细粒棘球蚴TGF-βⅠ型受体全长和胞内域酵母双杂交载体的构建及自激活鉴定

目的构建细粒棘球绦虫（Eg）转化生长因子I型受体（EgTβRI）全长及胞内域酵母双杂交真核表达载体，愉测重组诱饵质粒对酵母菌株的毒性作用及自激活活性。方法采用TRIzol法提取细粒棘球蚴总RNA；采用RT—PCR扩增EgTβRI全长基因及EgTβRI胞内域（EgTβRIintracellulardomain，EgTβRII）基因片段，分别构建pGBKT7-EgTβRI和pGBKT7-EgTβRI—I真核表达载体，经PCR、限制性酶切鉴定及序列测定正确后，PEG／LiAc法转化人酵母菌株，检测诱饵蛋白对酵母菌的毒性作用及其自激活活性。结果成功构建了pGBKT7-EgTβRI及pGBKT7EgTβRI—I真核表达载体，经双酶切，分别得到1662bp和1314bp目的基因片段，大小与预测值相符。两重组质粒转化Y2HGold酵母菌形成的菌落与pGBKT7质粒转化酵母菌菌落大小一致，直径为1．5～2．0mm；两重组质粒转化酵母菌在SD／Trp／X／A平板上无蓝色菌落生长，在SD／-Trp平板上形成直径为2mill的菌落。结论成功构建了pGBKT7-EgTβRI及pGBKT7-EgTβRI—I真核表达载体，其表达蛋白对Y2HGold酵母菌无毒性作刷和无自激活活性；该表达载体可以用于酵母双杂交系统，为进一步研究EgTβRI与其配体之间的交互作用奠定了基础。