RNA结合蛋白HuR对NF-κB抑制因子α转录后调控机制的初步研究

目的:探讨RNA结合蛋白HuR对NF-κB抑制因子α(IκB-α)转录后调控机制。方法:构建IκB-αmRNA 3'UTR报告基因真核表达质粒,并转染3T3细胞;体外生物素标记IκB-αmRNA 3'UTR并进行RNA pull-down;过表达及干扰HuR后,qPCR检测其对IκB-αmRNA稳定性的影响,Western bltting检测其对IκB-α蛋白表达的影响。结果:(1)IκB-αmRNA 3'UTR报告基因真核表达质粒构建成功;(2)报告基因检测:共转染pcDNA3-HA-HuR质粒及IκB-αmRNA 3'UTR报告基因质粒后与对照组相比其数值明显增高;(3)用生物素标记的IκB-αmRNA3'UTR探针进行RNA pull-down,可以检测到特异性结合的HuR蛋白;(4)过表达HuR,IκB-αmRNA稳定性无明显变化,蛋白表达明显上调;干扰HuR表达后,IκB-αmRNA稳定性无明显变化,蛋白表达明显下调。结论:(1)HuR可以与IκB-αmRNA 3'UTR特异性结合并参与调节IκB-αmRNA 3'UTR的功能;(2)HuR对IκB-αmRNA稳定性无明显影响,其主要调控IκB-α蛋白表达,使其表达上调。