敲低NOD2通过调控(p)NF-κB/STAT3改善肝细胞癌细胞炎症反应

目的 探讨核苷酸结合寡聚化结构域蛋白2(NOD2)对肝细胞癌(HCC)细胞炎症反应的影响和机制。方法 培养HCC细胞。Western blot检测NOD2在HCC细胞和正常肝细胞中的表达水平。利用小干扰RNA(siRNA)建立NOD2的敲低RNA(siNOD2组)用来抑制NOD2的表达,阴性对照为siNC组,使用这二者处理HCC细胞。CCK-8法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡率。Western blot检测NF-κB P65、STAT3、NOD2的表达,并检测磷酸化的(p-)NF-κB P65以及磷酸化的(p-)STAT3的表达水平。ELISA法测定培养HCC细胞培养物上清液中TNF-α、IL-12、IL-6、IFN-γ质量浓度的变化。在siNOD2处理HCC细胞的基础上,用NF-κB/STAT3的激活剂重组人Lipocalin-2(rhLipocalin-2)蛋白进行处理(siNOD2+rhLipocalin-2组),检测细胞增殖率、凋亡率和炎症因子水平。结果 与正常肝细胞相比,HCC细胞中NOD2的表达水平显著上调(P<0.05)。与siNC组相比,siNOD2组的NOD2、p-NF-κB P65及p-STAT3的表达水平均显著下调、细胞增殖率降低,细胞凋亡率增高,且细胞培养物上清液中TNF-α、IL-12、IL-6、IFN-γ水平均下调(均P<0.05)。而与siNOD2组相比,siNOD2+rhLipocalin-2组的p-NF-κB P65及p-STAT3的表达水平均显著上调,细胞增殖率增高,细胞凋亡率降低,且细胞培养物上清液中TNF-α、IL-12、IL-6、IFN-γ水平均上调(均P<0.05)。结论 敲低NOD2通过调控NF-κB/STAT3通路抑制HCC细胞的炎症反应,该结果为HCC治疗提供了一个新的潜在靶点。