核苷类似物致慢性乙型肝炎患者肌酸激酶增高的机制的初步研究

目的分别观察使用不同核苷类似物治疗的慢性乙型肝炎患者发生肌酸激酶增高的比率,同时明确肌酸激酶增高与人DNA聚合酶γ(POLγ)、人ATP酶(ATPase)的相关性,以及与POLG基因CAG-三核苷酸基因多态性的关系。方法测定使用替比夫定及恩替卡韦的患者入组第3个月,6个月及治疗满1年的肝功能及肌酸激酶水平,同时定量测定治疗前及治疗1年后人DNA聚合酶γ(POLγ)和人ATP酶(ATPase)的水平,检测患者POLG基因CAG-三核苷酸基因多态性。结果 50例使用替比夫定抗病毒治疗的患者在1年的随访中,发生肌酸激酶增高的患者共9例,均为一过性增高,可自行恢复正常,50例使用恩替卡韦抗病毒治疗的患者未发生肌酸激酶增高,所有随访患者治疗1年后POLγ和ATPase的测定无显著增高,肌酸激酶增高的发生与患者POLG基因CAG-三核苷酸基因多态性无相关性。结论慢性乙型肝炎患者长期使用核苷类似物抗病毒治疗发生的肌酸激酶多数为一过性,并未观察到对线粒体相关蛋白有影响,肌酸激酶增高的发生与患者POLG基因CAG-三核苷酸基因多态性未观察到相关性。

卡波西肉瘤相关疱疹病毒编码vFLIP基因真核表达载体的构建

目的构建卡波西肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi′s sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)编码的病毒FLICE抑制蛋白(viral FLICE inhibitory protein,vFLIP)真核表达载体,并转染入293T细胞中进行表达鉴定。方法据GenBank中KSHV编码vFLIP基因核苷酸序列人工化学合成"vFLIP"的碱基序列,在5′端下添加XhoI酶切位点,3′端添加BamHI酶切位点,合成的碱基序列经酶切克隆进真核载体GV144,经双酶切和测序验证,成功构建G-vFLIP真核表达载体,将该质粒转染293T细胞,通过转染后细胞内荧光蛋白的表达和实时荧光定量PCR鉴定转染后KSHV-vFLIP在胞内的表达。结果通过对构建质粒限制性内切酶产物进行基因测序证实成功构建了携带vFLIP基因的真核表达载体G-vFLIP,G-vFLIP真核表达载体转染293T细胞,24h后在荧光显微镜可观察到细胞表达绿色荧光,提取细胞总RNA进行逆转录,293T细胞中G-vFLIP组vFLIP mRNA的表达水平是GV144组的9 355 080.705倍(P<0.05)。结论成功构建了KSHV-vFLIP真核表达载体,转染后在293T细胞中初步获得表达。