软骨组织工程软骨细胞分离方式的优化

目的探讨不同软骨分离方法获得软骨细胞的细胞存活率及细胞数量,优化软骨细胞获取方法。方法采用SD大鼠20只,获取关节软骨,机械剪碎后称重,每组使用相同重量的软骨组织(1g),4组采用不同方法获取软骨细胞:实验1组:0.25%胰蛋白酶消化3h,0.2%Ⅱ型胶原酶消化10h。实验2组:4℃下0.25%胰蛋白酶消化12h,0.25%胰蛋白酶消化72h。实验3组:0.2%Ⅱ型胶原酶消化16h。实验4组:0.08%Ⅱ型胶原酶消化12h。加入原代细胞培养液进行体外培养增殖。使用化学特殊染色法鉴定获取细胞是否为软骨细胞。计算每组软骨细胞存活率及细胞数。结果经过4种方法消化细胞,所获得细胞在外形上无明显差异,细胞均呈四方形,甲苯胺蓝染色鉴定所获取细胞为软骨细胞。细胞存活率:实验1组:原代(P0)为(79.6±2.1)%,一代(P1)为(78.6±8.4)%,三代(P3)为(82.7±2.1)%。实验2组:P0为(81.0±6.9)%,P1为(80.7±3.5)%,P3为(85.0±3.0)%。实验3组:P0为(84.7±4.0)%,P1为(85.3±1.2)%,P3为(89.7±2.5)%。实验4组:P0为(82.0±2.6)%,P1为(79.0±7.8)%,P3为(86.3±2.5)%,实验3组的细胞存活率明显高于其他3组,差异具有统计学意义(P<0.05)。活细胞数:实验1组(364 776±81 743)个,实验2组(306 111±49 768)个,实验3组(472 580±42 644)个,实验4组(361 906±78 405)个,实验3组的活细胞数明显高于其他3组,差异具有统计学意义(P均<0.05)。结论 4种实验方法均能获取一定数量的软骨细胞,0.2%Ⅱ型胶原酶消化16h的方法在细胞存活率及细胞数量均高于其他方法,适合用于软骨组织工程中软骨细胞的获取。