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新疆包虫病手术患者生存质量量表的编制及信效度评价 被引量:3
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作者 郭敏 邵英梅 +3 位作者 赵萍 冉博 李波霖 温浩 《中国卫生统计》 CSCD 北大核心 2015年第1期68-70,共3页
目的编制一份适合测定新疆包虫病手术患者生存质量的量表。方法利用独立样本t检验、主成分分析等方法对量表项目进行分析,最终形成正式的生存质量量表。结果效度分析结果表明,量表由生理领域、心理领域、独立性领域、社会关系领域、环... 目的编制一份适合测定新疆包虫病手术患者生存质量的量表。方法利用独立样本t检验、主成分分析等方法对量表项目进行分析,最终形成正式的生存质量量表。结果效度分析结果表明,量表由生理领域、心理领域、独立性领域、社会关系领域、环境领域5个维度构成,其累积解释变异量为58.285%;信度分析结果表明,总量表的克朗巴赫系数为0.868,各分量表的克朗巴赫系数分别为0.723、0.676、0.812、0.780、0.626。结论该量表有较高的信度和效度,可以用于包虫病手术患者生存质量的测量。 展开更多
关键词 包虫病 生存质量 量表编制
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Foxp3和RORγt在肝泡型包虫病患者肝脏组织中的表达及意义
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作者 张恒 吐尔洪江.吐逊 +3 位作者 马海长 沙地克.阿帕尔 林仁勇 温浩 《中国现代普通外科进展》 CAS 2016年第1期1-5,共5页
目的:探讨Foxp3和RORγt在肝泡型包虫病患者肝脏组织中的表达及意义。方法:将手术治疗的14位肝泡型包虫病患者的肝脏组织分为3组:病灶组织组(L组)14例,病灶旁组织组(P组)14例,正常肝组织组(N组)14例。应用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)法... 目的:探讨Foxp3和RORγt在肝泡型包虫病患者肝脏组织中的表达及意义。方法:将手术治疗的14位肝泡型包虫病患者的肝脏组织分为3组:病灶组织组(L组)14例,病灶旁组织组(P组)14例,正常肝组织组(N组)14例。应用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)法检测各肝脏组织中Foxp3和RORγt m RNA的表达,分析其结果。结果:Foxp3 m RNA在L组中的表达明显高于P组(P=0.005)和N组(P=0.004),P组中的表达高于N组(P=0.246)。RORγt m RNA在L组中的表达高于P组和N组(L组vs P组,P=0.187);L组vs N组,P=0.044),在P组中的表达高于N组(P=0.027)。肝脏不同组织中,RORγt与Foxp3的表达量呈正相关。结论:Th17细胞转录因子Foxp3和Treg细胞转录因子RORγt在肝脏病灶组织中m RNA的表达升高,这些变化可能与泡型包虫病发病过程中寄生虫肉芽肿的形成有关。 展开更多
关键词 棘球蚴病 寄生虫感染 FOXP3 RORΓT
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细粒棘球蚴原头蚴包囊和原头蚴成虫抑制差减杂交文库中差异表达基因的筛选及分析 被引量:2
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作者 赵莉 石保新 +6 位作者 李军 张壮志 马正海 张旭 薛晶 金映红 张文宝 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期1215-1223,共9页
细粒棘球绦虫原头蚴(PSC)具有双向发育的特点,本文旨在利用SSH和生物信息学方法筛选原头蚴包囊(CW)和成虫(AW)特异性的基因。将PSC-CW和PSC-AW双相发育差减cDNA文库的差减PCR产物克隆入pGEM-T载体并测序,利用CAP3sequence assembly在线... 细粒棘球绦虫原头蚴(PSC)具有双向发育的特点,本文旨在利用SSH和生物信息学方法筛选原头蚴包囊(CW)和成虫(AW)特异性的基因。将PSC-CW和PSC-AW双相发育差减cDNA文库的差减PCR产物克隆入pGEM-T载体并测序,利用CAP3sequence assembly在线软件、Blast2GO软件与GenBank数据库对测序结果进行分析,筛选原头蚴成囊和成虫特异性的基因,并探讨这些基因的功能。结果显示:对PSC-CW和PSC-AW文库进行扩增,分别得到280和200个阳性克隆,菌落PCR鉴定结果表明,这些克隆均插入200~1 000bp片段。测序结果显示从PSC-CW和PSC-AW SSH文库中分别得到16和10个特异性基因。其中PSC-CW SSH文库中得到4个出现频率较高的基因,其余12个基因仅出现1次,其中5个为未知基因,已知基因分别编码细胞色素C氧化酶Ⅰ、热休克蛋白70和铁蛋白等功能蛋白质。PSC-AW SSH文库中得到10个基因,其中2个出现频率较高基因,8个基因仅出现1次,4个为未知基因,6个已知基因分别编码基质蛋白1、延伸因子1α和脂肪酸结合蛋白等功能蛋白质。本研究筛选获得原头蚴成囊和成虫发育时差异表达的基因,对这些基因的功能进行分析表明,PSC-CW SSH文库中多是与营养和能量转运功能的相关基因,而PSC-AW SSH文库中多为发育与分化相关的基因,这些基因的差异表达可能与原头蚴处于不同的生长环境和发育方向有关,同时也为棘球蚴病免疫诊断、药物筛选和疫苗研制提供候选基因。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 抑制差减杂交 特异性基因
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泡球蚴感染小鼠肝组织T-bet、GATA-3、ROR-γt和IL-17 mRNA表达水平的研究 被引量:12
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作者 庞楠楠 丁剑冰 +5 位作者 赵慧 王晶 李博 李玉娇 姜涛 马秀敏 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期395-399,共5页
目的:研究泡球蚴感染小鼠肝组织T-bet、GATA-3、ROR-γt和IL-17mRNA表达水平的变化特点,初步探讨Th17细胞与Th1/Th2在棘球蚴感染中的相互关系。方法:通过腹腔接种多房棘球绦虫的幼虫原头蚴混悬液制备泡球蚴感染小鼠模型,持续观察10个月... 目的:研究泡球蚴感染小鼠肝组织T-bet、GATA-3、ROR-γt和IL-17mRNA表达水平的变化特点,初步探讨Th17细胞与Th1/Th2在棘球蚴感染中的相互关系。方法:通过腹腔接种多房棘球绦虫的幼虫原头蚴混悬液制备泡球蚴感染小鼠模型,持续观察10个月,分别在感染2天、8天、1月、3月、6月和10月处死小鼠,收集肝脏组织。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测各组小鼠肝脏组织T-bet、GATA-3、ROR-γt和IL-17 mRNA的表达水平。结果:T-bet mRNA的表达水平在感染早期开始增高,1月时达高峰后又开始缓缓下降至感染前水平;GATA-3 mRNA的表达水平在感染1月时明显升高,随后一直保持较高的表达水平;ROR-γt mRNA的表达水平在感染早期开始增高,感染1月时达到高峰,随后缓慢下降。IL-17 mRNA表达水平自感染早期开始持续性增高,到感染3月时达高峰,之后又逐渐降低至感染前水平。各组小鼠肝组织ROR-γt mRNA表达水平与T-bet mRNA表达水平呈正相关(r=0.67),IL-17 mRNA表达水平与ROR-γt mRNA表达水平有相关性(r=0.35),P值均<0.05。结论:泡球蚴感染宿主早期,主要以Th1型和Th17型细胞免疫为主,感染中后期出现Th1向Th2转化,机体呈现出以Th2细胞为主的优势应答。 展开更多
关键词 泡球蚴 IL-17 T-BET GATA-3 ROR-γt mRNA
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细粒棘球绦虫抗原B重组蛋白的免疫反应性 被引量:2
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作者 吕国栋 刘涛 +5 位作者 林仁勇 王星 王俊华 任智慧 温浩 卢晓梅 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期107-110,共4页
目的利用基因工程方法表达细粒棘球绦虫抗原B重组蛋白(rAgB),并分析其免疫反应性。方法将rAgB基因片段插入原核表达载体pET41a(+)中,转化大肠埃希菌BL21(DE3)菌株,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,获得重组蛋白rAgB-GST。用... 目的利用基因工程方法表达细粒棘球绦虫抗原B重组蛋白(rAgB),并分析其免疫反应性。方法将rAgB基因片段插入原核表达载体pET41a(+)中,转化大肠埃希菌BL21(DE3)菌株,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,获得重组蛋白rAgB-GST。用谷胱甘肽琼脂糖树脂亲和层析柱(GST-sepharose4B)纯化,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析重组蛋白的表达情况。用蛋白质印迹(Western blotting)分析其免疫反应性,并用免疫胶体金包虫诊断试剂盒作为对照。结果PCR、双酶切及DNA测序结果均显示重组质粒pET41a-rAgB构建成功。SDS-PAGE结果表明,重组蛋白rAgB-GST的相对分子质量(Mr)为40800,纯化蛋白含量为78.4%。Westernblotting分析结果显示,重组蛋白rAgB-GST检测细粒棘球蚴病和多房棘球蚴病患者血清的阳性率分别为79.2%(95/120)和51.1%(23/45),但与卫氏并殖吸虫病患者、华支睾吸虫病患者血清以及健康人血清反应均为阴性。rAgB-GST的敏感性和特异性分别为79.2%(95/120)和81.0%(98/121),均略高于免疫胶体金棘球蚴病诊断试剂盒的敏感性(72.8%,75/103)和特异性(76.9%,30/39)。结论重组rAgB-GST蛋白可被细粒棘球蚴病和多房棘球蚴病患者血清识别,有较好的免疫反应性。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 重组抗原B 免疫诊断
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免疫与感染细粒棘球绦虫对Beagle犬血液生理生化指标的影响
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作者 王俊伟 张壮志 +5 位作者 赵莉 石保新 韩涛 叁都哈西 陈世军 张文宝 《动物医学进展》 北大核心 2018年第6期113-116,共4页
分析了Beagle犬免疫细粒棘球绦虫EgM家族的2个重组蛋白(EgM9和EgM123)及人工反复感染原头蚴对其血液生理生化指标造成的影响。结果显示,免疫并未引起血液各项指标出现差异;感染引致极小部分指标出现显著差异,与免疫相比结果同之。提示Eg... 分析了Beagle犬免疫细粒棘球绦虫EgM家族的2个重组蛋白(EgM9和EgM123)及人工反复感染原头蚴对其血液生理生化指标造成的影响。结果显示,免疫并未引起血液各项指标出现差异;感染引致极小部分指标出现显著差异,与免疫相比结果同之。提示EgM蛋白作为候选疫苗是安全的,驱虫药物的反复服用也没有表现出明显的毒副作用,也暗示免疫和反复感染与血液生理生化指标之间未发现确切的统计学关联性,且侧面印证了Beagle犬在封闭饲养环境下已经形成了生长期血液生理生化指标具有相对稳定性的特征。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 BEAGLE犬 免疫 感染 血液生理生化指标
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Th17细胞和调节性T细胞在肝包虫病免疫逃避中的作用 被引量:22
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作者 吐尔洪江·吐逊 单骄宇 +2 位作者 李涛 林仁勇 温浩 《中华消化外科杂志》 CAS CSCD 2010年第4期283-286,共4页
目的 探讨辅助性T细胞17(Th17)和调节性T细胞(Treg细胞)在肝包虫病免疫逃避中的作用.方法 前瞻性分析2008年8月至2009年9月新疆医科大学第一附属医院74例受试者的临床资料,将74例受试者分为4组:健康对照组20例,肝囊型包虫病组21例... 目的 探讨辅助性T细胞17(Th17)和调节性T细胞(Treg细胞)在肝包虫病免疫逃避中的作用.方法 前瞻性分析2008年8月至2009年9月新疆医科大学第一附属医院74例受试者的临床资料,将74例受试者分为4组:健康对照组20例,肝囊型包虫病组21例,肝复发囊型包虫病组15例和肝泡型包虫病组18例.应用ELISA法检测各组受试者血清中Treg相关细胞因子转化生长因子(TGF-β1)和IL-10,Th17细胞相关细胞因子IL-17和IL-23的表达,并用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t法和Pearson相关性检验分析其结果.结果 IL-17在健康对照组、肝囊型包虫病组、肝复发囊型包虫病组和肝泡型包虫病组的表达分别为(16±5)、(13±4)、(13±5)和(11±3)ng/L,4组比较,差异有统计学意义(F=6.35,P〈0.05);而肝囊型包虫病组与肝复发囊型包虫病组比较,差异无统计学意义(t=0.22,P>0.05).IL-23在健康对照组、肝囊型包虫病组、肝复发囊型包虫病组和肝泡型包虫病组的表达分别为(139±50)、(106±53)、(107±48)和(72±27)ng/L,4组比较,差异有统计学意义(F=6.74,P〈0.05);而肝囊型包虫病组与肝复发囊型包虫病组比较,差异无统计学意义(t=0.02,P>0.05).IL-10在健康对照组、肝囊型包虫病组、肝复发囊型包虫病组和肝泡型包虫病组的表达分别为(3.1±0.8)、(4.3±2.0)、(4.2±1.4)和(5.5±2.2)ng/L,4组比较,差异有统计学意义(F=9.78,P〈0.05);而肝囊型包虫病组与肝复发囊型包虫病组比较,差异无统计学意义(t=0.14,P>0.05);TGF-β1在健康对照组、肝囊型包虫病组、肝复发囊型包虫病组和肝泡型包虫病组的表达分别为(26±7)、(37±7)、(33±9)和(38±7)μg/L,4组比较,差异有统计学意义(F=6.73,P〈0.05);而3种肝包虫病组比较,差异无统计学意义(t=0.56,1.81,P>0.05).Th17/Treg(IL-17/IL-10)在健康对照组、肝囊型包虫病组、肝复发囊型包虫病组和肝泡型包虫病组的表达比例分别为5.7±2.6、3.6±1.5、3.4±1.9和2.1±0.7,4组比较,差异有统计学意义(F=13.76,P〈0.05);而肝囊型包虫病组与肝复发囊型包虫病组比较,差异无统计学意义(t=0.23,P>0.05).血清中,IL-17和TGF-β1呈负相关(r=-0.23,P〈0.05);IL-17和IL-23呈正相关(r=0.70,P〈0.05);IL-10和TGF-β1呈正相关(r=0.46,P〈0.05).结论 Th17/Treg相关细胞因子平衡在肝泡型和肝囊型包虫病患者中明显向Treg应答偏倚,Th17/Treg相关细胞因子失衡可能参与肝包虫所致免疫逃避. 展开更多
关键词 棘球幼病 寄生虫感染 免疫逃避 Th17/Treg失衡
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999例包虫病住院患者经济负担分析 被引量:20
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作者 王乐 冯晓辉 +1 位作者 段新宇 温浩 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期835-836,共2页
包虫病为人畜共患寄生虫病,在农、牧区已成为当地居民因病致贫、因病返贫的主要原因之一。为探讨造成包虫病患者经济负担的影响因素和卫生决策者提供参考依据,本研究利用2004--2008年乌鲁木齐市某三级医院包虫病住院患者资料,分析其... 包虫病为人畜共患寄生虫病,在农、牧区已成为当地居民因病致贫、因病返贫的主要原因之一。为探讨造成包虫病患者经济负担的影响因素和卫生决策者提供参考依据,本研究利用2004--2008年乌鲁木齐市某三级医院包虫病住院患者资料,分析其经济负担。 展开更多
关键词 囊型包虫病 疾病经济负担 人力资本法
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T-bet和GATA-3基因在肝泡型包虫病患者肝脏组织中的表达及作用 被引量:5
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作者 张恒 吐尔洪江·吐逊 +3 位作者 马海长 沙地克·阿帕尔 林仁勇 温浩 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2014年第10期898-901,共4页
目的探讨T-bet和GATA-3基因在肝泡型包虫病患者肝脏组织中的表达及作用。方法选取14例在新疆医科大学第一附属医院接受手术治疗的肝泡型包虫病患者病灶组织(L组)、病灶旁组织(P组)及正常肝组织(N组),采用实时荧光定量PCR(qRT-PC... 目的探讨T-bet和GATA-3基因在肝泡型包虫病患者肝脏组织中的表达及作用。方法选取14例在新疆医科大学第一附属医院接受手术治疗的肝泡型包虫病患者病灶组织(L组)、病灶旁组织(P组)及正常肝组织(N组),采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各肝脏组织中T-bet和GATA-3 mRNA的表达,采用两两比较的t检验和Pearson相关性检验分析结果。结果 T-bet mRNA在L组、P组和N组的表达量分别为3.98、0.89和0.27,其中L组与P组比较差异无统计学意义(t=0.307,P〉0.05),L组与N组比较差异有统计学意义(t=3.695,P〈0.01),P组与N组比较差异有统计学意义(t=3.492,P〉0.05)。GATA-3mRNA在L组、P组和N组的表达量分别为119.23、6.30和0.53,其中L组与N组比较差异有统计学意义(t=5.190,P〈0.01),P组与N组比较差异有统计学意义(t=4.649,P〈0.01),L组与P组差异无统计学意义(t=1.711,P〉0.05)。肝脏不同组织中,T-bet和GATA-3mRNA的表达量呈正相关(相关系数为0.730-0.932)。结论 Th1细胞转录因子T-bet基因和Th2细胞转录因子GATA-3基因在肝脏病灶组织中的表达升高,这些变化或与泡型包虫病发病过程中寄生虫肉芽肿的形成有关。 展开更多
关键词 棘球蚴病 寄生虫感染 T-BET GATA-3
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肝囊型包虫病患者血清白细胞介素(IL)-17的检测及其临床意义 被引量:2
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作者 吐尔洪江.吐逊 单娇宇 +5 位作者 刘弓伯 克依木.居来提 耿诚 帕提古丽 林仁勇 温浩 《地方病通报》 2010年第1期5-6,11,共3页
目的探讨血清Th17细胞相关因子IL-17在肝囊型包虫病患者中的表达及其临床意义。方法将56例受试者分为3组,健康志愿者(healthy donor,HD)组20例、肝囊型包虫病(cystic echinococcosis,CE)组21例和肝囊型包虫病复发(recurrent cystic echi... 目的探讨血清Th17细胞相关因子IL-17在肝囊型包虫病患者中的表达及其临床意义。方法将56例受试者分为3组,健康志愿者(healthy donor,HD)组20例、肝囊型包虫病(cystic echinococcosis,CE)组21例和肝囊型包虫病复发(recurrent cystic echinococcosis,RCE)组15例;应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组受试者Th17细胞相关细胞因子IL-17的表达。对数据进行t检验。结果血清IL-17水平在CE组(13.4±3.5)ρg/mL和RCE组(13.2±4.7)ρg/mL比对照组HD组(16.4±4.8)ρg/mL降低(t=2.27,t=2.20,P<0.05);RCE组与CE组之间差异无统计学意义(t=0.143,P>0.05)。结论血清IL-17在肝囊型包虫病患者中显著降低,可能与细粒棘球蚴感染过程中免疫调节有关。 展开更多
关键词 棘球蚴病 白细胞介素-17 寄生虫感染
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细粒棘球绦虫新疆株PDZ结构域蛋白(EgPDZ)基因的克隆及序列分析
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作者 陈凯 张金辉 +7 位作者 吕国栋 李静 张传山 王俊华 曹峻 卢晓梅 温浩 林仁勇 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2010年第8期590-593,共4页
目的从新疆株细粒棘球绦虫原头蚴中克隆PDZ结构域蛋白(EgPDZ),进行序列测定和生物信息学分析。方法设计EgPDZ基因特异性引物,用RT-PCR方法从细粒棘球绦虫原头蚴RNA中克隆EgPDZ基因并将其克隆至pMD18-T载体,测序确定序列并进行生物信息... 目的从新疆株细粒棘球绦虫原头蚴中克隆PDZ结构域蛋白(EgPDZ),进行序列测定和生物信息学分析。方法设计EgPDZ基因特异性引物,用RT-PCR方法从细粒棘球绦虫原头蚴RNA中克隆EgPDZ基因并将其克隆至pMD18-T载体,测序确定序列并进行生物信息学分析。结果 RT-PCR扩增出一长度约600 bp的基因,测序显示其长度为627 bp,编码208个氨基酸,等电点为4.76,为一新基因,命名为EgPDZ。SMART功能分析预测EgPDZ蛋白16~88氨基酸为PDZ结构域。同源性比较表明,EgPDZ与多房棘球绦虫EmPDZ同源性为97.60%,与血吸虫和人等其他种类PDZ基因同源性在18.16%~26.42%之间,而PDZ结构域的序列相似度为42.47%~98.63%。进化树分析表明EgPDZ与EmPDZ相聚集,与其他物种同源性较低。结论成功克隆出细粒棘球绦虫EgPDZ新基因,为进一步研究该基因在细粒棘球绦虫与宿主相互作用中的功能奠定基础。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 EgPDZ 克隆 序列分析
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细粒棘球蚴SmadA基因的克隆及其功能的初步鉴定 被引量:3
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作者 李静 张传山 +4 位作者 吕国栋 王俊华 魏绪法 林仁勇 剡根强 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1756-1762,共7页
本研究旨在克隆细粒棘球蚴Smad蛋白家族基因EgSmadA,鉴定其结构及表达部位,并建立酵母双杂交体系。利用生物信息学方法,克隆及分析EgSmadA基因的DNA全长序列,采用免疫组化技术鉴定EgSmadA蛋白的表达及分布,并构建该基因酵母双杂交载体... 本研究旨在克隆细粒棘球蚴Smad蛋白家族基因EgSmadA,鉴定其结构及表达部位,并建立酵母双杂交体系。利用生物信息学方法,克隆及分析EgSmadA基因的DNA全长序列,采用免疫组化技术鉴定EgSmadA蛋白的表达及分布,并构建该基因酵母双杂交载体。结果表明,成功扩增出EgSmadA基因组序列全长4 069bp,包含4个外显子和3个内含子,开放阅读框为957bp,编码318个氨基酸,该蛋白C端含有Smad蛋白家族进化高度保守的典型结构域MH2(Mad homology),并成功构建该基因及其MH2结构域的酵母双杂交载体。免疫组化定位该蛋白主要表达于原头蚴被膜及囊泡生发层。研究结果为进一步研究EgSmadA在细粒棘球蚴生长发育中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 细粒棘球蚴 SmadA 基因克隆 酵母双杂交
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重组泡球蚴Em18蛋白不同纯化方法的比较
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作者 王慧 王红丽 +5 位作者 王俊华 吕国栋 卢晓梅 王星 温浩 林仁勇 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期45-48,共4页
目的:比较不同方法纯化重组泡球蚴Em18的效果。方法:进一步对BL21-pET41a-Em18重组菌的诱导表达条件进行摸索优化,采用改良的超声程序破碎大肠杆菌细胞,分别经不同的纯化方法进行蛋白纯化,通过SDS-PAGE对纯化结果进行比较分析,Western... 目的:比较不同方法纯化重组泡球蚴Em18的效果。方法:进一步对BL21-pET41a-Em18重组菌的诱导表达条件进行摸索优化,采用改良的超声程序破碎大肠杆菌细胞,分别经不同的纯化方法进行蛋白纯化,通过SDS-PAGE对纯化结果进行比较分析,Western blot进行活性鉴定。结果:①在菌液OD600为0.8-1.0,加IPTG终浓度为1 mmol/L,37℃诱导3h,rEm18-GST重组蛋白得到成功高表达,在相对分子量为50kDa处有表达条带。②超声程序为:工作3 s,间歇4s,功率200~300W,超声体系中加入溶菌酶和蛋白酶抑制剂作用,可促进大肠杆菌细胞的破碎,降低目的蛋白的降解;加入终浓度为1%的Triton-X100作用可增加融合蛋白的可溶性。③通过比较不同方法纯化重组泡球蚴Em18的效果表明采用单纯His柱纯化可获得浓度高、纯度高的rEm18-GST重组蛋白。Western blot分析表明该蛋白能与泡型包虫病(AE)患者血清特异性反应。结论:建立了一种纯化原核表达Em18融合蛋白的较为经济和有效的方法,得到大量有生物学活性的Em18融合蛋白,为包虫病诊断试剂盒的研制奠定基础。 展开更多
关键词 泡球蚴 Em18重组蛋白 表达和纯化 鉴定
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泡球蚴感染中期小鼠肝脏病灶周围肉芽肿TGF-β1及其受体TβRⅠ和p-Smad2/3的表达及意义 被引量:8
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作者 魏绪法 邵英梅 +7 位作者 王俊华 李瑶 张传山 刘辉 姜涛 卢晓梅 温浩 林仁勇 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2010年第12期895-897,900,F0002,共5页
目的观察泡球蚴感染中期BALB/c小鼠病灶周围肉芽肿中转化生长因子(TGF-β1)及其Ⅰ型受体(TβRⅠ)和p-Smad2/3蛋白的表达及意义。方法 8~10周龄雌性BALB/c小鼠随机分为实验组和对照组。将BALB/c小鼠开腹,肉眼直视下肝左叶注射100μl... 目的观察泡球蚴感染中期BALB/c小鼠病灶周围肉芽肿中转化生长因子(TGF-β1)及其Ⅰ型受体(TβRⅠ)和p-Smad2/3蛋白的表达及意义。方法 8~10周龄雌性BALB/c小鼠随机分为实验组和对照组。将BALB/c小鼠开腹,肉眼直视下肝左叶注射100μl泡球蚴混悬液,建立小鼠肝泡球蚴感染模型,对照组以相同方法注射等量的生理盐水。于造模第12周时处死小鼠,取肝脏组织,4%甲醛固定、石蜡包埋,4μm连续切片,HE和Masson染色,光镜下观察泡球蚴感染病灶周围病理改变和纤维化程度,采用免疫组织化学技术检测肉芽肿TGF-β1、TβRⅠ受体及p-Smad2/3蛋白的表达。结果实验组小鼠病灶周围以形成典型的大小和形状各异的囊泡为主要特征,囊泡外周纤维结缔组织增生明显,存在不同程度的纤维化。囊泡外围肉芽肿TGF-β1、TβRI和p-Smad2/3的显色指数分别为3.90±1.39、3.18±0.95和3.60±0.93,对照组分别为0.28±0.18、0.32±0.18和0.20±0.14,差异均有统计学意义(P均〈0.01)。结论囊泡外围组织纤维化较重部位TGF-β1、TβRI和p-Smad2/3表达也相应较高,提示TGFβ1/Smad信号通路可能参与泡球蚴感染小鼠病灶纤维化过程。 展开更多
关键词 泡球蚴 肉芽肿 TGF-Β1 Smad 信号通路
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转化生长因子-β1及凋亡相关因子在泡球蚴感染宿主病灶旁免疫细胞中的表达及其意义 被引量:3
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作者 王俊华 卢晓梅 +3 位作者 张传山 魏绪法 温浩 林仁勇 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期929-931,F0003,共4页
目的探讨泡球蚴感染宿主病灶旁免疫细胞中转化生长因子-β1(TGF-p1)、凋亡及相关因子Caspase-3的变化及其意义。方法8例配对泡型包虫患者和泡球蚴感染小鼠均采用苏木素-伊红(HE)染色观察病理变化,免疫组织化学技术检测病灶旁免疫细... 目的探讨泡球蚴感染宿主病灶旁免疫细胞中转化生长因子-β1(TGF-p1)、凋亡及相关因子Caspase-3的变化及其意义。方法8例配对泡型包虫患者和泡球蚴感染小鼠均采用苏木素-伊红(HE)染色观察病理变化,免疫组织化学技术检测病灶旁免疫细胞TGF-β1以及凋亡相关因子Caspase-3的表达与分布,原位末端标记技术(TUNEL)检测病灶旁免疫细胞凋亡。结果泡型包虫患者及泡球蚴感染小鼠病灶旁及汇管区均有大量炎性细胞灶性浸润,TGF—β1(P〈0.01)和凋亡相关因子Caspase-3(P〈0.01)高表达,TUNEL结果表明病灶旁免疫细胞发生凋亡,与对照比较差异有统计学意义(P〈0.01)。结论泡球蚴在感染宿主过程中可能通过引起宿主TGF—β1高表达,造成免疫细胞发生凋亡而达到逃避宿主免疫反应长期寄生的目的。 展开更多
关键词 泡球蚴 免疫细胞 转化生长因子-Β1
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细粒棘球绦虫原头蚴发育调控基因Ral基因的克隆及序列分析 被引量:2
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作者 王红丽 吕国栋 +5 位作者 王俊华 王慧 卢晓梅 温浩 苟萍 林仁勇 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2009年第8期586-589,共4页
目的克隆和分析细粒棘球绦虫原头蚴发育调控基因Eg Ral基因。方法根据多房棘球绦虫Em Ral基因序列设计引物,用RT-PCR方法从细粒棘球绦虫原头蚴中克隆Eg Ral基因并将其克隆至pMD19-T载体,经测序后,与线虫、多房棘球绦虫、果蝇和人类等物... 目的克隆和分析细粒棘球绦虫原头蚴发育调控基因Eg Ral基因。方法根据多房棘球绦虫Em Ral基因序列设计引物,用RT-PCR方法从细粒棘球绦虫原头蚴中克隆Eg Ral基因并将其克隆至pMD19-T载体,经测序后,与线虫、多房棘球绦虫、果蝇和人类等物种Ral基因进行比对分析。结果从细粒棘球绦虫原头蚴cDNA中克隆获得Eg Ral基因,长度为603 bp,编码200个氨基酸,等电点为8.85。经比对,Eg Ral与Em Ral同源性为99%,与线虫、果蝇和人等其他种类Ral基因同源性在47.89%~50.72%之间。进化树分析表明Eg Ral与Em Ral相聚集,与其他物种同源性较低。结论成功从细粒棘球绦虫原头蚴中克隆出Eg Ral基因,其序列具有较高的保守性。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 EgRal 序列分析
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cDNA微阵列分析BALB/c小鼠肝脑组织中差异性表达基因的研究 被引量:1
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作者 谢文娟 吕国栋 +5 位作者 曹琦 李瑶 卢晓梅 马纪 林仁勇 温浩 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2010年第3期180-183,F0003,共5页
目的分析BALB/c小鼠肝、脑组织差异基因表达谱。方法TRIZOL法提取总RNA,反转录cDNA,采用36K小鼠全基因组寡核苷酸芯片,运用荧光双交换方法分析BALB/c小鼠肝脑组织中mRNA转录本含量。经芯片扫描、图像采集后,运用MAS2.0软件对差异基因进... 目的分析BALB/c小鼠肝、脑组织差异基因表达谱。方法TRIZOL法提取总RNA,反转录cDNA,采用36K小鼠全基因组寡核苷酸芯片,运用荧光双交换方法分析BALB/c小鼠肝脑组织中mRNA转录本含量。经芯片扫描、图像采集后,运用MAS2.0软件对差异基因进行基因功能分析(GO)和KEGG通路分类。结果基因芯片结果表明与脑组织相比,在肝组织中共发现差异表达基因6 132个,其中包括上调基因2 974个,下调基因3 158个,GO分析上述差异表达基因主要涉及代谢、细胞信号转导、DNA结合与转录、细胞周期、细胞骨架、细胞粘附和发育等。KEGG信号通路分析显示:上调差异基因中71个通路的改变差异具有统计学意义(P<0.05),下调差异基因中有80个通路的改变差异具有统计学意义(P<0.05)。结论小鼠肝与脑组织基因表达谱的差异涉及多个基因表达调控途径,研究这些基因分子功能有助于深入了解各组织独特的功能表达系统。 展开更多
关键词 CDNA微阵列 小鼠 基因
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细粒棘球蚴细胞外信号调节激酶基因克隆、序列分析及功能的初步鉴定 被引量:6
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作者 吕国栋 纪静 +6 位作者 王俊华 李亮 王红丽 卢晓梅 王星 温浩 林仁勇 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期402-407,共6页
目的从新疆株细粒棘球蚴中克隆细胞外信号调节激酶(EgERK1)基因,进行序列测定、生物信息学分析,蛋白表达及功能初步鉴定。方法设计特异性引物,从新疆株细粒棘球蚴中提取总RNA,RT—PCR法扩增EgERKl基因,构建pET28a—EgERK1原核表... 目的从新疆株细粒棘球蚴中克隆细胞外信号调节激酶(EgERK1)基因,进行序列测定、生物信息学分析,蛋白表达及功能初步鉴定。方法设计特异性引物,从新疆株细粒棘球蚴中提取总RNA,RT—PCR法扩增EgERKl基因,构建pET28a—EgERK1原核表达质粒,测序确定序列并进行生物信息学分析。构建正确的pET28a-EgERK1原核表达质粒,经诱导、表达EgERK1重组蛋白,聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western印迹检测其生物学功能。结果RT-PCR扩增出的条带经测序,结果显示其长度为1125bp,编码374个氨基酸,等电点为6.34,BLAST比对结果提示为一新基因,命名为EgERKl(EU701008)。同源性比较表明,EgERK1与多房棘球绦虫ERK基因(EmMPK1)同源性为95.45%,与线虫、酵母、果蝇和人类等ERK基因的同源性为43.04%~61.88%。进化树分析发现EgERKl和EmMPKl相聚集。功能分析预测EgERKl具有ERK类激酶T—X—Y结构保守区和酶激活功能域。Western印迹显示,原核诱导表达的EgERKl重组蛋白能与抗人ERK1/2抗体发生特异性免疫反应。结论成功克隆细粒棘球蚴EgERKl新基因,发现EgERK1重组蛋白具有与ERK1/2抗体结合的功能,为进一步研究该基因在寄生虫与宿主相互作用中的功能奠定基础。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 细胞外信号调节MAP激酶类 基因 克隆 分子 序列分析 质粒
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白细胞介素-17和白细胞介素-6在泡球蚴感染小鼠中的变化特点及作用 被引量:8
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作者 庞楠楠 丁剑冰 +4 位作者 赵慧 李玉娇 李亮 马海梅 马秀敏 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期2131-2133,共3页
目的观察泡球蚴(Em)感染小鼠肝脏过程中白细胞介素(IL)-17和IL-6的动态变化特点。方法实验组小鼠腹腔接种泡球蚴原头蚴,持续观察10个月,取肝脏组织和收集各组血清,通过苏木素-伊红(HE)染色观察肝脏病理改变,免疫组织化学和酶... 目的观察泡球蚴(Em)感染小鼠肝脏过程中白细胞介素(IL)-17和IL-6的动态变化特点。方法实验组小鼠腹腔接种泡球蚴原头蚴,持续观察10个月,取肝脏组织和收集各组血清,通过苏木素-伊红(HE)染色观察肝脏病理改变,免疫组织化学和酶联免疫吸附试验(ELISA)法观察IL-17在Em感染不同阶段的动态变化特点。结果与对照组小鼠比较,Em感染小鼠的肝组织汇管区周围出现炎细胞浸润、肝细胞坏死等多种病理改变;肝组织IL-17和IL-6在感染1个月出现阳性表达,3个月达到高峰,其中IL-17在感染3个月以后与对照组比较差异有统计学意义(P〈0.05);IL-6在感染1~6月与对照组比较差异有统计学意义(P〈0.05);Em感染小鼠血清IL-17的含量明显升高,在感染2、3、8个月时与对照组比较差异有统计学意义(P〈0.05)。结论IL-17和IL-6的表达随着泡球蚴感染加重而增高,并随着感染时间延长一直保持较高的水平,可能与泡球蚴感染小鼠时造成免疫紊乱及宿主免疫病理损伤有关。 展开更多
关键词 泡球蚴 感染 白细胞介素-17 白细胞介素-6
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泡球蚴感染小鼠所致肝损伤基因表达谱的变化 被引量:8
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作者 谢文娟 吕国栋 +3 位作者 李瑶 张传山 温浩 林仁勇 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期189-191,共3页
目的 观察泡球蚴感染小鼠肝脏基因表达谱的变化.方法 采用开腹直视下肝左叶注射泡球蚴混悬液构建小鼠肝泡型包虫病动物模型.运用包含25000个小鼠基因的36 K小鼠全基因组寡核苷酸芯片,检测感染8周后小鼠肝脏的基因表达.荧光定量逆转录.... 目的 观察泡球蚴感染小鼠肝脏基因表达谱的变化.方法 采用开腹直视下肝左叶注射泡球蚴混悬液构建小鼠肝泡型包虫病动物模型.运用包含25000个小鼠基因的36 K小鼠全基因组寡核苷酸芯片,检测感染8周后小鼠肝脏的基因表达.荧光定量逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)法验证芯片结果 .结果 小鼠肝脏受泡球蚴侵染8周后,共有108条基因表达发生改变,功能聚类分为新陈代谢、信号转导、细胞生长、转录调节、细胞骨架、凋亡、免疫应答及运输等11类.荧光定量RT-PCR验证正确.结论 泡球蚴感染可以导致小鼠肝脏基因表达谱发生的改变,涉及多个基因表达调控途径. 展开更多
关键词 肝脏 泡球蚴 基因芯片
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