安石榴苷对牙周致病菌的体外抑菌活性作用

目的探讨不同浓度安石榴苷对牙龈卟啉单胞菌、具核梭杆菌在浮游状态和生物膜状态下的抑菌活性的作用。方法(1)配置浓度为1×10^(8)CFU/mL的牙龈卟啉单胞菌、具核梭杆菌悬液,厌氧条件下分别用0.125、0.25、0.5、1、2、4、8 g/L的安石榴苷溶液处理48 h,测定安石榴苷最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)及最低杀菌浓度(minimum bactericidal concentration,MBC)。(2)将牙龈卟啉单胞菌、具核梭杆菌悬液分别分为1/2 MIC组(1/2MIC浓度安石榴苷药液)、MIC组(MIC浓度安石榴苷药液)、2 MIC组(2 MIC浓度安石榴苷药液)、阳性对照组(复方氯己定含漱液)和阴性对照组(菌悬液),厌氧条件下培养0、4、8、12、24、48 h时,应用酶标仪测定600 nm波长处光密度(optical density,OD)值。(3)将牙龈卟啉单胞菌、具核梭杆菌悬液分别分为MIC组、1/2 MIC组、1/4 MIC组、1/8 MIC组和阴性对照组,厌氧条件下培养48 h,应用紫外可见分光光度计测定600 nm波长处OD值,计算细菌黏附抑制率。(4)厌氧条件下将2种菌悬液与不同浓度安石榴苷溶液共培养制备生物膜,测定生物膜最低形成抑制浓度;厌氧条件下制备2种菌悬液生物膜,应用不同浓度安石榴苷溶液处理24 h,测定最低清除已形成生物膜浓度。结果(1)安石榴苷对牙龈卟啉单胞菌、具核梭杆菌的MIC均为2 g/L,MBC均为4 g/L。(2)安石榴苷处理4、8、12、24、48 h,1/2 MIC组、MIC组、2 MIC组、阳性对照组和阴性对照组牙龈卟啉单胞菌、具核梭杆菌OD值比较差异均有统计学意义(P<0.05)。随安石榴苷浓度增加,作用时间延长,其对牙龈卟啉单胞菌、具核梭杆菌的抑制作用增强。(3)MIC组、1/2 MIC组、1/4 MIC组牙龈卟啉单胞菌(0.423±0.026、0.764±0.009、1.243±0.023)、具核梭杆菌(0.180±0.007、0.366±0.009、0.612±0.017)细菌黏附OD值均低于1/8 MIC组(1.533±0.015、0.768±0.008)和阴性对照组(1.578±0.058、0.796±0.014)(P<0.05),且依次增高(P<0.05),1/8 MIC组细菌黏附OD值与阴性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。(4)安石榴苷对牙龈卟啉单胞菌、具核梭杆菌的生物膜最低形成抑制浓度均为4 g/L,最低清除已形成生物膜浓度分别为16、8 g/L。结论安石榴苷是一种天然药物,对牙周主要致病菌的浮游及生物膜状态有一定的抑制作用。