原发性膜性肾病患者血管性血友病因子裂解酶13的血浆水平及其临床意义

目的原发性膜性肾病(primary membrous nephropathy,PMN)患者发生静脉血栓栓塞(venous thromboembolism,VTE)风险高,检测PMN并发VTE患者与未并发VTE患者的血管性血友病因子裂解酶13(ADAM metallopeptidase with thrombospondin type 1 motif 13A,DAMTS13)的血浆活性水平及探究其临床意义。方法纳入2019年9月至2021年9月在新疆维吾尔自治区人民医院住院治疗的30位PMN并发VTE患者做为MN血栓组、30例PMN未并发VTE的患者作为MN非血栓组、3位体检健康者作为健康对照组,用酶联免疫吸附试验测量入组者血管性血友病因子(von willebrand factor,vWF)及其特异性裂解酶ADAMTS13的血浆活性水平,并与临床资料作分析比较探究其临床意义。结果(1)PMN患者ADAMTS13的血浆水平较健康组低,差异具有统计学意义;(2)膜性肾病血栓组血浆ADAMTS13水平低于非血栓组,vWF及vWF/ADAMTS13比值高于非血栓组,差异均具有统计学意义(P<0.01);(3)PMN患者血浆ADAMTS13水平与血浆白蛋白(albumin,Alb)呈正相关(r=0.538,P<0.01),与24 h尿蛋白定量(r=-0.371,P<0.01)、总胆固醇(r=-0.363,P<0.01)和低密度脂蛋白(r=-0.407,P<0.01)、纤维蛋白原(r=-0.510,P<0.01)、白细胞介素-6(interleukin,IL-6)(r=-0.428,P<0.05)、D-二聚体(r=-0.404,P<0.05)呈负相关,但与血清M型磷脂酶A2抗原抗体水平无显著相关性(P>0.05);(4)ADAMTS13诊断PMN并发VTE的ROC曲线下面积为0.794(P<0.001),最佳临界值为65.95%(灵敏度为96.7%,特异度为53.3%),vWF/ADAMTS13比值诊断PMN并发VTE的ROC曲线下面积为0.831(P<0.001),最佳临界值为2.63(灵敏度为86.7%,特异度为66.7%)。结论PMN患者血浆ADAMTS13水平下降,并发VTE时下降更明显,其下降可能与患者肾功能、炎症因子、血脂水平、高凝状态相关,可能与PLA2R-Ab无相关性,且ADAMTS13可能对PMN并发VTE有预测价值,vWF/ADAMTS13比值预测作用可能更强。

ACE2对5/6肾切除小鼠肾损伤的保护作用

目的:研究血管紧张素转换酶抑制剂(ACE2)在肾素血管紧张素系统(RAS)过度激活和进行性肾损害的作用并探讨其可能的作用机制。方法:选取雄性ACE2基因敲除(KO)小鼠及野生型(WT)小鼠,随机分成5/6肾脏切除模型组和假手术组,每2周测量血压,12周后检测肾脏损伤指标血肌酐,并对残余肾组织进行PAS染色观察病理变化;用RT-PCR检测肾组织纤维化指标α-SMA和炎症指标TNF-α的表达。结果:与野生型小鼠比较,ACE2基因敲除型小鼠出现血压明显升高,血肌酐增加。PAS染色分析结果提示ACE2基因敲除型小鼠较野生型出现更严重的系膜区增宽,系膜基质增生。用RT-PCR检测肾组织α-SMA和TNF-α的表达变化,提示ACE2基因敲除模型组小鼠肾脏纤维化和炎症因子的表达较野生型模型组小鼠显著增加。结论:ACE2基因敲除组小鼠较野生型小鼠在5/6肾脏切除术后出现更严重的肾脏损伤,血压增高,肾脏炎症和纤维化改变。

课程思政融入肾内科教学的探索和实践

习近平总书记在2016全国高校思想政治工作会议上指出:“要用好课堂教学这个主渠道,各类课程都要与思想政治理论课同向同行,形成协同效应。课程思政要“将高校思想政治教育融入课程教学和改革的各环节、各方面,实现立德树人、润物无声。2018年5月2日,值北京大学建校120周年之际,习近平总书记视察北大并提出了“一个根本任务”和“两个重要标准”,即培养德智体美全面发展的社会主义建设者和接班人;把立德树人作为检验学校工作的根本标准;把师德师风作为教师队伍建设的首要标准,因此,思政课程的建设成为全国院校教学改革探索的重点。

MiR-21靶向调控Mfn2对缺血再灌注损伤肾小管上皮NRK-52E细胞自噬及凋亡的影响

目的:探讨mi R-21对缺血再灌注损伤肾小管上皮细胞自噬及凋亡的影响及其与线粒体融合素2(mitochondria fusion protein mitofusin2,Mfn2)的靶向关系。方法:将大鼠近端肾小管上皮细胞株NRK-52E细胞按处理方式不同分组:I/R+control mimics组(转染control mimics后缺氧3 h/复氧3 h),I/R+mi R-21mimics组(转染mi R-21mimics后缺氧3 h/复氧3 h),I/R组(缺氧3 h/复氧3 h)及对照组(正常培养)。选取30只Sprague-Dawley(SD)大鼠,随机分为假手术组、缺血再灌注模型组(I/R组)。取大鼠肾组织进行HE染色,自动生化分析仪检测大鼠血清尿素氮(BUN)、肌酐(Cr),四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖能力,TUNEL法检测细胞凋亡,实时荧光定量PCR检测细胞自噬和凋亡相关基因LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ、Beclin1、Bcl-2、Bax及Mfn2 m RNA表达,Western blot法检测细胞自噬和凋亡相关蛋白的表达,荧光素酶实验验证mi R-21与Mfn2的靶向关系。结果:Sham组大鼠血清BUN、Cr水平,大鼠肾组织细胞凋亡率高于I/R组(P<0.05)。I/R组大鼠肾组织肾小管结构紊乱,大量炎症细胞浸润。Sham组大鼠肾组织mi R-21水平高于I/R组(P<0.05)。48和72 h时,I/R+mi R-21 mimics组细胞活力明显低于I/R+control mimics组,I/R组及对照组(P<0.05),I/R组细胞活力低于对照组(P<0.05)。I/R+mi R-21mimics组凋亡率显著高于I/R+control mimics组,I/R组及对照组(P<0.05),I/R组凋亡率显著高于对照组(P<0.05)。与对照组比较,I/R组细胞Beclin1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Bax蛋白及基因m RNA表达量升高,Bcl-2蛋白及基因m RNA表达量降低(P<0.05);与I/R组比较,I/R+mi R-21mimics组细胞Beclin1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Bax蛋白及基因m RNA表达量升高,Bcl-2蛋白及基因m RNA表达量降低(P<0.05)。mi R-21与Mfn2具有靶向关系。结论:mi R-21可靶向Mfn2促进肾缺血再灌注损伤引起的凋亡及自噬。

内质网应激在缺血再灌注急性肾损伤中的作用

目的观察缺血再灌注急性肾损伤(acute kidney injury, AKI)大鼠内质网应激相关凋亡蛋白caspase-12、c-Jun氨基端激酶1(c-Jun N-terminal kinase 1, JNK1)、转录因子C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein, CHOP)表达变化,探讨内质网应激在缺血再灌注AKI中的作用。方法雄性Wistar大鼠75只,随机分为模型组27只,假手术组24只,正常组24只。模型组切除右肾、夹闭左肾动脉45 min后恢复灌流制备缺血再灌注AKI模型,24只造模成功;假手术组仅切除右肾、不夹闭左肾动脉;正常组仅麻醉不开腹。造模成功后1、5、12、24 h时3组分别处死6只大鼠,取腹主动脉血检测血肌酐水平,取肾脏组织行HE染色观察肾脏形态学改变并计算肾小管损伤评分,分别采用实时荧光定量PCR法、Western blot法检测肾脏组织caspase-12、JNK1、CHOP mRNA及蛋白相对表达量;造模后24 h采用TUNEL法观察3组肾小管上皮细胞凋亡情况并计算总积分吸光度值;Pearson相关法分析造模后24 h内质网应激相关凋亡蛋白表达与肾小管损伤评分的相关性。结果造模后1、5、12、24 h,模型组血肌酐水平均高于假手术组和正常组(P<0.05),假手术组与正常组比较差异均无统计学意义(P>0.05);模型组造模后12、24 h血肌酐水平高于1、5 h(P<0.05)。模型组造模后1、5、12、24 h肾小管损伤评分均高于假手术组和正常组(P<0.05);假手术组造模后24 h肾小管损伤评分高于正常组(P<0.05);模型组造模后24 h肾小管损伤评分高于1、5、12 h(P<0.05),12 h高于1、5 h(P<0.05),1、5 h比较差异无统计学意义(P>0.05);假手术组造模后24 h肾小管损伤评分高于1、5 h(P<0.05),1、5、12 h比较差异均无统计学意义(P>0.05)。造模后24 h镜下观察模型组肾小管上皮细胞凋亡细胞数量多于假手术组和正常组;造模后24 h模型组总积分吸光度值(22 963.59±10 334.90)高于假手术组(4 186.20±679.96)和正常组(1 668.07±205.05)(P<0.05),假手术组高于正常组(P<0.05)。造模后1、5、12、24 h模型组肾脏组织JNK1、CHOP mRNA及蛋白相对表达量及造模后1、5、12、24 h模型组肾脏组织caspase-12 mRNA和造模后12、24 h肾脏组织caspase-12蛋白相对表达量均高于假手术组和正常组(P<0.05),假手术组与正常组比较差异均无统计学意义(P>0.05);模型组造模后12、24 h肾脏组织caspase-12、JNK1、CHOP mRNA及蛋白相对表达量高于1、5 h(P<0.05),1、5 h比较差异无统计学意义(P>0.05);假手术组、正常组造模后1、5、12、24 h肾脏组织caspase-12、JNK1、CHOP mRNA及蛋白相对表达量比较差异均无统计学意义(P>0.05)。造模后24 h模型组大鼠肾脏组织caspase-12(r=0.474,P=0.010)、JNK1(r=0.650,P<0.001)、CHOP蛋白相对表达量(r=0.571,P=0.002)与肾小管损伤评分呈正相关。结论缺血再灌注AKI大鼠肾脏组织内质网应激相关凋亡蛋白caspase-12、JNK1、CHOP表达随时间延长逐渐增高,其表达越高反映肾小管损伤程度越重,内质网应激参与了缺血再灌注AKI的发生。