siRNA-Gli-1联合BCNU抑制胶质瘤细胞U251增殖

目的探讨siRNA-Gli-1联合卡莫司汀(BCNU)对人脑胶质瘤U251细胞增殖和凋亡的影响和作用机制。方法 U251细胞按处理方式不同分为5组:BCNU组(BCNU)、siRNA-Gli-1组(siRNA-Gli-1)、联合组(siRNA-Gli-1+BCNU)、空转组(转染试剂LipofectamineTM2000,lipo)和空白组(细胞培养液RPMI1640)。U251细胞转染siRNA-Gli-1,半定量PCR和Western blot方法检测Gli-1表达及siRNA-Gli-1联合BCNU对BCL-2、CyclinD1和BAX表达的影响;MTT法检测细胞生长抑制率、流式细胞仪检测细胞周期、Annexin V法检测细胞凋亡,观察siRNA-Gli-1联合BCNU对U251细胞增殖能力的改变。结果 siRNA-Gli-1组和联合组中Gli-1 mRNA表达较其他3组明显下降(分别为40.35±0.17、45.20±0.23、93.30±0.43、98.60±0.06和95.93±0.21,P<0.05);BCL-2、CyclinD1表达显著下降,BAX蛋白表达增加或无变化,联合组较siRNA-Gli-1组更明显(P<0.05);与空白组和空转组相比,BCNU组、siRNA-Gli-1组和联合组细胞凋亡率增加(分别为0.76%±0.70%、0.53%±0.82%、12.87%±0.57%、22.23%±0.39%和28.76%±1.55%,P<0.01),细胞分裂明显阻滞于G0/G1期,S期减少;siRNA-Gli-1组、BCNU组和联合组细胞生长抑制率均随时间的延长而升高(P<0.05)。结论 siRNA-Gli-1联合BCNU抑制胶质瘤U251细胞的增殖机制可能与阻滞细胞周期、增强BAX和抑制BCL-2表达有关。