细粒棘球绦虫抗原B对免疫性血小板减少症小鼠模型免疫调节作用的初步研究

目的探讨细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus sensu stricto,E.granulosus s.s.)囊液自然抗原B(natural antigen B,nAgB)对免疫性血小板减少症(Immune thrombocytopenia,ITP)的调节作用。方法50只8~10周龄Balb/C雌性小鼠随机分5组,每组10只进行腹腔注射实验:I组:PBS处理组即空白对照组;II组:大鼠抗小鼠CD41单克隆抗体(anti-CD41 Ab)免疫组即ITP模型组;III组:nAgB对照组;IV组:nAgB连续免疫5 d后给予anti-CD41 Ab免疫组即nAgB+ITP组;V组:在anti-CD41 Ab免疫建立和维持ITP模型基础上,注射nAgB组即ITP+nAgB组。观察各组血小板(PLT)指标的变化。结果小鼠干预前血PLT计数均为(749.86±84.61)×10^(9)/L。II组和V组给予anti-CD41 Ab 2 d后分别与干预前比较差异均有统计学意义(t=31.299,t=20.955,均P<0.001),ITP建模成功。II组建模成功后与IV组PLT计数比较差异有统计学意义(t=7.493,P<0.001)。II组建模成功后第2 d与V组PLT计数比较差异有统计学意义(t=10.829,P<0.001)。II组建模成功后平均血小板体积(MPV)数值和血小板压积(PCT)数值分别与I组MPV数值和PCT数值比较差异有统计学意义(t=9.615,P<0.001;t=28.698,P<0.001)。结论AgB对免疫损伤所致ITP具有预防及治疗作用。

两种棘球绦虫丝氨酸蛋白酶抑制剂结构及功能的比较与分析

目的比较并分析细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus,Eg)和多房棘球绦虫(Echinococcus multilocularis,Em)不同时期高表达的两种丝氨酸蛋白酶抑制剂(serine protease inhibitor,简称Serpin)基因和编码蛋白的结构及功能。方法用NCBI-BLAST、ExPasy、TMHMM 2.0 Server、Signal 5.0 Server、PROSITE、Coils Server、SMART、SWISSMODEL、ElliPro等在线生物信息学网站及软件,对Eg和Em两种Serpin的同源性进行分析,并预测相应蛋白的基本理化性质、跨膜区、motif位点、功能域、二级和三级结构、细胞抗原表位等。结果 SerpinA在Eg和Em的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为94.02%和92.92%;SerpinB均为100%;SerpinA为稳定的亲水性蛋白,SerpinB为稳定的疏水性蛋白,均为非膜蛋白,在N-末端均有1个信号肽,且均为丝氨酸蛋白酶抑制剂家族成员;Eg-SerpinA、EmSerpinA和Eg(Em)-SerpinB二级结构α螺旋分别为47.96%、49.44%和36.00%,β折叠分别为15.80%、14.12%和17.33%,无规则卷曲分别为29.97%、31.36%和38.67%;Eg和Em Serpin A三级预测结构较接近;B淋巴细胞抗原表位预测结果显示,Eg-SerpinA和Em-SerpinA共有最佳线性表位候选区域为RCMPAPPVDFFVDHPFIFFIVTKTGIPVFMGHVVHP(316~351),Eg-SerpinB和Em-SerpinB则为NQETGQ(42~47);Eg-SerpinA与Em-SerpinA的最佳构象表位相同,为F334、I335、V336、T337、K338、T339、G340、I341、P342和V343;Eg(Em)-SerpinB则为N42、E44、T45、G46和Q47。T淋巴细胞抗原表位预测结果显示,Eg-SerpinA的T细胞最佳HLAⅠ类分子抗原表位为SPLSVYSAL(2~10),Em-SerpinA的最佳HLAⅡ类分子抗原表位为MPAPPVDFF(318~326);Eg(Em)-SerpinB的最佳HLAⅠ类分子抗原表位为VVISYSEAR(11~19)。结论两种棘球绦虫分泌的Serpin在虫体对宿主入侵、发育过程及对感染病灶的免疫损伤方面可能发挥了重要作用,对Serpin的研究有望应用于棘球绦虫病的诊断、药物治疗及疫苗研制领域。

布鲁氏菌外膜蛋白Omp2a抗原的克隆表达及其抗原性鉴定

目的构建和原核表达布鲁氏菌膜蛋白Omp2a,并进行抗原性鉴定。方法将布鲁氏菌外膜蛋白Omp2a基因连接到pET-30α原核表达载体上,转化到大肠埃希菌菌株BL21内。重组蛋白rOmp2a经IPTG诱导,亲和层析纯化后用SDS-PAGE凝胶电泳分离,确定目的蛋白的大小和表达丰度。通过Western blot与患者血清反应,确定重组rOmp2a的抗原性及诊断价值。结果成功构建布鲁氏菌外膜蛋白Omp2a的原核表达系统,测序表明阅读框架正确。用IPTG可诱导高表达Omp2a,SDS-PAGE显示其分子质量单位为38.4 ku,且其表达蛋白以包含体形式存在。Western blot显示rOmp2a能被布鲁氏菌感染患者血清识别,而不与细粒棘球绦虫和单纯疱疹病毒感染者血清反应。结论大肠埃希菌原核表达系统可高效表达不可溶的rOmp2a蛋白,该蛋白具有反应原性,对布鲁氏菌感染患者具有潜在的诊断价值。