初断乳大鼠摄入高钙饲料对成年期高脂饲料后解偶联蛋白2基因表达的影响

目的通过对初断乳大鼠的高钙干预及成年后的高脂干预,测定大鼠骨骼肌中解偶联蛋白2(UCP2)mRNA的表达水平,探讨生命早期高钙摄入对成年期肥胖形成的影响。方法初断乳雄性Wistar大鼠120只随机分为正常饲料组和高钙饲料低(2%)、中(2.5%)、高剂量(3%)组。高钙干预4周后检测血脂。随后所有大鼠进行为期3周的基础饲料喂养。于第7周末取血检测血脂。将正常饲料组成年大鼠随机分为正常对照组和肥胖诱导组,肥胖诱导组及3个高钙组均喂以高脂饲料,肥胖诱导8周后处死所有大鼠取血检测血脂并冻存骨骼肌RT-PCR法半定量检测UCP 2基因表达水平。结果高脂干预后3个高钙组的体重增长量均低于肥胖诱导组,低剂量和高剂量组的体重增长量与正常对照组没有差别;高剂量组的血清甘油三酯含量明显低于肥胖诱导组,与正常对照组一致;肥胖诱导组和高剂量组的UCP 2基因表达水平明显低于正常对照组、低剂量和中剂量组;中剂量高钙组的表达水平明显高于正常对照组。结论初断乳大鼠的高钙喂养能够持续发挥作用,使其在成年后的高脂饲料喂养期间,UCP2基因表达增强,血脂紊乱得以改善。

雌酮与雌酮硫酸钠双抗夹心检测法的建立及验证比较

目的 建立雌酮和雌酮硫酸钠的双抗体夹心酶联免疫定量检测法,分别与高效液相色谱法（high performance liquid chromatography,HPLC）比对检测孕马尿中雌激素的含量,依据其符合性探讨雌酮C3位与雌酮硫酸钠C17位衍生物所得抗体的特异性.方法 由已制备的雌酮C3位与雌酮硫酸钠C17位衍生物分别免疫动物获得相应的单克隆抗体与多克隆抗体,分别建立各自的双抗体夹心酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）检测方法,鉴定其灵敏度、特异性、于现场测定样本,结果与HPLC结果比对. 结果 雌酮、雌酮硫酸钠衍生物小鼠单克隆抗体最佳稀释度为5 μg/mL、2.5 μg/mL,酶标多克隆抗体1∶3 000、1∶2 000,灵敏度0.515 μg/mL、0.365 μg/mL.两项结果雌激素含量与HPLC测定孕马尿中雌激素总含量呈曲线对应,但与单体含量不一致.结论 在方法学上成功建立了两种双抗体夹心ELISA法,实际应用中没能达到实验设计要求,但由此结果推断可能为制备两种雌激素衍生物时都将结构中的特征官能团进行了改造,使得制备出的抗体不能识别特征位点而致特异性不好,需要下一步实验再确定.