泡球蚴Em18抗原基因的分段表达及抗原表位的初步分析

目的构建截短的泡球蚴18(Em18)基因的原核表达质粒,获得高效表达、有生物活性的重组蛋白并对其进行初步鉴定。方法采用DNAman软件设计引物,聚合酶链式反应(PCR)法扩增并构建截短的pET41a-Em18.4原核表达质粒,测序鉴定插入序列正确性。异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导、表达和纯化rEm18.4-GST重组蛋白,采用SDS-PAGE电泳及蛋白免疫印迹法(Western blot)和酶联免疫吸附法(ELISA)检测对其进行初步鉴定。结果成功构建出截短的pET41a-Em18.4,SDS-PAGE检测表明rEm18.4-GST重组蛋白得到成功表达,在相对分子量为41KDa处有表达条带。但蛋白免疫印迹法(Western blot)和酶联免疫吸附法(ELISA)检测结果显示rEm18.4-GST重组蛋白不能与AE患者阳性血清反应。结论成功构建出截短的pET41a-Em18.4原核表达质粒并表达的rEm18.4-GST重组蛋白,但其缺乏抗原性,可能与Em18的空间构象有关。

西昆仑山2个海拔位点可培养细菌多样性分析

以西昆仑山2个海拔样点的土样为对象,利用(LB和TSA)2种培养基,基于16S rRNA基因序列的系统发育,采用纯培养法对其可培养细菌多样性进行研究。2样点中共分离到91株细菌,分为25个属,52个种。厚壁菌门(Firmicutes)占总菌数的48.75%,放线菌门(Actinobacteria)占36.25%,γ-变形菌亚门(γ-Proteobacteria)占15%。其中,Bacillus属(占所有菌株的27%)为优势菌群,Arthrobacter属(占15%),Pseudomonas属(占10%)为次优势菌群。大多数菌株与其系统发育关系最密切的已知物种,其典型菌株之间存在一定的遗传差异,16S rRNA基因序列相似性为98.2%～99.9%;其中至少有10个菌株(占所有菌株的11%)代表潜在的新分类单元(它们与最近源模式菌株的16S rRNA基因序列相似性低于97.8%)。分离到的细菌大部分与土壤、冰川、海洋、盐湖、沙漠、动物内脏等环境分离的细菌具有高度相似性。辛普森多样性指数(Simpson’s diversity index);香农-威纳指数(Shannon-Wie-ner index);香农-威纳均匀度指数(Shannon-Wiener’s evenness index)分析显示,高海拔地区(3 100 m)可培养细菌多样性高于低海拔地区(2 795 m),而高海拔地区可培养细菌的分布均匀度则低于低海拔地区。表明西昆仑山可培养细菌不仅具有丰富的多样性,还蕴藏着较多具有地域特点的新菌种资源。