GSTM1、CYP2E1基因多态性与新疆维吾尔族妇女宫颈癌及癌前病变关联性的研究

目的:探讨谷胱甘肽硫转移酶基因GSTM1和细胞色素氧化酶P4502E1(CYP2E1)的基因多态性与新疆维吾尔族妇女宫颈癌前病变与癌的关联性。方法:用聚合酶链反应(PCR)方法及聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法为21例浸润性宫颈癌(ICC)、41例宫颈上皮内瘤变(CIN)及45例慢性宫颈炎标本进行GSTM1和CYP2E1RsaⅠ位点基因分型。结果:ICC组和CIN组的GSTM1空白基因型频率明显高于慢性宫颈炎组(对照组),差异有统计学意义(χ2=7.56,P<0.05;χ2=13.30,P<0.05),携带GSTM1(-)的个体患宫颈癌的危险性比携带GSTM1(+)的个体升高3.47倍(OR=4.47,95%CI=1.5～13.0),患CIN的危险性升高4.30倍(OR=5.30,95%CI=2.2～13.0)。CYP2E1基因RsaⅠ位点多态在3组的频率差异无统计学意义(χ2=2.28,P>0.05)。联合分析3组病例CYP2E1基因RsaⅠ多态性和GSTM1基因多态性,未发现两者之间的交互作用与ICC及CIN易感性有关(χ2=4.47,P>0.05)。结论:GSTM1基因空白型可能与维吾尔族宫颈癌及癌前病变风险增加有关,CYP2E1基因RsaⅠ多态性与宫颈癌及癌前病变无关。

O^6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶基因多态性与新疆哈萨克族食管癌易感性关系的研究

目的为探讨O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)基因多态性与新疆哈萨克族食管癌易感性的关系。方法运用病例-对照研究的方法,PCR-RFLP技术检测新疆哈萨克族食管癌51例及非癌对照109例的MGMT84C>T和MGMT135G>T单核苷酸多态(SNPs)的基因型。结果MGMT84C>T位点的三种基因型CC,CT,TT,在哈萨克族食管癌中所占比例分别为76.5%(39/51)、17.6%(9/51)、5.9%(3/51),对照组分别为77.0%(84/109)、18.3%(20/109)、4.6%(5/109),两组间分布差异不显著(P=0.938,P>0.05);MGMT135G>T位点的三种基因型GG,GT,TT,在哈萨克族食管癌中所占比例分别为90.2%(46/51)、7.8%(4/51)、2.0%(1/51),对照组分别为82.6%(90/109)、16.5%(18/109)、0.9%(1/109),两组间分布差异不显著(P=0.295,P>0.05);MGMT84C>T位点和MGMT135G>T位点联合分析,在食管癌组0突变等位基因与1-4突变等位基因所占比例分别为68.6%(35/51)、31.4%(16/51);对照组分别为:63.3%(69/109)、36.7%(40/109),两组间分布差异也不显著(P=0.511,P>0.05)。结论MGMT84C>T和MG-MT135G>TSNPs与哈萨克族食管癌易感性可能无关联。

泡球蚴感染小鼠肝组织T-bet、GATA-3、ROR-γt和IL-17 mRNA表达水平的研究

目的:研究泡球蚴感染小鼠肝组织T-bet、GATA-3、ROR-γt和IL-17mRNA表达水平的变化特点,初步探讨Th17细胞与Th1/Th2在棘球蚴感染中的相互关系。方法:通过腹腔接种多房棘球绦虫的幼虫原头蚴混悬液制备泡球蚴感染小鼠模型,持续观察10个月,分别在感染2天、8天、1月、3月、6月和10月处死小鼠,收集肝脏组织。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测各组小鼠肝脏组织T-bet、GATA-3、ROR-γt和IL-17 mRNA的表达水平。结果:T-bet mRNA的表达水平在感染早期开始增高,1月时达高峰后又开始缓缓下降至感染前水平;GATA-3 mRNA的表达水平在感染1月时明显升高,随后一直保持较高的表达水平;ROR-γt mRNA的表达水平在感染早期开始增高,感染1月时达到高峰,随后缓慢下降。IL-17 mRNA表达水平自感染早期开始持续性增高,到感染3月时达高峰,之后又逐渐降低至感染前水平。各组小鼠肝组织ROR-γt mRNA表达水平与T-bet mRNA表达水平呈正相关(r=0.67),IL-17 mRNA表达水平与ROR-γt mRNA表达水平有相关性(r=0.35),P值均<0.05。结论:泡球蚴感染宿主早期,主要以Th1型和Th17型细胞免疫为主,感染中后期出现Th1向Th2转化,机体呈现出以Th2细胞为主的优势应答。

5-氮胞苷诱导大鼠骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的研究

目的探讨体外5-氮胞苷诱导大鼠骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的可行性。方法分离培养骨髓间充质干细胞,传至第3代后,加入5-氮胞苷诱导24h,按照诱导浓度分为对照组、5μmol/L组、10μmol/L组、15μmol/L组4组,培养4w,倒置显微镜观察形态变化,有无自发搏动,在第1、2、3、4w行细胞免疫组化检测α-Actin、Connexin43表达。结果 5-氮胞苷浓度10μmol/L组为适宜诱导浓度,5μmol/L组浓度不能达到诱导分化作用,15μmol/L组细胞死亡率高。未观察到心肌样细胞的单个搏动或多个同步搏动。结论经过5-氮胞苷诱导后的心肌样细胞在形态和结构特性上均与心肌细胞相似,但由于5-氮胞苷为细胞毒性药物,其应用于临床的安全性有待商榷。

新疆维吾尔族食管癌患者血清蛋白指纹图谱诊断模型的建立

目的:筛选并建立新疆维吾尔族食管癌血清蛋白指纹图谱诊断模型,为食管癌的诊断与临床筛查提供新的途径。方法:采用弱阳离子交换蛋白质芯片(CM10蛋白芯片)及表面增强激光解析离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术对23例新疆维吾尔族食管癌和33例新疆维吾尔族正常对照者血清指纹图谱进行检测,所得结果用ZUCI-蛋白芯片数据分析系统(ZUCI-Protein Chip Data Analyze System)软件包进行分析,通过支持向量机运算建立区分新疆维吾尔族食管癌蛋白指纹图谱诊断模型,并用留一法交叉验证作用评估模型,判别效果。结果:通过软件包运算,用2个质荷比峰(3269.4621、6056.8714m/z)建立了新疆维吾尔族食管癌蛋白指纹图谱诊断模型,准确度为92.9%,灵敏度为91.3%,特异度为93.9%,阳性预测值为91.3%。结论:SELDI-TOF-MS技术结合支持向量机建立新疆维吾尔族食管癌血清蛋白质指纹图谱模型为早期筛查及诊断新疆维吾尔族食管癌提供了一种特异性强、灵敏度高的新方法,值得进一步的研究和应用。

新疆包虫病手术患者生存质量量表的编制及信效度评价

目的编制一份适合测定新疆包虫病手术患者生存质量的量表。方法利用独立样本t检验、主成分分析等方法对量表项目进行分析,最终形成正式的生存质量量表。结果效度分析结果表明,量表由生理领域、心理领域、独立性领域、社会关系领域、环境领域5个维度构成,其累积解释变异量为58.285%;信度分析结果表明,总量表的克朗巴赫系数为0.868,各分量表的克朗巴赫系数分别为0.723、0.676、0.812、0.780、0.626。结论该量表有较高的信度和效度,可以用于包虫病手术患者生存质量的测量。

MTA1及nm23H1基因在新疆哈萨克族食管癌组织中的表达及临床意义

目的:研究肿瘤转移相关基因(MTA1)及nm23H1基因在哈萨克族食管癌组织中的表达及临床意义。方法:应用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术检测MTA1及nm23H1基因在20例食管癌组织及其相应癌旁组织中的表达。结果:癌组织中nm23H1阳性表达占50.00%(10/20),有淋巴结转移的癌组织中nm23H1mRNA的阳性表达率为40.00%(4/10),无淋巴结转移的为60.00%(6/10);浸润至外膜层的肿瘤中阳性表达率为71.43%(10/14)。MTA1基因在癌组织中有5例(25.00%)表达,且均为T3期肿瘤,癌旁组织仅1例表达。结论:nm23H1及MTA1基因的表达可能与哈萨克族食管癌的发生及浸润深度有关,二者协同作用,共同促进食管癌的发生及发展。

新疆地区汉、维两民族口腔扁平苔藓患者HLA Ⅱ-DRB1等位基因的检测与比较

目的:对新疆地区汉、维两民族口腔扁平苔藓(OLP)患者的人类白细胞抗原HLAⅡ-DRB1等位基因进行检测与分析。方法:采用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)技术,对34例汉族、14例维吾尔族OLP患者和123例汉族、42例维吾尔族正常对照进行HLAⅡ-DRB1等位基因表现频率的检测,采用SPSS16.0软件包对两组间等位基因频率进行χ2检验和Fisher确切概率检验。结果:汉族OLP组HLAⅡ-DRB1*11等位基因表现频率(23.53%)高于正常对照组(9.76%),HLAⅡ-DRB1*12等位基因表现频率(5.88%)低于正常对照组(22.76%),P<0.05。维吾尔族OLP组HLAⅡ-DRB1*14等位基因表现频率(50.00%)显著高于正常对照组(9.52%),P<0.05。结论:HLAⅡ-DRB1*11等位基因可能与新疆地区汉族人群OLP患者易感性相关;HLAⅡ-DRB1*12等位基因可能是新疆汉族OLP患者的保护基因;HLAⅡ-DRB1*14等位基因可能与新疆地区维吾尔族OLP患者易感性有关。

新疆奎屯地区高砷环境中抗砷菌的初步筛选

目的初步筛选新疆奎屯地区高砷环境中(123团4连)自流井水和污水中存在的高抗砷菌,检测其抗砷能力。方法选择高砷自流井水和污水标本,在NaAsO2选择性培养基上,分离和纯化,筛选出抗砷菌,初步进行细胞形态学的鉴定;用不同NaAsO2浓度的LB培养基对菌株抗砷性进行检测,测定其抗砷水平。结果初步筛选出5株抗砷能力较强的抗砷菌。A1、A2、A3均为革兰氏阴性杆菌。B1、B2均为革兰氏阳性球菌;5株菌均可在含有NaAsO2(50～400mg/L)培养基中生长。最高耐受到400mg/L,是新疆奎屯高砷水含量实际最高值的517倍,最低值的1156倍。结论①经初步筛选,确认新疆奎屯地区高砷环境中的自流井水和污水中存在高抗砷菌,首次成功筛选出5株强抗砷菌。②A1菌株的抗砷能力最强,可在400mg/LNaAsO2的LBA培养基上生长。本研究为新疆地区抗砷菌的深入研究提供了基础资料。

PAX9基因在2个新疆维吾尔族非综合征型先天缺牙家系中的表达

目的通过对新疆维吾尔族非综合征型先天缺牙患者PAX9基因突变的检测,为维吾尔族该病发病的分子机制提供依据。方法采集2个新疆维吾尔族非综合征型先天缺牙家系颊黏膜拭子,提取DNA,采用聚合酶链反应技术结合DNA双向测序技术对患者DNA进行检测。结果 PAX9基因外显子3的85、86位点检测出两个单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)位点。结论 PAX9基因外显子3的85、86位点的改变可能与新疆维吾尔族非综合征型先天缺牙的发生有关。

豚鼠脂肪间充质干细胞:一种适用于耳科实验研究的理想干细胞

背景:目前关于耳科干细胞研究的动物实验大多是将其他动物种属的干细胞用于豚鼠模型,而对于豚鼠本身来源的干细胞研究报道极少。目的:观察豚鼠脂肪间充质干细胞成骨、成脂肪、成神经细胞分化的潜能,并探讨其应用于耳科实验的可能。方法:取豚鼠脂肪,分离脂肪间充质细胞培养至第3代,检测第1～10天细胞增殖吸光度值;流式细胞仪检测细胞的免疫表型;并行成骨细胞诱导、成脂肪细胞诱导、成神经细胞诱导及鉴定。结果与结论:脂肪间充质细胞增殖的生长曲线近似"S"形,传代后经过3d的潜伏期,4d进入对数生长期,8d进入平台期;锥虫蓝染色细胞拒染率94%～98%,从P0～P5细胞的总产量扩增了约3600倍;其细胞免疫表型CD29表达率86.3%,CD44表达率55.5%,CD45表达率为0.4%。成骨细胞诱导后经特异性染色可见矿化结节形成;成脂肪细胞诱导后经油红O染色胞浆内可见脂质滴;成神经细胞诱导后细胞形态与神经细胞类似,Nestin、GFAP、NF200染色均呈阳性。提示豚鼠脂肪间充质细胞在体外易于分离、培养及扩增,具有间充质干细胞的"干性",是一种适用于耳科实验研究的理想干细胞。

用于SD大鼠神经祖细胞增殖分化研究的体外培养法的建立

目的建立一种用于SD大鼠神经祖细胞(NPC)增殖分化研究的体外培养法,为深入研究其增殖分化奠定基础。方法机械法分离和传代新生SD大鼠海马组织NPC,应用特定培养基进行体外培养,BrdU标记后应用免疫荧光法观察鉴定NPC和分化后神经细胞。对机械法离解后的活细胞率差异进行比较。结果培养的NPCs可以在体外进行培养扩增,体外传代至第9代末仍可见Nestin抗体阳性的神经球形成,并且有分化为3种神经终末细胞的潜能。每次机械法分离后的NPC活细胞率的差异无统计学意义(P>0.05)。结论建立的SD大鼠NPC体外培养法更利于增殖分化的研究。

新疆维吾尔族非综合征型先天缺牙家系遗传分析及MSX1基因突变检测

目的探讨新疆维吾尔族非综合征型先天缺牙发病的分子机制。方法对2个维吾尔族先天缺牙家系绘制系谱图,分析家系遗传特征,并采集家系成员颊黏膜拭子,提取DNA,采用聚合酶链反应(PCR)技术结合DNA双向测序技术检测MSX1基因突变。结果 MSX1基因外显子1的353位点和外显子2的448位点检测出2个单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)位点。结论 MSX1基因外显子1的353位点的改变可能与新疆维吾尔族非综合征型先天缺牙的发生有关。

新疆蜂胶挥发油对结直肠癌HCT-116细胞增生、周期及凋亡的影响

目的:探讨新疆蜂胶挥发油对体外培养的大肠癌细胞HCT-116细胞增生、细胞周期和凋亡的影响.方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)显色法,检测不同浓度蜂胶挥发油作用不同时间对HCT-116细胞生长所产生的不同影响;倒置显微镜观察凋亡细胞的形态特点;PI染色、流式细胞仪检测细胞周期分布;AnnexinV-FITC/PI双染色、流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果:蜂胶挥发油能抑制HCT-116细胞生长,其抑制活性与5-氟尿嘧啶(5-FU)一致,在一定剂量和时间范围内,可见凋亡细胞明显增多,给予5、10、20mg/L蜂胶挥发油处理HCT-116细胞24h后,较对照组G0/G1期细胞(%)增多(57.57±2.31,67.94±1.90,86.09±1.72vs44.60±3.43,均P<0.01),S期细胞(%)减少(33.51±3.40,27.30±4.65,7.30±4.76vs47.78±4.54,均P<0.01),G2/M期细胞无明显变化,细胞凋亡率明显上升,呈剂量依赖性(58.33%±2.44%,44.53%±2.59%,35.40%±0.42%vs4.38%±0.92%,均P<0.01).结论:新疆蜂胶挥发油对HCT-116细胞具有明显的增殖抑制作用,其机制与其阻滞细胞周期和诱导凋亡有关.

维药神香草对哮喘大鼠血清白介素-17水平及Th1/Th2平衡的影响

目的研究维吾尔药神香草对哮喘大鼠血清白介素-17(IL-17)水平及Th1/Th2平衡的影响,阐明神香草治疗哮喘的免疫机理。方法将大鼠随机分为正常对照组、哮喘模型组、地塞米松治疗组及神香草水提液高、低剂量治疗组。采用卵清白蛋白(OVA)﹑氢氧化铝[Al(OH)3]及百白破疫苗联合致敏和OVA生理盐水雾化激发的方法制备哮喘模型。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测大鼠血清中IL-17、白介素-4(IL-4)及干扰素-γ(IFN-γ)的水平。结果正常对照组与哮喘模型组、哮喘模型组与治疗组血清IL-17﹑IL-4及IFN-γ的水平差异均有显著性(P<0.05);神香草高剂量治疗组降低细胞分泌IL-17的作用大于低剂量治疗组(P<0.05);与模型组比较,神香草治疗后哮喘大鼠血清IL-4的水平显著降低(P<0.05),而IFN-γ的水平显著增高(P<0.05)。各组大鼠血清IL-4与IFN-γ水平呈密切负相关(r=-0.997),IL-17水平与IL-4和IFN-γ水平呈负相关关系(r=-0.333,-0.509),均P<0.05。结论神香草可通过抑制IL-17的分泌,纠正Th1/Th2型细胞因子失衡,发挥抗炎作用。

ERK1/2MAPK通路在Eca109细胞体外增殖和迁移中的作用及其机制

目的观察ERK1/2 MAPK通路在食管鳞状细胞癌(ESCC)Eca109细胞系增殖和迁移中的作用并探讨其作用机制。方法使用MAPK(ERK1/2)抑制剂U0126处理Eca109细胞;细胞计数检测细胞增殖;倒置显微镜下观察细胞形态;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测ERK1/2 mRNA;Western blot检测总ERK1/2(t-ERK1/2)和磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2);MTT和细胞划痕实验检测细胞增殖和迁移能力;qRT-PCR检测MicroRNA-21(miR-21)。结果20μmol/L浓度的U0126可抑制Eca109细胞生长(P<0.05),破坏细胞正常形态,ERK1/2 MAPK通路的活化在蛋白质水平被抑制(P<0.05),Eca109细胞增殖和迁移明显减弱(P<0.05),显著下调miR-21的表达(P<0.05)。结论ERK1/2 MAPK信号通路抑制可减弱Eca109细胞增殖和迁移,其可能的作用机制之一与其抑制miR-21表达有关。

大鼠腹股沟脂肪间充质干细胞的分离、培养、鉴定及活体标记

背景:脂肪间充质干细胞具有来源丰富、取材方便、体外有较强增殖能力并具有多向分化的特点,有望成为骨组织工程、细胞治疗等的种子细胞。目的:培养扩增大鼠脂肪源间充质干细胞,以活体标记并鉴定其分化潜能。方法:无菌条件下取大鼠双侧腹股沟脂肪,Ⅰ胶原酶消化法分离培养脂肪源性干细胞,胰蛋白酶消化法传代扩增。取第 3 代脂肪干细胞进行流式检测 HCAM、CD106、CD29、CD49D 和 CD34,生长曲线测定,吉姆萨染色,菲立磁标记,成脂诱导后油红 O 染色及成骨诱导后茜素红染色钙结节。结果与结论:细胞呈长梭形漩涡样生长,第 3 代细胞流式鉴定 CD29 阳性,CD34、HCAM、CD49d、CD106 低表达,生长曲线测定有对数生长期,平台期,菲立磁标记阳性率达 80%,并且在一些诱导剂下分化为脂肪细胞及成骨细胞。提示,来源于大鼠腹股沟脂肪分离获得的脂肪源干细胞易于培养和传代扩增,并可活体标记且在特殊条件下可分化为成骨细胞和脂肪细胞。

细粒棘球蚴SmadA基因的克隆及其功能的初步鉴定

本研究旨在克隆细粒棘球蚴Smad蛋白家族基因EgSmadA,鉴定其结构及表达部位,并建立酵母双杂交体系。利用生物信息学方法,克隆及分析EgSmadA基因的DNA全长序列,采用免疫组化技术鉴定EgSmadA蛋白的表达及分布,并构建该基因酵母双杂交载体。结果表明,成功扩增出EgSmadA基因组序列全长4 069bp,包含4个外显子和3个内含子,开放阅读框为957bp,编码318个氨基酸,该蛋白C端含有Smad蛋白家族进化高度保守的典型结构域MH2(Mad homology),并成功构建该基因及其MH2结构域的酵母双杂交载体。免疫组化定位该蛋白主要表达于原头蚴被膜及囊泡生发层。研究结果为进一步研究EgSmadA在细粒棘球蚴生长发育中的作用奠定了基础。

MicroRNA-21通过正调控ERK1/2通路促进食管鳞状细胞癌的增殖和迁移

旨在对食管鳞癌(ESCC)中miR-21调控细胞增殖和侵袭的机制进行探讨。平板克隆试验和伤口愈合体外试验发现,miR-21过表达可促进细胞增殖和迁移,相反,沉默miR-21可抑制细胞增殖和迁移。同时,Western blotting试验发现,miR-21过表达的Eca109细胞中p-ERK1/2表达上调,而在miR-21抑制的Eca109细胞中表达下调。试验结果提示miR-21可能通过激活ERK1/2/MAPK信号通路促进ESCC细胞增殖和侵袭,而且miR-21是在转录后水平正调控ERK1/2/MAPK信号通路。