EM18-GST原核表达载体的构建及空间结构的生物信息学分析

目的构建GST-EM18原核表达质粒,优化EM18-GST重组蛋白诱导表达条件,通过生物信息学预测EM18蛋白的空间结构。方法以pMD18-T/Em18为模板,扩增EM18基因的CDS区,构建pGEX-3X-EM18,设计不同诱导表达条件表达EM18-GST蛋白。通过各种在线网站对EM18蛋白空间结构进行生物信息学预测。结果成功构建GST-EM18原核表达质粒,以1mmol/LIPTG于37℃诱导4h,蛋白表达较好;生物信息学预测EM18蛋白N端为无规卷曲,之后紧连两个α螺旋,C末端为无规卷曲和较短的片层结构。结论成功构建了GST-EM18原核表达质粒,表达的EM18蛋白含有无规则卷曲,可能是抗原表位所在位置。