新疆产中国沙棘挥发油成分的GC-MS分析

目的:研究新疆产中国沙棘(Hippophae rhamnoides L.Subsp.Sinensis Rousi)果实挥发油的化学成分。方法:采用气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术分离鉴定新疆尼勒克县产中国沙棘果实挥发油组分,并用峰面积归一化法计算各组分的相对含量。结果:尼勒克县产中国沙棘鉴定出50种化合物。结论:中国沙棘挥发油以分子量较小的烷烃为主要成分。

阿里红多糖的气相色谱和红外光谱

采用乙醇沉淀得到阿里红多糖(FoP),用Sevag法除去蛋白后采用气相色谱(GC)和红外光谱(IR)对得到的阿里红多糖进行分析。结果表明,阿里红多糖中含有鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖,其摩尔比为0.2∶0.29∶0.41∶0.77∶0.70∶1.16。红外光谱分析阿里红多糖中存在吡喃环。

香草酸通过诱导自噬缓解HepG2细胞脂肪变性

目的研究自噬在香草酸(VA)缓解肝细胞脂肪变性中的作用。方法将HepG2细胞分为空白组(不含药物的完全培养基)、阳性对照组(50 nmol·L^(-1)西罗莫司)和低、中、高剂量实验组(25,50,100μmol·L^(-1)VA),作用时间12 h。用蛋白质印迹法检测微管相关蛋白1轻链3B(LC3Ⅱ)和泛素结合蛋白P62(P62)表达水平的变化,探究VA诱导自噬的作用。用VA单独或联合100 nmol·L^(-1)巴弗洛霉素A1(BafA1)处理Hep G2细胞12 h,实验分为空白组(不含药物的完全培养基)、对照A组(100 nmol·L^(-1)BafA1)、对照B组(50μmol·L^(-1)VA)和实验组(50μmol·L^(-1)VA+100 nmol·L^(-1)Baf A1)。用蛋白质印迹法检测LC3Ⅱ蛋白表达水平的变化,探究VA对自噬流的影响。用VA单独或联合3-甲基腺嘌呤(3-MA)干预棕榈酸(PA)诱导的HepG2细胞脂肪变性模型,将细胞分为空白组(不含药物的完全培养基)、模型组(100μmol·L^(-1)PA)、对照组(100μmol·L^(-1)PA+50μmol·L^(-1)VA)和实验组(100μmol·L^(-1)PA+50μmol·L^(-1)VA+5 mmol·L^(-1)3-MA),作用时间24 h。用比色法检测细胞内三酰甘油(TG)的含量,用蛋白质印迹法检测脂滴包被蛋白3(Perilipin3)表达水平的变化。结果在探究VA诱导自噬的研究中,空白组、阳性对照组和低、中、高剂量实验组的LC3Ⅱ蛋白相对表达量分别为0.53±0.08,0.93±0.31,0.89±0.22,0.96±0.24和0.92±0.14,P62蛋白相对表达量分别为1.47±0.16,0.96±0.17,1.07±0.06,0.76±0.07和0.63±0.12;空白组的上述指标与中、高剂量实验组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。在探究VA对自噬流的影响中,空白组、对照A组、对照B组和实验组LC3Ⅱ蛋白相对表达量分别为0.40±0.12,0.87±0.14,0.67±0.07和1.13±0.11;实验组与对照A组、对照B组的上述指标和空白组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。在脂肪变性模型中,空白组、模型组、对照组和实验组细胞中TG相对含量分别为0.70±0.16,1.34±0.11,1.07±0.03和1.33±0.14,Perilipin3蛋白相对表达量分别为0.61±0.14,1.24±0.19,0.72±0.03和1.03±0.21;模型组的上述指标与空白组和对照组比较,或实验组的上述指标与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论香草酸通过诱导自噬,从而缓解PA诱导的HepG2细胞脂肪变性。

骆驼蓬总碱通过诱导细胞自噬促进Tau蛋白和α-突触核蛋白的降解

目的:探讨骆驼蓬总碱(TAH)能否诱导神经细胞自噬并促进神经毒性蛋白Tau蛋白和α-突触核蛋白(α-Syn)的降解。方法:(1)将体外培养的PC12细胞分为空白对照组及1、2.5、5、10、20、50μg/mL TAH组,分别加入0、1、2.5、5、10、20、50μg/mL TAH作用24 h,观察细胞形态及数目的变化,采用MTT法检测细胞存活率;(2)将PC12细胞分为空白对照组、雷帕霉素组及1、2.5、5、10、20μg/mL TAH组,分别加入等量溶剂、50 nmol/L自噬激活剂雷帕霉素及1、2.5、5、10、20μg/mL TAH作用4 h,采用免疫荧光染色检测细胞自噬体数;(3)将PC12细胞分为空白对照组、雷帕霉素组、10μg/mL TAH组,分别加入等量溶剂、50 nmol/L雷帕霉素、10μg/mL TAH作用4 h,Western blotting检测细胞p62和微管相关蛋白1轻链3(LC3)-Ⅱ蛋白的表达;(4)将PC12细胞分为空白对照组、氯喹组、TAH组、TAH+氯喹组,分别加入等量溶剂、50 nmol/L自噬抑制剂氯喹、10μg/mL TAH、10μg/mL TAH+50 nmol/L氯喹作用4 h,Western blotting检测细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达;(5)将PC12细胞分为TAH组和空白对照组,分别加入10μg/mL TAH和等量溶剂处理4 h后,Western blotting检测细胞磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)、磷酸化p70核糖体蛋白S6激酶(p-p70S6K)的表达;(6)将过表达Tau-绿色荧光蛋白(GFP)的Tet on HEK293细胞分为空白对照组、TAH组、强力霉素组、强力霉素+TAH组、强力霉素+TAH+3-甲基腺嘌呤(3-MA)组、强力霉素+TAH+氯喹组,后4组细胞加入200 ng/mL强力霉素处理24 h后,空白对照组加入等量溶剂,TAH组加入10μg/mL TAH,后3组细胞分别加入10μg/mL TAH、10μg/mL TAH+5 mmol/L 3-MA、10μg/mL TAH+50 nmol/L氯喹,作用24 h后在激光共聚焦显微镜下观察细胞绿色荧光强度的变化,Western blotting检测细胞Tau-GFP和LC3-Ⅱ蛋白的表达;(7)将稳定表达α-Syn的HEK293细胞分为空白对照组、氯喹组、TAH组、TAH+氯喹组,分别加入等量溶剂、50 nmol/L氯喹、10μg/mL TAH、10μg/mL TAH+50 nmol/L氯喹作用24 h,Western blotting检测细胞α-Syn和LC3-Ⅱ蛋白的表达。结果:(1)与空白对照组比较,20、50μg/mL TAH组细胞存活率降低,且50μg/mL TAH组细胞存活率低于20μg/mL TAH组,差异均有统计学意义(P<0.05);(2)与空白对照组比较,雷帕霉素组、10、20μg/mL TAH组细胞自噬体数增多,且10μg/mL TAH组细胞自噬体数多于20μg/mL TAH组,差异均有统计学意义(P<0.05),因此,选择10μg/mL TAH用于后续实验;(3)与空白对照组比较,雷帕霉素组、TAH组细胞p62蛋白的表达均降低,LC3-Ⅱ蛋白的表达均增加,差异均有统计学意义(P<0.05);(4)与空白对照组比较,氯喹组、TAH组、TAH+氯喹组细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达均增加,且TAH+氯喹组细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达高于氯喹组,差异均有统计学意义(P<0.05);(5)与空白对照组比较,TAH组细胞p-mTOR、p-p70S6K的表达均降低,差异均有统计学意义(P<0.05);(6)强力霉素组细胞Tau-GFP蛋白的表达较空白对照组增加,强力霉素+TAH组细胞Tau-GFP蛋白的表达较强力霉素组降低,强力霉素+TAH+3-MA组、强力霉素+TAH+氯喹组细胞Tau-GFP蛋白的表达较强力霉素+TAH组增高,差异均有统计学意义(P<0.05)。TAH组细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达较空白对照组增加,强力霉素+TAH组细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达较强力霉素组增加,强力霉素+TAH+3-MA组细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达较强力霉素+TAH组降低,强力霉素+TAH+氯喹组细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达较强力霉素+TAH组增高,差异均有统计学意义(P<0.05);(7)与空白对照组比较,TAH组HEK293细胞α-Syn蛋白的表达降低,LC3-Ⅱ蛋白的表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05);TAH+氯喹组细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达高于氯喹组,TAH+氯喹组细胞α-Syn蛋白的表达高于TAH组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:TAH可能通过抑制mTOR/p70S6K信号通路激活神经细胞自噬,从而促进Tau和α-Syn的降解。