X线照射泡球蚴原头节的体外实验研究

目的探讨X线对体外培养的泡球蚴原头节的杀伤作用。方法无菌采集子午沙鼠体内的泡球蚴中含原头节的囊液,将其加入RPMI 1640培养液中培养。原头节体外培养3 d后分装至培养瓶中,每组10瓶,每瓶约含10 000个原头节,设空白对照组、低剂量组(15 Gy和30 Gy)、中剂量组(45 Gy和60 Gy)、高剂量组(75 Gy和90 Gy)、阿苯达唑组(2 500 ng/ml)、45 Gy X线+2 500 ng/ml阿苯达唑组和75 Gy X线+2 500 ng/ml阿苯达唑组。X线照射剂量率为200 cGy/min,源皮距为100 cm。体外培养第4天开始照射,每组共照射3次,每次间隔1 d。首次照射后第1天开始每天取原头节培养液,0.1%伊红染色,光镜下计数每100个原头节中着色原头节数目,每组计算300个原头节的平均死亡率,直至实验组原头节全部死亡为止。同时光镜下观察经X线照射后原头节的变化。结果不同放射剂量组的原头节死亡率与空白对照组间的差异均有统计学意义(P<0.05)。阿苯达唑组原头节死亡率与放射线联合阿苯达唑组间的差异均有统计学意义(P<0.05),且显著高于空白对照组(P<0.05)。其中,X线联合阿苯达唑组与单用X线组原头节死亡率间的差异有统计学意义(P<0.05)。X线照射前原头节饱满、轮廓清晰、结构完整,X线照射后的原头节多呈外翻型,原头节顶突上的小钩排列紊乱,部分脱落,吸盘突起变形,结构塌陷,死亡。结论 X线可在体外杀伤泡球蚴原头节。

阿苯达唑微球肝动脉灌注对大鼠肝泡状棘球蚴病的治疗作用

目的观察阿苯达唑-PEG6000固体分散体壳聚糖微球经肝动脉灌注治疗大鼠肝泡状棘球蚴病的效果。方法将肝泡状棘球蚴病模型大鼠30只,随机均分为3组,即生理盐水对照组(A)、空白微球组(B)和阿苯达唑微球组(C),A、B和C组分别经肝动脉灌注0.3 ml生理盐水、空白微球2.7 mg/kg(溶于0.3 ml生理盐水)、阿苯达唑-PEG6000固体分散体壳聚糖微球2.7 mg/kg(溶于0.3 ml生理盐水)。于灌注后第1、3、7、14和42天采集大鼠外周静脉血,检测白细胞(WBC)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)的值。第42天处死全部大鼠,取肝泡状棘球蚴组织,观察各组病理变化。结果各组大鼠白细胞第1天出现暂时性升高[A组(86.11±19.14)×109/L、B组(117.11±21.76)×109/L和C组(118.11±24.52)×109/L],第7天恢复正常[A组(7.85±6.57)×109/L、B组(11.73±4.85)×109/L和C组(8.49±1.36)×109/L]。B、C组在第3天AST、ALT达到最高值[B组AST(193.15±21.57)U/L、ALT(78.39±9.78)U/L;C组AST(189.91±14.06)U/L,ALT(88.43±9.23)U/L)],与A组的差异均具有统计学意义(P<0.05)。第14天恢复正常水平[B组AST(109.31±15.48)U/L、ALT(47.86±9.49)U/L;C组AST(105.37±8.16)U/L、ALT(49.53±6.75)U/L],与A组的差异均无统计学意义(P>0.05)。第42天病理组织学检查结果显示,A、B组大鼠肝泡状棘球蚴结构基本正常,C组病变以生发层坏死为主。结论阿苯达唑-PEG6000固体分散体壳聚糖微球经肝动脉灌注治疗大鼠肝泡状棘球蚴病有一定疗效。

原代培养建立哈萨克族食管癌细胞系的研究

目的:探讨应用原代培养技术建立哈萨克族食管癌细胞系。方法:取手术切除的哈萨克族食管癌癌组织标本 6例 ,进行原代培养 ,并纯化。 结果:建立了食管癌细胞体外培养方法及其相关技术与条件 ,培养出 1例哈萨克族食管癌原代细胞。 结论:新鲜癌组织、适宜的胎牛血清浓度及上皮细胞纯化是建立食管癌细胞系的关键性条件。

阿苯达唑脂质体在小鼠体内的分布及其药物动力学研究

目的 了解阿苯达唑脂质体在小鼠体内的分布与药动学特征。方法 以中和法制备阿苯达唑脂质体 ,用氚标记液体闪烁法监测脂质体在小鼠体内的药物动力学过程。结果 脂质体经ip后 ,药物主要分布在肝脏。结论 阿苯达唑脂质体可特异性地将药物靶向到肝脏 ,提高了药物的生物利用度 ,在治疗肝包虫病方面有积极的作用。

番茄红素干预食管癌细胞系Eca9706的实验研究

目的 :研究番茄红素体外对食管癌细胞 Eca970 6的作用及可能机制。方法 :番茄红素 1 0 - 3mol/L、1 0 - 4mol/L、1 0 - 5mol/L、1 0 - 6 mol/L、1 0 - 7mol/L 5个浓度组干预食管癌细胞2 4 h,观察细胞存活量及蛋白含量 ,并用免疫组织化学的方法观察 bcl- 2蛋白在干预前后的表达。结果 :番茄红素 1 0 - 3mol/L时 ,有促进肿瘤生长趋势 ,1 0 - 4mol/L、1 0 - 5mol/L、1 0 - 6 mol/L有抑制细胞肿瘤生长作用 ,而且 1 0 - 4mol/L效果最好 ,1 0 - 7mol/L对抑制肿瘤生长效果不明显 ,仅有轻度抑制作用 ( P>0 .0 5 )。而蛋白含量仅有 1 0 - 6 mol/L、1 0 - 7mol/L有轻度抑制作用但无统计学意义 ( P>0 .0 5 )。免疫组织化学结果显示 ,bcl- 2表达于此细胞系。干预后未见bcl- 2表达。结论 :番茄红素对食管癌细胞系 ( Eca970 6)有抑制生长作用 ,有剂量反应关系 ,此作用与抑制 bcl- 2蛋白表达有关。

小鼠感染泡球蚴后细胞因子水平的变化

目的 观察人工接种泡球蚴 (EM)昆明小鼠体内 6种细胞因子水平的动态变化 ,研究泡球蚴病的免疫学机制。 方法 实验组和对照组小鼠分别腹腔接种泡球蚴及生理盐水 ,持续观察 2 60d ,收集各组血清用ELISA法检测血清中白细胞介素 2 (IL 2 )、γ干扰素 (IFN γ)、肿瘤坏死因子 α(TNF α)、IL 4、IL 5、IL 10水平。 结果 实验组 6种细胞因子水平始终高于正常对照组 ,其中辅助性T细胞 1(Th1)类细胞因子IL 2水平在感染后 80d达到峰值 ,感染 14 0d后迅速降低 ;TNF α水平在感染后 40d较对照组明显上升 ,感染 10 0d左右达到峰值 ,14 0d后迅速下降 ;IFN γ在感染 80d后达到峰值 ,14 0d后缓慢下降 ;而在 80d以前 ,辅助性T细胞 2 (Th2 )类细胞因子IL 4、IL 5、IL 10维持在较低水平 ;10 0d后 ,这 3类细胞因子明显上升 ,其中IL 4、IL 10水平在 10 0d达到峰值 ,IL 5水平在 14 0d达到峰值 ,以后维持在较高水平。 结论 Th2细胞介导的体液免疫与Th1细胞介导的细胞免疫共同参与了宿主抗棘球蚴免疫。感染早期以Th1细胞介导的细胞免疫应答为主 ,感染中晚期转化为以Th2细胞介导的体液免疫为主。

Eg95基因疫苗不同免疫途径的体液免疫应答比较

目的:用构建的细粒棘球蚴 95 (Eg95 )抗原基因真核表达重组质粒 pc DNA3- Eg95 ,直接免疫小鼠 ,观察其所诱导的体液免疫反应。方法:碱裂解法大量提取重组质粒 ,采用肌肉注射、静脉注射、皮下注射 3种免疫途径和不同剂量的重组质粒免疫小鼠 ,用 EL ISA法测定小鼠血清抗体滴度。 结果:在相同剂量下 ,重组质粒免疫小鼠刺激机体产生抗体反应强度的免疫途径依次为肌肉、皮下和静脉注射 ,阳性反应率由高到低依次为皮下、肌肉和静脉注射。以肌肉注射方式免疫小鼠的抗体反应维持时间较长 ,主要产生 Ig G2 a为主的抗体。 结论 :用 pc DNA3-Eg95重组质粒

2007年新疆和布克赛尔蒙古自治县棘球蚴病现况调查

目的了解2007年新疆和布克赛尔蒙古自治县人群棘球蚴病主要流行现状及其分布特征。方法采用整群抽样方法，在该县抽取铁布肯乌散乡、那仁和布克牧场2个地区的居民，用问卷调查、血清免疫学和B超检查等方法进行人群棘球蚴病流行病学现况调查。结果调查人群B超及手术史检出的棘球蚴病患病率为9．0％（64／712），血清学阳性率为15．6％（111／712），其中细粒棘球蚴病患病率为8．7％（62／712），多房棘球蚴病患病率为0.3％（2／712）。不同职业、年龄、家庭屠宰牲畜和饮用水源的人群细粒棘球蚴病患病率，差异有统计学意义（P〈0．05），其中职业以牧民患病率[13．4％（27／201）]最高，年龄以20～〈40岁年龄组人群患病率最高（12．8％），但不同性别、民族及文化程度人群细粒棘球蚴病患病率和血清学阳性率差异无统计学意义（P〉0．05）。结论细粒棘球蚴病在该地区高度流行，职业、年龄及饮用水源可能是其主要的危险因素。

体外培养骨髓基质细胞增殖和分化的相互关系

目的:建立一种简单可靠的骨髓基质细胞向成骨细胞转化的体外培养方法,探讨骨髓基质干细胞增殖和分化的相互关系。方法:实验于2003-02/12在新疆医科大学第1附属医院包虫病临床研究所细胞室完成。将兔骨髓基质细胞悬液进行体外培养,传代培养后分组:①普通培养基组传代后仍使用普通培养基培养,每3天换液1次。②条件培养基组,分5种情况,在普通培养基中培养至第3,10,20代后即分别使用条件培养基(Dulbecco’s改良的Eagle’s培养基中加入地塞米松10-7mmol/L,β-甘油磷酸钠10mmol/L,维生素C50mg/L)持续培养30d,每3天换液1次;传代后使用条件培养基持续培养30d,每3天换液1次;传代后使用条件培养基持续培养30d,每4天传代1次。形态学观察采用倒置显微镜;碱性磷酸酶染色采用偶氮偶联法;观察钙结节形成采用Vonkossa’s染色。结果:①各组细胞形态学观察结果:普通培养基组在形态上与条件培养基组细胞无明显差别。②各组细胞钙结节和碱性磷酸酶染色结果:普通培养基培养至第3,10,20代后用条件培养基及传代后用条件培养基(每3天换液)组细胞碱性磷酸酶阳性率达80%以上,表现为成骨细胞形态并形成钙结节,Vonkossa’s染色阳性;普通培养基组及传代后用条件培养基(每4天换液)组细胞的碱性磷酸酶染色为阴性,未能形成钙结节,Vonkossa’s染色阴性。结论:①贴壁筛选法是一种简单可靠的分离骨髓基质细胞的方法。②骨髓基质细胞的分化和增殖是两个对立的状态。

细粒棘球蚴抗原B酵母表达载体的克隆与序列分析(英文)

目的 获得重组细粒棘球蚴抗原 B(Eg B)的真核表达蛋白 ,构建 Eg B酵母表达重组体 ,并对构建的重组体进行序列分析。方法 以原核重组体 JM10 9- p Mal2 x Eg B作为模板 ,采用聚合酶链式反应 (PCR)扩增 Eg B片断。目的基因 Eg B片断插入酵母表达载体 p YES2 / NT B,再将酵母表达重组体转化 DH5 a菌 ,并对转化筛选的重组体进行序列分析。 结果 共筛选得到 16个重组克隆 ,其中 7个克隆证实为 Eg B正确序列 ,并与酵母表达载体的开放阅读框 (ORF)相一致。 结论 成功地将细粒棘球蚴抗原 B基因构建入酵母表达载体 p YES2 / NT B的开放阅读框。此重组体可在酵母中进一步表达特异性蛋白。

甲基强的松龙对香烟烟雾提取物诱导A549细胞I-κBα的影响

目的：观察香烟烟雾提取（CSE）诱导人类怖泡Ⅱ型上皮细胞A549后Ⅰ-κBα的变化及甲基强的松龙（Mp）对其的影响。方法：体外培养A549细胞系，根据条件不同将其分为3组：（1）对照组：无血清DMEM处理。（2）CSE组：10％浓度CSE处理。（3）CSE＋Mp组：CSE刺激后加入0．015％甲基强的松龙处理。于不同时间段收集各组细胞裂解物后，应用免疫印迹法（Western blot）、酶联免疫法（ELISA）观察Ⅰ-κBα的变化。结果：对照组无变化，CSE组Ⅰ-κBα从处理后15min开始后减少，30min后消失，CSE＋Mp组Ⅰ-κBα在15～30min内始终有本底表达，3组间Ⅰ-κBα蛋白的表达水平差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：甲基强的松龙能使CSE刺激后A549细胞Ⅰ-κBα蛋白表达增加。