miRNA-208a-3p过表达致慢性心衰大鼠心肌细胞线粒体钙超载和功能障碍的机制研究

目的观察miRNA-208a-3p在慢性心力衰竭大鼠心肌中的表达水平,探讨其在线粒体钙稳态和线粒体功能方面的调节机制。方法35只健康SD大鼠,随机分为模型组(n=20)和对照组(n=15),模型组采用腹主动脉直径缩窄法建立慢性心衰模型,对照组行假手术。通过心功能和组织病理学检测评价模型,测定心肌miR-208a-3p表达,心肌线粒体去乙酰化酶3(SIRT3)蛋白和NADH脱氢酶亚基1(ND1)蛋白表达、线粒体Ca2+水平、心肌细胞活性氧(ROS)生成。结果模型组大鼠心肌miR-208a-3p表达水平显著高于对照组(P<0.05),SIRT3蛋白表达显著低于对照组(P<0.001),且miR-208a-3p与SIRT3表达呈显著负相关;模型组ND1蛋白表达显著低于对照组(P<0.05),且ND1与SIRT3表达呈显著正相关;模型组心肌细胞线粒体内Ca2+水平显著高于对照组(P<0.05),心肌细胞ROS生成也显著高于对照组(P<0.05)。结论慢性心衰心肌组织miR-208a-3p过度表达与SIRT3/ND1活性降低相关,抑制线粒体呼吸链活性,此外,心肌细胞出现线粒体钙超载和ROS生成增加,进一步加剧线粒体呼吸功能障碍,是慢性心衰线粒体功能障碍的重要机制。

分子印迹前处理结合光纤传感-微顺序注射-阀上实验室在线衍生化检测血浆中的异丙酚

将分子印迹、在线衍生化与微顺序注射-光纤传感技术相结合,建立了在线前处理、在线检测、自动化分析的异丙酚光纤传感分析系统和方法。通过本体聚合法合成异丙酚分子印迹聚合物,构建异丙酚分子印迹固相萃取在线前处理系统,通过阀切换模式完成样品的预处理和分析检测的切换,实现在线前处理。通过光纤传感-微顺序注射-阀上实验室检测系统进行异丙酚衍生化反应和衍生化产物的光纤传感检测,使异丙酚分析过程一体化、自动化。该检测方法的线性范围为1.0~15.0μg/mL,线性相关系数r=0.9982,定量限为1.0μg/mL,加样回收率为101.7%~111.4%,相对标准偏差(RSD)小于5%。该方法为麻醉药物异丙酚血药浓度监测提供了检测新方法。

寒喘祖帕单煎配方与配伍合煎对16HBE细胞抗炎活性及非靶向代谢组学差异的研究

目的考察寒喘祖帕按照传统配伍合煎及单煎配方的抗炎活性,并采用UPLC-Q-TOF/MS研究非靶向代谢组学差异。方法通过体外脂多糖诱导16HBE炎症细胞,使用CCK-8法筛选出单煎配方组和配伍合煎组的剂量;采用逆转录酶聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)技术测定细胞中炎症因子IL-6、IL-8和TNF-α的mRNA表达水平,并采用UPLC-TOF/MS技术对细胞进行非靶向代谢组学分析:分为正常组(16HBE细胞+培养基)、模型组(16HBE细胞+培养基+0.1μg/mL LPS)、寒喘祖帕单煎配方组(16HBE细胞+培养基+0.1μg/mL LPS+50μg/mL单煎配方)、寒喘祖帕配伍合煎组(16HBE细胞+培养基+0.1μg/mL LPS+50μg/mL配伍合煎)。以此探究寒喘祖帕颗粒发挥抗炎活性的相关代谢通路,寻找寒喘祖帕颗粒抗炎活性相关的差异代谢物。结果与正常组比较,模型组在给药浓度为0.1μg/mL时细胞生长存活率未受到限制,差异无统计学意义(P>0.05);配伍合煎组在给药浓度为0~400μg/mL范围内时,细胞存活率未受影响,浓度>800μg/mL时,细胞生长存活率下降,差异具有统计学意义(P<0.01);而单煎配方组在浓度<50μg/mL时,细胞生长存活率未受到限制,浓度≥100μg/mL时,细胞生长存活率下降,差异具有统计学意义(P<0.01);RT-PCR实验结果显示:与正常组比较,模型组的IL-6、IL-8和TNF-αmRNA的表达上升,差异具有统计学意义(P<0.001),50μg/mL单煎配方较100μg/mL,IL-6、IL-8和TNF-αmRNA的表达下降,差异具有统计学意义(P<0.001);在相同药物浓度干预下,与正常组比较,模型组的IL-6、IL-8和TNF-αmRNA的表达上升,差异具有统计学意义(P<0.001),与模型组比较,单煎配方组和配伍合煎组可同时降低IL-6、IL-8和TNF-αmRNA的表达,差异具有统计学意义(P<0.001);配伍合煎组与单煎配方组比较,配伍合煎组IL-6、IL-8 mRNA的表达较单煎配方低,差异具有统计学意义(P<0.05)。代谢组学分析结果筛选出模型组与配伍合煎组间的内源性差异代谢物68个,主要与色氨酸代谢、甘油磷脂代谢和嘧啶代谢等有关;模型组与单煎配方组间识别出内源性差异代谢物62个,主要与甘油磷脂代谢、精氨酸和脯氨酸代谢等有关。结论寒喘祖帕单煎配方与配伍合煎对LPS诱导的炎症细胞模型抗炎效果存在差异,非靶向代谢组学分析结果表明两种方式通过不同的代谢通路发挥抗炎活性。

益生菌对脑缺血再灌注损伤大鼠Aβ表达的影响及神经元的保护作用

目的探讨益生菌干预对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织Aβ表达的影响及神经元的保护作用。方法实验动物为雄性Sprague-Dawley大鼠,随机分为4组,各组n=12:假手术组、模型组、益生菌组、依达拉奉组。假手术组仅分离颈总动脉,其余各组使用线拴法建立脑缺血再灌注模型。脑损伤程度使用神经行为学评分评估;大鼠脑组织梗死面积使用TTC染色观察;大鼠大脑海马CA1区与皮层区神经元病理形态学改变特征使用HE染色观察;Aβ蛋白的表达使用免疫组化实验检测。结果模型组相较假手术组,神经行为学评分升高(P<0.05),脑梗死面积增加(P<0.05),海马CA1区与皮层区神经元出现损伤,Aβ蛋白表达显著上调(P<0.001,P<0.05);益生菌组、依达拉奉组与模型组相比,神经行为学评分降低(P<0.05),脑梗死面积减小(P<0.05),海马CA1区与皮层区神经元损伤减轻,Aβ蛋白表达水平在两组中均显著下调(P<0.001,P<0.05);依达拉奉组改善更为明显。结论益生菌干预可下调Aβ蛋白的表达,减轻脑缺血再灌注大鼠脑组织损伤、发挥神经元保护作用。

新疆沙枣叶提取物体内外抗肿瘤活性研究

目的评价新疆沙枣叶水提取物(EALs)体内外抗肿瘤活性。方法采用MTT法测定EALs的体外抑瘤作用,计算半数抑制浓度(IC50)。通过建立S180荷瘤小鼠模型,观察不同浓度EALs对荷瘤小鼠肉瘤生长的抑制作用。采用ELISA法测定细胞因子IL-6和TNF-α的水平,HE染色观察肉瘤病理切片,探讨EALs对荷瘤小鼠免疫功能的影响。结果EALs对人乳腺癌细胞MCF-7、人肝癌细胞Hep G2、人慢性髓原白血病细胞K562、小鼠腹水瘤细胞S180、人非小细胞肺癌细胞A549、人组织细胞淋巴瘤细胞U937这6种常见的人肿瘤细胞均有抑制作用,其IC50值在95.123~303.427μg·mL-1。EALs对人乳腺癌细胞MCF-7抑制效果最好;EALs可明显抑制荷S180肉瘤小鼠模型肉瘤生长,能降低荷瘤小鼠血清细胞因子IL-6和TNF-α的水平,病理切片显示,中浓度EALs抑瘤效果较好。结论EALs具有一定的体内外抗肿瘤活性,体外人乳腺癌细胞MCF-7对其最为敏感,体内抑制效果以中浓度最佳,其作用机制可能与促进免疫功能有关。

脑缺血再灌注损伤大鼠肠道菌群的变化及功能分析

目的探讨脑缺血再灌注损伤(CIRI)大鼠的肠道菌群变化及其对CIRI的影响机制。方法将48只SD大鼠按随机数字表法分为Sham组、Model组各24只。Model组用线栓法阻断大鼠大脑中动脉血流2 h后恢复再灌注7 d建立大脑中动脉阻断模型,Sham组大鼠仅分离颈总动脉。再灌注7 d后,两组采集粪便标本,用16S rRNA测序技术进行肠道菌群丰度、多样性和差异性分析,用PICRUSt2分析差异菌群的功能。结果两组肠道菌群Alpha多样性比较差异无统计学意义(P>0.05),两组肠道菌群结构比较差异有统计学意义(P<0.05)。与Sham组比较,Model组乳酸杆菌属、颤螺菌属丰度低(P均<0.05),消化链球菌科、肠杆菌科等丰度高(P均<0.05)。差异菌群的功能在代谢通路富集,神经变性疾病、萜类、聚酮在Model组显著聚集(P均<0.05)。结论CIRI大鼠肠道菌群紊乱,有益菌中的乳酸杆菌属、颤螺菌属丰度减少,有害菌中的肠杆菌科丰度增高;肠道菌群可能通过代谢途径中的神经变性疾病、萜类、聚酮促进CIRI。

疏肝清热通络方对糖尿病大鼠脂肪酸合成酶及心肌AMPK/eNOS信号通路的影响

目的研究疏肝清热通络方(SQT)对2型糖尿病大鼠脂肪酸合成酶及AMPK/eNOS通路的影响。方法75只大鼠随机分为对照组、模型组、SQT低、中、高剂量组,15只/组,采用高脂饮食联合链脲佐菌素建立2型糖尿病大鼠模型。SQT低、中、高剂量组分别灌胃给予大鼠10、20、30 g/kg的SQT,每日1次,连续8周,测定大鼠空腹血糖及糖化血红蛋白水平、血清游离脂肪酸(FFA)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)水平、肝组织脂肪酸合成酶(FAS)mRNA水平、心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)水平、AMPKα1、p-AMPKα1、eNOS、p-eNOS蛋白水平及心肌组织病理变化。结果与模型组比较,SQT低、中、高剂量组大鼠空腹血糖及糖化血红蛋白水平、血清FFA、TG、TC、LDL-C水平、肝组织FAS mRNA及心肌组织MDA水平均显著降低(P<0.05),大鼠心肌SOD活性、AMPKα1、eNOS、p-eNOS/eNOS、p-AMPKα1/AMPKα1水平显著升高(P<0.05),心肌组织病理学明显改善。结论疏肝清热通络方能够明显降低2型糖尿病大鼠血糖及血脂水平,抑制脂肪酸合成酶基因的表达,激活心肌组织AMPK/eNOS信号通路,改善心肌氧化应激损伤。

基于TLR4/MyD88信号通路探讨刺糖多糖对溃疡性结肠炎小鼠的作用及机制

目的 基于TLR4/MyD88信号通路探讨刺糖多糖对溃疡性结肠炎(UC)小鼠的作用及机制。方法 将42只C57BL/6小鼠随机分成正常组、模型组、美沙拉嗪组(100 mg·kg^(-1))及刺糖多糖低、中、高剂量组(100、200、400 mg·kg^(-1));除正常组外,其他各组小鼠采用自由饮用3%葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液诱导建立UC模型,共7 d;同时各给药组小鼠按照上述设定剂量灌胃给药,每日1次,连续11 d。测定小鼠体质量、疾病活动指数(DAI)、结肠长度,采用苏木精-伊红(HE)染色法观察结肠组织病理变化,并进行病理学评分;ELISA法检测结肠组织中白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、IL-10及肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;Western Blot法检测结肠组织中TLR4、MyD88蛋白表达水平。结果 与正常组比较,模型组小鼠的体质量显著降低(P<0.01),DAI评分显著升高(P<0.01),结肠长度显著缩短(P<0.01),组织病理学评分明显升高(P<0.05),结肠组织中的IL-1β、IL-6、TNF-α水平显著升高(P<0.01),IL-10水平显著降低(P<0.01),TLR4、MyD88蛋白表达显著上调(P<0.01)。与模型组比较,刺糖多糖中、高剂量组小鼠的体质量明显升高(P<0.05,P<0.01),DAI评分显著降低(P<0.01),结肠长度明显延长(P<0.05,P<0.01),组织病理学评分明显降低(P<0.05),结肠组织中的IL-1β、IL-6、TNF-α水平显著降低(P<0.01),IL-10水平显著升高(P<0.01),TLR4、MyD88蛋白表达明显下调(P<0.05,P<0.01)。结论 刺糖多糖能够改善DSS诱导的UC小鼠结肠组织的病理损伤,可能与其抑制TLR4/MyD88信号通路,发挥抗炎作用有关。

红茶菌在脑缺血再灌注损伤大鼠模型中的作用研究

目的:探讨红茶菌在脑缺血再灌注损伤大鼠模型中是否有改善效果。方法:将48只清洁级SD大鼠根据随机数字表法分为假手术组、模型组、红茶菌组、依达拉奉组。红茶菌组术前给予红茶菌液灌胃7天以及再灌注麻醉清醒后追加灌胃1次,依达拉奉组大鼠在再灌注前15 min经腹腔注射依达拉奉,模型组和假手术组给予生理盐水。遵循Zea Longa线栓法阻断大鼠大脑中动脉血流2 h后恢复再灌注24 h建立MCAO模型,假手术组大鼠仅分离劲总动脉。再灌注24 h后,神经行为学评分评估脑损伤程度;TTC染色观察红茶菌对大鼠脑梗死面积比的影响并用Image J软件测定梗死面积;HE染色后观察大鼠脑组织皮层神经元病理形态学;透射电镜观察大鼠皮层神经元超微结构及线粒体形态。结果:脑缺血再灌注24 h后,对大鼠进行神经行为学评分,红茶菌组神经神经行为学评分为(2.21±0.60),依达拉奉组神经行为学评分为(2.01±0.66),均显著低于模型组(2.52±0.52)(P<0.05);TTC染色后观察到模型组大鼠大脑梗死灶明显,红茶菌组与依达拉奉组较模型组大鼠梗死面积明显减小;HE结果显示模型组大脑皮层神经元损伤明显,红茶菌组与依达拉奉组较模型组大脑皮层神经元坏死减轻,梗死面积缩小;透射电镜下观察到模型组大鼠染色质溶解,线粒体肿胀,红茶菌组与依达拉奉组较模型组溶解减少,线粒体结构较完整。结论:红茶菌可减轻脑缺血再灌注损伤大鼠模型的神经元损伤,有望成为改善脑缺血再灌注损伤的疗法或辅助疗法。