NEFL、NRN1在二乙酰吗啡致神经元凋亡中的作用

目的探究神经丝轻链蛋白(Neurofilament light chain,NEFL)、神经突起素(Neu-ritin,NRN1)在二乙酰吗啡致神经元凋亡中的作用。方法建立二乙酰吗啡成瘾SD大鼠模型,分为Control组、Model组,观察各组大鼠脑组织病理形态学改变、凋亡细胞数及凋亡相关因子蛋白质表达变化;Western blot检测各组大鼠脑组织中NEFL、NRN1、Bax和Bcl-2的蛋白表达;采用NEFL慢病毒转染大鼠原代小脑颗粒细胞,使用Western blot技术检测转染效率,分为NC组、Model组和sh-NEFL+M组,使用二乙酰吗啡干预Model组和sh-NEFL+M组。采用CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测细胞NEFL、NRN1、Bax和Bcl-2的蛋白表达。结果成瘾SD大鼠脑组织HE染色和Hoechst33342荧光染色显示,与Control组相比,Model组大鼠脑组织出现明显筛网状改变,凋亡细胞数目明显增加;Western blot结果显示,Model组中NEFL、Bax蛋白表达升高,NRN1、Bcl-2蛋白表达降低,差异具有统计学意义(P<0.05);在二乙酰吗啡干预原代小脑颗粒细胞后,与Control组相比,Model组的细胞活力明显降低,凋亡率明显升高,NEFL和Bax蛋白表达显著升高,NRN1和Bcl-2蛋白表达显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05);与Model组相比,sh-NEFL+M组细胞活力显著升高,凋亡率显著降低,NEFL、Bax蛋白表达降低,NRN1、Bcl-2蛋白表达升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论NEFL、NRN1在二乙酰吗啡致小脑颗粒细胞凋亡中发挥重要作用,降低NEFL表达可减少二乙酰吗啡致小脑颗粒细胞凋亡。

HK2和VDAC1在二乙酰吗啡致心肌细胞凋亡中的作用

目的探讨HK2和VDAC1在二乙酰吗啡致心肌细胞凋亡中的作用。方法采用剂量递增方法,建立二乙酰吗啡成瘾大鼠模型。将40只SD大鼠随机分为3组,正常组(Control,n=10)皮下注射等量生理盐水;模型组(Model,n=15)首次皮下注射二乙酰吗啡剂量为5 mg/kg,以后逐日递增剂量2.5 mg/(kg·d),连续注射20 d;模型+10 D组(Model+10D,n=15)在模型组基础上继续递增剂量至第10天。采用ELISA法检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、谷草转氨酶(glutamic oxaloacetic transaminase,GOT)含量;采用HE染色观察各组心肌组织病理变化;采用TUNEL染色检测各组心肌组织细胞凋亡;采用免疫组化、RT-qPCR和Western blot检测HK2、VDAC1及凋亡相关因子的mRNA和蛋白的表达变化。结果HE染色发现随着二乙酰吗啡干预时间的延长,心肌组织表现出不同程度的损伤。与正常组相比,模型组中血清LDH、GOT含量及心肌凋亡率升高,HK2和抗凋亡因子Bcl-2的mRNA和蛋白水平下降,VDAC1和促凋亡因子Bax、Caspase-3的mRNA和蛋白水平升高,Clevead Caspase-3蛋白水平升高;与正常组相比,模型+10 D组中以上指标,差异有统计学意义(P<0.05)。结论二乙酰吗啡可导致心肌细胞凋亡,HK2和VDAC1可能参与了二乙酰吗啡致心肌细胞凋亡的过程。

高细胞亚型甲状腺乳头状癌临床病理分析与蛋白质组学研究

目的探讨高细胞亚型甲状腺乳头状癌(TC-PTC)临床病理学特征,并研究高细胞亚型PTC蛋白质谱,通过生物信息学分析,筛选与鉴定高细胞亚型甲状腺乳头状癌差异表达蛋白,寻找TC-PTC潜在生物标志物。方法收集2021年1月至2021年6月期间新疆医科大学附属肿瘤医院67例甲状腺乳头状癌患者术后标本,经病理诊断确诊,TC-PTC17例,经典型甲状腺乳头状癌(CPTC)50例,对比分析两组的临床病理学特征。同时收集其中17例TC-PTC,15例CPTC新鲜手术切除标本,另收集15例良性甲状腺结节(BTN)新鲜标本,应用蛋白质非标记定量技术(label-free)结合液相色谱与串联质谱技术(LC-MS/MS),鉴定和筛选高细胞亚型甲状腺乳头状癌差异表达蛋白,GO及KEGG分析差异蛋白的生物学功能及富集的信号通路。结果TC-PTC组更易出现多发病灶、侵犯甲状腺被膜及淋巴结转移,差异无统计学意义(P>0.05),TC-PTC组具有更大的肿瘤体积,差异有统计学意义(P<0.05)。3组共分离和鉴定肽段数34294个,蛋白质总数4739个。与CPTC组及BTN组相比,TC-PTC组显著高表达的蛋白14个(FC≥1.3,P<0.05),其中6个蛋白是TC-PTC特定表达蛋白,分别是:NRP1、MTM1、COG1、SRP19、PRR15、CDC2L5。利用GO及KEGG通路分析,发现差异蛋白主要参与代谢、基因表达及翻译、生物合成等生物学过程,发挥结合、酶调节活性、催化活性等分子功能;主要富集于核糖体生物合成、蛋白酶体系统、剪接体组成、磷酸戊糖途径等信号通路。进一步根据文献复习,我们筛选出4个可能与TC-PTC发生进展相关的蛋白,分别是:CD73、SNRPA1、NAPRT、NRP1。结论TC-PTC临床生物学行为更具有侵袭性和更高的临床T分期;TC-PTC与CPTC、BTN间存在高表达的差异蛋白,筛选的差异蛋白可能成为高细胞亚型甲状腺乳头状癌潜在分子标志物和治疗靶点。

EZRIN与ASAP3在食管鳞癌中的表达及临床病理学意义

目的探讨EZRIN(EZRIN-radixin-moesin)与ASAP3(Arf-GAP containing SH3)在食管鳞癌中的表达情况及其与临床病理参数间的相关性。方法收集2008年1月-2018年12月在新疆医科大学第一附属医院样本库中经手术切除的175例食管鳞癌组织芯片样本及60例食管鳞癌癌旁组织芯片样本,利用免疫组织化学技术检测食管鳞癌组织芯片中EZRIN与ASAP3的表达情况,临床病理参数及其预后相关性。结果EZRIN、ASAP3在食管鳞癌组织中阳性表达率分别为82.3%(144/175)、70.9%(124/175);临床病理参数研究结果显示,EZRIN与分化程度、浸润深度、TNM分期、淋巴结转移具有相关性,其中低分化、全层浸润、TNM IIIA+B+C期及有淋巴结转移阳性率更高,差异具有统计学意义(P<0.05);ASAP3与性别、肿瘤大小、分化程度、浸润深度、TNM分期及淋巴结转移具有相关性。预后因素分析结果显示,EZRIN与总生存期之间的差异无统计学意义(P>0.05);与ASAP3低表达患者相比,ASAP3高表达患者的总生存时间更短(P<0.05);ASAP3高表达和TNM IIIA+B+C期是影响食管鳞癌预后不良的独立危险因素(P<0.05)。结论EZRIN与ASAP3的表达可能与食管鳞癌的发生、进展有关,且二者表达呈正相关。

IP3R1调控CaMKⅡ和VDAC1在海洛因致心肌细胞节律异常中的作用

目的:探讨1,4,5-三磷酸肌醇1型受体(inositol 1,4,5-trisphosphate receptor type 1,IP3R1)调控钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(calcium/calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)和电压依赖性阴离子通道1(voltage-dependent anion channel 1,VDAC1)在海洛因(heroin,HE)致心肌细胞节律异常中的作用。方法:联合蛋白组学和GEO(Gene Expression Omnibus)数据库分析心律失常芯片数据,寻找关键调控因子。构建IP3R1基因敲减慢病毒并感染原代乳大鼠心肌细胞(neonatal rat cardiomyocytes,NRCMs),实验分为对照(control)组、HE组和HE+shIP3R1组。结晶紫染色观察心肌细胞形态;ELISA法检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)和天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)水平;透射电镜观察线粒体形态学变化;Fluo-4/AM探针法检测细胞内Ca^(2+)浓度;DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量;JC-1染色法检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)水平;ATP检测试剂盒检测细胞内ATP水平;免疫共沉淀(co-immunopre-cipitation,Co-IP)分析IP3R1与CaMKⅡδ和VDAC1蛋白之间的相互作用;Western blot检测IP3R1、CaMKⅡδ、p-CaM-KⅡδ(T287)和VDAC1的蛋白水平。结果:结合蛋白质组学和基因表达谱数据集GSE89410分析,筛选得到80个差异共表达分子,基于基因本体论(Gene Ontology,GO)功能注释和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析结果,最终筛选出关键因子IP3R1,且通过STRING数据库获得IP3R1结合蛋白:CaMKⅡδ和VDAC1。Co-IP结果验证IP3R1与CaMKⅡδ和VDAC1存在相互作用,且HE干预后NRCMs中IP3R1与CaMKⅡδ和VDAC1之间的相互作用增强。体外细胞实验显示,与control组相比,HE组NRCMs数量急剧减少,细胞膜变窄,伪足减少,细胞核结构模糊;LDH和AST水平均显著上升(P<0.05);线粒体超微结构损伤严重,证实HE对NRCMs具有毒性作用并导致线粒体损伤。与control组相比,HE组心肌细胞内Ca^(2+)浓度、ROS水平、MMP以及IP3R1、p-CaMKⅡδ(T287)和VDAC1蛋白水平均显著升高(P<0.05),而HE+shIP3R1组这些指标均显著减低(P<0.05);ATP水平则相反。这证实沉默IP3R1表达可减轻HE干预后NRCMs的钙超载及线粒体损伤。结论:IP3R1通过调控CaMKⅡ和VDAC1引起心肌细胞钙超载和ROS生成增多,参与HE诱导的心肌细胞节律异常。

抑制剂KN-93干预二乙酰吗啡致心肌细胞节律异常的蛋白质组学分析

目的使用蛋白质组学分析抑制剂KN-93干预二乙酰吗啡致心肌细胞节律异常的作用。方法60只SPF级SD大鼠乳鼠,雌雄不限,提取心肌组织,体外培养SD大鼠乳鼠原代心肌细胞,分为对照组和实验组,对照组使用100μmol/L二乙酰吗啡作用24 h,实验组使用100μmol/L二乙酰吗啡+1μmol/L KN-93作用24 h。采用TMT相对定量蛋白质技术筛选出对照组和实验组之间具有显著性表达差异蛋白质,筛选标准:表达倍数上调>1.2倍或下调<0.83倍且P<0.05。通过GO功能富集分析差异表达蛋白质的主要功能、细胞定位和参与的生物学过程,通过KEGG通路富集分析差异表达蛋白质可能参与的代谢或信号通路,通过蛋白质相互作用网络分析蛋白质之间有结合作用或相互作用。结果与对照组比较,实验组Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)磷酸化水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);TMT技术共筛选出346个差异表达蛋白质,主要参与对细胞因子的反应、细胞对细胞因子刺激的反应等过程,影响相同的蛋白质结合、信号受体结合等分子功能和细胞外区域部分、胞外区等细胞组分蛋白,主要富集在癌症途径、PI3K-Akt信号通路、人乳头瘤病毒感染、阿尔茨海默病等信号通路。蛋白互作网络显示,MSH6、NFk B1等可能与CaMKⅡ存在蛋白质互相作用关系。与对照组比较,实验组ADCY7、NFk B1、MSH6、MMP2、MMP9、NQO1、TXNRD1蛋白表达显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论CaMKⅡ可能通过调控NFk B、MSH6等蛋白的改变,通过癌症途径信号通路调节心肌细胞凋亡,参与二乙酰吗啡致心肌细胞节律异常过程。

双侧原发性乳腺癌90例临床病理及预后分析

目的分析双侧原发性乳腺癌(bilateral primary breast cancer,BPBC)的临床病理学特征,并探讨影响其预后的相关因素。方法收集90例BPBC患者的临床病理资料,分析并总结其中73例双侧浸润性乳腺癌(bilateral invasive breast cancer,BIBC)患者的临床病理特征与预后的相关性。结果90例BPBC中73例为BIBC,4例为双侧乳腺原位癌,13例为单侧浸润性癌、单侧原位癌,11例患者死亡,均为BIBC组患者。双侧乳腺癌的组织病理学和免疫表型特征倾向一致性。BIBC中第一原发癌的临床分期、肿瘤T分期及肿瘤细胞增殖活性高于第二原发癌(P<0.05)。多因素生存分析发现,双侧乳腺癌ER阳性是预后相关保护因素,双侧乳腺癌高临床分期是预后危险因素(P<0.05)。结论BPBC中BIBC数量最多,预后最差。双侧乳腺癌临床病理特征及激素受体表达与患者预后显著相关,ER一致阳性者预后最佳,ER一致阴性者及双侧乳腺癌高临床分期的患者预后最差。

AJUBA调控MST1 YAP1和TAZ因子促进食管鳞状细胞癌细胞体外增殖迁移和侵袭

目的:探讨AJUBA在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)细胞中表达以及是否通过调控MST1、YAP1和TAZ因子影响细胞增殖、侵袭和迁移。方法:采用Western blot法检测AJUBA蛋白在食管癌细胞系KYSE30、KYSE150与KYSE450中的表达水平,构建shRNA干扰载体AJUBA转染至KYSE150食管癌细胞系;通过体外克隆形成实验、流式细胞术、划痕实验和Transwell实验探究AJUBA对KYSE150细胞的增殖、周期、迁移和侵袭能力的影响。采用RT-PCR和Western blot检测MST1、YAP1和TAZ mRNA和蛋白的表达;核质分离实验检测AJUBA、YAP1和TAZ蛋白表达情况。结果:稳定干扰AJUBA基因后,平板克隆实验结果显示,与阴性对照组相比,shAJUBA组的细胞克隆形成数量明显减少,差异具有统计学意义(P<0.001);流式细胞周期实验结果显示,shAJUBA组中的细胞阻滞于G0/G1期,G2/M期与S期细胞显著减少(P<0.05);划痕实验和Transwell侵袭实验结果显示,与AJUBA空染组相比,shAJUBA组细胞迁移能力和侵袭能力均明显减弱(P<0.001);RT-PCR与Western blot实验结果显示,shAJUBA组细胞中的MST1、YAP1、TAZmRNA与蛋白表达水平均显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。核质分离实验结果提示AJUBA蛋白在正常食管鳞状上皮细胞株(SHEE)细胞核中表达,而在KYSE150细胞胞质与胞核中表达;YAP1和TAZ蛋白在SHEE细胞中不表达,在KYSE150细胞质与细胞核中表达,上述结果差异均具有统计学意义(均P<0.05)。结论:AJUBA促进食管癌细胞的增殖、侵袭与迁移,可能与激活MST1、YAP1、TAZ因子的表达而影响食管鳞状细胞癌进展有关。

二乙酰吗啡致大鼠小脑颗粒神经元细胞凋亡过程中C-Jun、Cytc和Caspase-9的作用

背景:二乙酰吗啡药物可导致神经元损伤,但是目前二乙酰吗啡是否诱导神经元细胞凋亡,C-jun、Cytc和Caspase-9因子是否参与此过程尚未见报道。目的:探讨C-jun、Cytc、Caspase-9是否参与二乙酰吗啡诱导神经元细胞凋亡过程。方法:将SD乳鼠小脑颗粒神经元细胞体外培养7 d,采用不同质量浓度二乙酰吗啡(0,10,40,80,100,120 mg/L)干预神经元细胞24 h,在倒置荧光显微镜下观察神经元细胞形态改变,流式细胞仪检测细胞凋亡率。采用100 mg/L二乙酰吗啡和20μmol/L JNK抑制剂SP600125作用于细胞24 h,通过免疫荧光和蛋白印迹方法检测C-jun、Cytc和Caspase-9蛋白的表达。结果与结论:①在不同质量浓度二乙酰吗啡干预下,随着给药质量浓度的增加,神经元细胞胞体萎缩、亮度降低,部分呈灰黑色,细胞碎裂,神经元网状结构不同程度的消失,细胞改变数量逐渐增加;②随着给药质量浓度的增加,形态改变的细胞数量明显增多(P <0.01),细胞凋亡率也显著增高(P <0.01);③与对照组相比,100 mg/L二乙酰吗啡作用神经元细胞时,二乙酰吗啡组C-jun、Cytc和Caspase-9蛋白呈高表达,差异有显著性意义(P <0.05);与二乙酰吗啡组相比,二乙酰吗啡+SP600125组C-jun、Cytc和Caspase-9蛋白表达明显下调,差异有显著性意义(P <0.05);④结果表明,二乙酰吗啡可诱导小脑颗粒神经元细胞凋亡,C-jun、Cytc和Caspase-9参与了二乙酰吗啡致神经元细胞凋亡的过程。

二乙酰吗啡干预下大鼠心肌细胞蛋白质组学差异性研究

目的观察二乙酰吗啡干预下大鼠心肌细胞差异蛋白质组学的表达情况。方法SPF级SD大鼠乳鼠60只,提取心脏组织,体外培养原代心肌细胞,分正常对照组(Con)与药物干预组(Drug),Drug组使用10-4mol/L的二乙酰吗啡,Con组使用等量PBS作用24 h,提取2组心肌细胞中的总蛋白采用TMT定量蛋白质组学技术进行分析。结果蛋白质组学研究结果显示,大鼠心肌细胞中共鉴定出5884个蛋白质。2组总差异蛋白质784个,其中上调差异表达蛋白质442个,下调差异表达蛋白质342个。基因本体(GO)功能富集分析结果显示,差异表达蛋白质介导细胞生长过程、代谢过程、生物调节过程及对刺激的反应等重要生物学过程;基因百科全书(KEGG)通路富集分析显示,差异蛋白质集中于心肌收缩通路、钙信号通路、心肌细胞的肾上腺素能信号转导通路、致心律失常性右室心肌病及氧化磷酸化通路等。同时,差异蛋白质与心肌收缩密切相关,包括细胞膜二氢吡啶受体(DHPR)、肌浆网兰诺定受体2(RyR2)、三联蛋白Triadin(TRDN)、肌集钙蛋白2(CASQ2)以及肌钙蛋白I(TnI)等。结论二乙酰吗啡干预下大鼠心肌细胞差异蛋白质组学改变可能与心肌收缩节律异常、心肌细胞能量代谢及功能障碍等密切相关,以上差异蛋白的研究有望为临床上吸食二乙酰吗啡导致的心血管损伤提供新的理论参考和治疗靶点。

二乙酰吗啡干预离体乳鼠心肌细胞动作电位和钙离子电流的变化

背景:阿片类药物可调控心肌细胞膜电位和Ca^(2+)电流的变化,但是目前二乙酰吗啡是否诱导心肌节律、细胞动作电位和钙离子电流改变尚未见报道。目的:探讨二乙酰吗啡对离体SD乳鼠心肌细胞动作电位和钙离子电流的影响。方法:(1)体外培养SD乳鼠心肌细胞,采用5个浓度二乙酰吗啡(0,10^(-2),10^(-3),10^(-4),10^(-5)mol/L)和20 mol/L维拉帕米作用于心肌细胞;(2)将细胞分为对照组、二乙酰吗啡组、二乙酰吗啡+维拉帕米组。后2组分别以二乙酰吗啡、二乙酰吗啡+维拉帕米(浓度20μmol/L)联合干预心肌细胞;对照组加入等量PBS。实验于2018-05-21经新疆医科大学第一附属医院动物实验医学伦理委员会批准,批准号IACUC201805-K1。结果与结论:(1)当不同浓度二乙酰吗啡干预心肌细胞24 h后,心肌细胞形态异常数量亦随其浓度的改变而明显增加,呈剂量依赖性改变。当二乙酰吗啡浓度逐渐升高,细胞存活数量亦逐渐减少,细胞胞质体积缩小,胞膜收缩,伪足减少,细胞核结构模糊。(2)与对照组相比,当加入二乙酰吗啡干预心肌细胞后,心肌细胞自发性搏动频率和节律差异有显著性意义。静息膜电位负值降低,动作电位中动作电位时程显著增加,动作电位幅度显著减小。(3)与对照组相比,二乙酰吗啡组中心肌膜电位改变数量明显增加,当加入维拉帕米后,心肌膜电位改变细胞数量有所降低。与对照组相比,心肌膜电位改变细胞数量有所升高。(4)提示二乙酰吗啡可致离体SD乳鼠心肌细胞形态异常,心肌自发性搏动频率和节律显著增加,心肌细胞膜电位和动作电位发生改变,钙通道阻滞剂维拉帕米对二乙酰吗啡引起的心肌细胞节律异常有一定改善作用。

Ajuba和YAP1在食管鳞状细胞癌中的表达及相关性

目的探讨Ajuba与yes相关蛋白1(yes-associated protein1,YAP1)在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)中的表达及其与临床病理因素的相关性。方法采用免疫组织化学(SP)法检测ESCC组织中Ajuba与YAP1的阳性表达率。结果Ajuba的阳性表达主要定位于细胞核与细胞质,其在ESCC组织中的表达水平明显高于癌旁组织(P<0.05)。Ajuba的阳性表达与肿瘤大小、浸润深度和淋巴结转移有关(P<0.05)。YAP1的阳性表达主要定位于细胞质,其在ESCC组织中的表达水平明显高于癌旁组织(P<0.05)。Ajuba的阳性表达与肿瘤大小和浸润深度有关(P<0.05)。Ajuba与YAP1在ESCC中的表达呈正相关(P=0.015;r=0.208)。结论Ajuba和YAP1在ESCC中的阳性表达与ESCC的发生密切相关,Ajuba与YAP1未来可能成为ESCC治疗的新靶点。

Ca^(2+)/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ调节原肌球蛋白1对海洛因所致心肌细胞节律异常的影响

目的探讨Ca^(2+)/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca^(2+)/calmodulin-dependent protein kinaseII,CaMKII)调控原肌球蛋白1(Tropomyosin1,TPM1)在海洛因致心肌细胞节律异常中的作用。方法提取60只SPF级SD大鼠乳鼠心肌组织,培养原代心肌细胞,根据干预情况分为对照组(Control组)、海洛因处理组(HE组)、海洛因+KN-93处理组(HE+KN-93组)。Control组常规条件未作任何处理,HE组100μmol/L海洛因作用24 h,HE+KN-93组100μmol/L海洛因+1μmol/L抑制剂KN-93作用24 h。荧光倒置显微镜观察心肌细胞自发搏动频率的改变;Fluo-4 AM检测各组细胞内Ca^(2+)浓度的变化;串联质谱标记相对定量蛋白质组学筛查差异表达蛋白;Western blotting法检测TPM1、CaMKIIδ型及其T287位点[p-CaMKII(T287)]表达水平。结果心肌细胞自发搏动频率结果显示,Control组平均自发搏动频率(126.33±1.52)次/min高于HE组(88.00±2.64)次/min,HE+KN-93组自发搏动频率(110.33±1.52)次/min高于HE组(88.00±2.64)次/min,差异均有统计学意义(P<0.05)。Fluo-4 AM检测结果显示,HE组心肌细胞内Ca^(2+)浓度与Control组比较显著增加(P<0.05);HE+KN-93组细胞内Ca^(2+)浓度与HE组比较显著下降(P<0.05)。串联质谱标记相对定量蛋白质组学结果显示,HE组与Control组共筛选出784个差异表达蛋白质,其中上调差异表达蛋白质有442个,下调差异表达蛋白质有342个;HE组与HE+KN-93组共筛选出346个差异表达蛋白质,其中上调差异表达蛋白质有169个,下调差异表达蛋白质有177个。Western blotting结果显示,HE组p-CaMKII(T287)、TPM1蛋白相对表达量与Control组比较,均显著增加(P<0.05);HE+KN-93组p-CaMKII(T287)、TPM1蛋白相对表达量与HE组比较均降低(P<0.05);3组CaMKIIδ蛋白相对表达量均无统计学意义(P>0.05)。结论海洛因可造成心肌细胞节律异常改变,其机制可能与CaMKII激活后上调TPM1蛋白有关,这有望为临床上因海洛因导致的心律失常患者提供新的诊疗方向。

CASQ2和RyR2在二乙酰吗啡致心肌细胞节律异常中的作用

目的探讨二乙酰吗啡致心肌细胞节律改变与心肌钙离子通道异常之间的关系,探究肌钙集蛋白2(CASQ2)与兰碱尼受体2(RYR2)因子与钙通道之间的联系,明确其是否参与心肌细胞钙离子通道异常及心律失常的过程。方法取出生3日龄SD大鼠乳鼠的心肌细胞进行体外培养,分为正常对照组(N组)、二乙酰吗啡干预组(H组)、二乙酰吗啡加维拉帕米干预组(H+V组),二乙酰吗啡浓度为10^(-4) mol/L,药物作用时间24 h。在荧光倒置显微镜下,观察心肌细胞形态和收缩频率节律改变;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹法(Western blot)检测CASQ2和RyR2因子的mRNA及蛋白表达,观察H组、N组及H+V组上述2个因子表达含量的变化情况。结果 (1)细胞培养:原代心肌细胞形态多样,呈三角形、长梭形和多边形,细胞核圆形或类圆形,大小正常核膜光滑,细胞间通过伪足相互连接,连接成片的细胞搏动节律一致。(2)心肌细胞形态及节律改变:与N组相比,H组和H+V组心肌细胞形态发生一定程度的改变,收缩频率降低,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)与N组相比,H组和H+V组中CASQ2和RYR2蛋白和mRNA表达量减少,差异有统计学意义(P<0.05)。与H组相比,H+V组中CASQ2和RYR2蛋白和mRNA表达量减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论二乙酰吗啡可致心肌细胞自发性搏动频率和节律异常,CASQ2和RyR2因子参与二乙酰吗啡致心肌细胞自发性搏动频率和节律异常的过程。关键字:

二乙酰吗啡致心肌细胞节律异常中κ受体影响LDH、AST表达的作用

目的:探究κ受体在二乙酰吗啡致心肌细胞节律异常中的作用机制。方法:取出生3天SD大鼠乳鼠心肌细胞体外培养7天后,用二乙酰吗啡和选择性κ受体阻断剂作用心肌细胞30min,检测乳酸脱氢酶(LDH)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)。结果:与对照组相比,在二乙酰吗啡干预下(H组)LDH和AST明显升高,H+B组中LDH和AST值较H组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:κ受体参与二乙酰吗啡致心肌节律异常,同时也是影响心肌细胞释放LDH和AST的因素。

阿片受体调节CaMKⅡ磷酸化在二乙酰吗啡致心肌细胞节律异常中的作用

目的探讨κ、δ和μ3种阿片受体亚型及CaMKⅡ在二乙酰吗啡致心肌节律异常过程中的作用机制。方法取3 d龄SPF级SD大鼠乳鼠(雌雄不限)心脏进行原代心肌细胞体外培养。将培养好的原代心肌细胞分为细胞对照组、二乙酰吗啡干预组、No组(二乙酰吗啡+κ阿片受体拮抗剂组)、Nal组(二乙酰吗啡+δ阿片受体拮抗剂组)和CTOP组(二乙酰吗啡+μ阿片受体拮抗剂组),检测各组GOT、LDH活性及PLC、PI3K含量,JC⁃1检测各组线粒体膜电位变化,Fluo⁃4 AM检测各组细胞内Ca2+水平,Western blot检测p⁃CaMKⅡ、Calm蛋白表达情况。结果与细胞对照组相比,二乙酰吗啡干预组GOT和LDH活性明显升高,PLC、PI3K含量明显增加,差异均具有统计学意义(F=15.165,F=38.642,F=13.482,F=18.047,P<0.05);与二乙酰吗啡干预组相比,Nal组GOT、LDH活性及PLC、PI3K含量明显降低,差异均具有统计学意义(P<0.05),No组和CTOP组LDH活性及PLC、PI3K含量无明显变化;二乙酰吗啡干预组较细胞对照组线粒体膜电位降低(F=15.843,P<0.05),Nal组较二乙酰吗啡干预组线粒体膜电位升高(P<0.05),与二乙酰吗啡干预组相比,No组和CTOP组线粒体膜电位无明显变化;Fluo⁃4 AM结果显示,与细胞对照组相比,二乙酰吗啡干预组细胞内[Ca2+]i明显升高,差异具有统计学意义(F=38.326,P<0.05),Nal组较二乙酰吗啡干预组细胞内[Ca2+]i明显下降,差异具有统计学意义(P<0.05),No组和CTOP组较二乙酰吗啡干预组细胞内[Ca2+]i无明显变化;Western blot结果显示,与细胞对照组相比,二乙酰吗啡干预组Calm蛋白表达水平及CaMKⅡ磷酸化水平明显升高(F=5.847,P<0.05),与二乙酰吗啡干预组相比,Nal组Calm蛋白表达水平及CaMKⅡ磷酸化水平明显降低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论二乙酰吗啡可损伤心肌,造成心肌细胞节律异常,其机制可能与δ阿片受体激活CaMKⅡ有关。