表达均明显降低（P〈0.05）。结论两色金鸡菊乙酸乙酯提取物可通过下调VEGF和ICAM1的表达,抑制糖尿病大鼠视网膜血管新生和炎症反应,发挥对糖尿病视网膜损伤的保护作用。

两色金鸡菊黄酮成分马里苷对胰岛β细胞的保护作用

目的探讨两色金鸡菊黄酮成分马里苷对胰岛β细胞的保护作用及可能机制。方法将培养的MIN6细胞分为正常对照组、高糖高脂模型组及马里苷低、中、高浓度(100、200、400μmol/L)给药组。运用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测其活性;酶联免疫法(ELISA)检测胰岛素分泌量;Western Blot方法检测细胞中BAX,Bcl-2蛋白表达水平。结果与正常对照组比较,高糖高脂模型组细胞增殖能力能力明显降低(P<0.05),马里苷不同剂量干预组MIN6细胞增殖均明显增加(P<0.05)。与正常对照组比较,高糖高脂模型组细胞胰岛素分泌量明显降低(P<0.05);与高糖高脂模型组比较,给药组细胞胰岛素分泌量明显升高(P<0.05)。Western印迹显示,与正常对照组比较,高糖高脂模型组BAX蛋白表达量增多,给药组随浓度递增依次减少;高糖高脂模型组Bcl-2蛋白表达量减少,给药组随浓度增加依次增多(P<0.05)。结论马里苷对高糖高脂造成的胰岛细胞损伤有保护作用,其可能机制可能与Bcl蛋白家族有关。

两色金鸡菊提取物抑制高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞炎症反应及相关机制研究

目的探讨两色金鸡菊乙酸乙酯提取物对高糖诱导大鼠肾小球系膜糖尿病肾病(DN)细胞模型的影响及其作用机理。方法通过高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞建立体外DN细胞模型,应用两色金鸡菊乙酸乙酯提取物不同浓度对细胞模型进行干预后,分为正常组、高糖组及高糖+两色金鸡菊乙酸乙酯提取物不同剂量(25、50、100、150μg/mL)组共6组。采用Real time-PCR法、Western blot法,从转录水平及蛋白表达水平检测其对细胞中炎性因子单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)以及对NF-κB信号通路中p-65表达的影响。结果两色金鸡菊乙酸乙酯提取物能明显抑制高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞中炎症因子MCP-1mRNA和蛋白表达水平,以及ICAM-1的mRNA表达水平。两色金鸡菊乙酸乙酯提取物能明显抑制高糖诱导大鼠肾小球细胞中p-65蛋白的表达。结论两色金鸡菊乙酸乙酯提取物可能通过NF-κB信号通路抑制DN细胞模型的炎症反应。

马里苷通过AMPK通路抑制高糖软脂酸诱导大鼠肾小球系膜细胞氧化应激及炎症损伤的作用机制

目的 研究马里苷介导AMPK信号通路,延缓糖尿病肾病(DN)氧化应激、炎症损伤,抑制纤维蛋白表达的作用。方法高糖软脂酸诱导大鼠肾小球系膜细胞(HBZY^-1)建立体外DN模型,将细胞分为:正常对照组(NG)、模型组(葡萄糖100 mmol·L ^-1 +软脂酸250 μmol·L ^-1 ,HG+PA)、马里苷不同剂量组(25、50、100、200 μmol·L ^-1)。采用MTS法检测马里苷对HBZY^-1细胞增殖的影响,从中筛选最适给药浓度;Western blot法检测各组细胞中NOX4、MCP^-1、TGF-β1、FN、α-SMA、Collagen Ⅵ,以及AMPK蛋白家族中AMPKγ1、p-AMPKα的表达水平。结果马里苷抑制高糖软脂酸诱导的HBZY^-1细胞增殖;下调模型细胞中NOX4、TGF-β1、MCP^-1、α-SMA、FN及Collagen Ⅵ的表达;上调p-AMPKα及AMPKγ1的表达。结论马里苷可能通过活化AMPKγ1,激活AMPK信号通路,抑制HBZY^-1细胞氧化应激、炎症反应与纤维化蛋白的表达,延缓DN肾脏损伤。