新疆兰科植物新资料

兰科是有花植物的五大科之一,拥有约736个属,28237种。我国产181属1718种。《新疆植物志》记载新疆境内分布有兰科植物10属19种。近期,作者在新疆维吾尔自治区阿尔泰山阿勒泰地区铁热克提乡内调查时发现了几株非常独特的兰花,通过鉴定,确认它们为杓兰(Cypripedium calceolus L.)。该种广泛分布于欧洲和西伯利亚地区,日本、朝鲜半岛亦有分布。

盐穗木过氧化氢酶基因的克隆与功能分析

利用同源基因克隆法,从新疆荒漠盐碱地多年生灌木盐穗木(Halostachys caspica)中克隆获得盐穗木过氧化氢酶基因(HcCAT1)。序列分析表明,HcCAT1基因开放阅读框为1 479bp,编码492个氨基酸,推测编码蛋白质的分子量为56.7kD,等电点为6.84。基因序列比对发现,HcCAT1与多种植物过氧化氢酶基因具有较高的同源性。半定量RT-PCR结果表明,HcCAT1基因受盐胁迫而上调表达。将构建的重组质粒pET32a-HcCAT1转化大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG诱导重组蛋白His-HcCAT1的表达;SDS-PAGE和Western印迹检测显示,重组蛋白的分子量大小为77.7kD,其大小与推测的大小一致;在低温诱导下以可溶性形式表达,且表现出一定的过氧化氢酶活性。盐胁迫实验结果显示,在添加400mmol/L NaCl、400mmol/L KCl以及300mmol/L甘露醇的LB培养基中,重组质粒转化菌的生长情况和生长速率明显优于对照,表明HcCAT1可明显提高大肠杆菌的耐盐性。该研究结果将有助于从抗氧化角度认识盐生植物盐穗木的耐盐分子机理。

棉铃虫细胞色素P450 CYP6B6基因启动子活性检测条件的优化

旨在用阳离子脂质体介导携带有pGL3-Basic报告基因的棉铃虫细胞色素P450 CYP6B6启动子pGL-CYP6B6-promoter重组质粒转染Sf9细胞,对启动子活性的检测条件进行优化。将长度为999 bp的棉铃虫CYP6B6基因启动子亚克隆至荧光素酶报告载体pGL3-Basic上,提取无细胞内毒素的质粒,转染处于对数生长期的昆虫细胞Sf9,通过检测荧光素酶的表达量验证启动子的活性。对转染后的检测时间、加入转染质粒的量,转染质粒与内对照质粒pRL-TK的比例分别进行了优化,进而确定检测的最优条件。结果表明,转染后的最适检测时间为24 h,转染质粒的最适用量为3.2μg,报告质粒与内对照质粒用量的比例为10 1时转染效率最高。

托木尔峰国家级自然保护区的苔藓植物

在形形式式的生物世界中,一群古老而矮小、多姿多态的绿色植物为地球带来新鲜空气,涵养大量水分,默默地为人类的美好生活服务着。它的科学名称为苔藓植物,俗称“青苔”。苔藓植物通常只有几厘米高,相比于其他动辄以米为单位丈量高度的植物,苔藓堪称“植物王国的小矮人”。苔藓植物虽然体形很小,但分布范围几乎涵盖除了海洋以外的所有生境:森林、沙漠、冻原、沼泽、土壤、树干、岩石和水边都经常有它们的身影。

骆驼蓬种子中一种具抗肿瘤活性蛋白的分离纯化及鉴定

骆驼蓬种子经浸提、硫酸铵沉淀、CM阳离子交换层析和Superdex 75凝胶过滤层析分离纯化得到一种具有抗肿瘤细胞增殖活性的蛋白(命名为PhLTP),经Tricine-SDS-PAGE检测为单一蛋白条带,高效液相色谱检测其表观分子量为14.8 kDa左右,表明PhLTP是由两条相同的亚基组成的蛋白。采用Edman降解法对该纯化蛋白的N-末端进行氨基酸测序,其N-末端序列与其他植物非特异性脂转移蛋白相似。对PhLTP抗肿瘤活性进行研究,结果表明其对HeLa、Eca-109、MGC-9和BEL-7404细胞都有增殖抑制活性,其中对HeLa细胞增殖的抑制作用较好,并具有浓度和时间依赖性,其IC50为45μg/mL。通过Hoechst33258染色观察细胞形态,发现PhLTP能诱导HeLa细胞发生凋亡。

植物凝集素诱导肿瘤细胞凋亡和自噬的研究进展

植物凝集素是一种非免疫原性的蛋白质,在植物界广泛分布。它可以专一性地识别并结合单糖或寡糖,这种结合具有可逆性。植物凝集素与细胞表面表达的糖分子结合后能够引发细胞内一系列的生物化学反应,使细胞或机体代谢发生改变,例如诱导细胞凋亡和自噬。现就植物凝集素诱导肿瘤细胞凋亡和自噬可能的分子机制作一综述。

新疆野生荒漠肉苁蓉粗多糖皮下免疫对流感病毒疫苗的免疫效果

目的探讨新疆野生荒漠肉苁蓉粗多糖（wild Cistanche deserticola Y．C.Ma crude polysaccharides，WCDCP）配伍流感病毒疫苗（influenza virus vaccine，IVV）的免疫增强作用。方法将低、中、高3个剂量的WCDCP分别与0.5 μg的IVV配伍，皮下免疫ICR小鼠，以0.9%NaCl为空白对照组，单独免疫0.5 μg的IVV为无佐剂对照组，铝佐剂（Alum）为阳性对照组。免疫2次，初免后14 d加强免疫，观察小鼠生长状况。间接ELISA法检测IgG抗体滴度及抗体分型IgG1和IgG2a，MTT法检测淋巴细胞增殖，流式细胞术检测CD3＋CD4＋、CD3＋CD8＋、CD4＋CD44＋和CD8＋CD44＋T细胞的表达水平。结果WCDCP对各组小鼠生长状况无显著影响（P〉0.05）；各剂量组均可以提高IgG抗体水平（P〈0.05），且中剂量组为最优剂量组，与铝佐剂组相当；可以提高IgG1和IgG2a的抗体水平（P〈0.05）；增强淋巴细胞增殖（P〈0.05）；显著提高CD3＋CD4＋和CD3＋CD8＋T细胞的表达水平（P〈0.01）；显著提高CD4＋CD44＋和CD8＋CD44＋T细胞的表达水平（P〈0.01）。结论WCDCP可以显著提高流感病毒疫苗的体液免疫应答和细胞免疫应答，尤其可以提高T细胞的免疫水平，且具有一定的安全性。

新疆栽培一枝蒿粗多糖对OVA蛋白的免疫增强作用

目的：探讨新疆栽培一枝蒿粗多糖（ cultivated Artemisia rupestris L. crude polysaccha-rides,CARCP）作为模式抗原卵清白蛋白（ ovalbumin,OVA）佐剂的免疫增强作用。方法将CARCP配伍OVA,皮下免疫小鼠两次,铝佐剂作为阳性对照,ELISA检测IgG及分型IgG1、IgG2a抗体水平；流式细胞术检测脾细胞中T淋巴细胞亚群CD3＋CD4＋和CD3＋CD8＋T细胞,CD4＋CD44＋和CD8＋CD44＋T细胞,以及细胞因子CD4＋IFN-γ, CD8＋IFN-γ和CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg的表达情况。结果 CARCP能提高小鼠IgG、IgG1、IgG2a的抗体水平（P〈0.05）；增强CD3＋CD4＋和CD3＋CD8＋T细胞含量以及CD4＋/CD8＋的比值（P〈0.05）；提高CD4＋CD44＋和CD8＋CD44＋T细胞的含量（P〈0.05）；促进 CD4＋IFN-γ、CD8＋IFN-γ的表达（P〈0.05）,下调 CD4＋CD25＋Treg 中 Foxp3的表达（P〈0.05）。结论CARCP作为OVA蛋白的佐剂能够增强体液和细胞免疫应答,尤其可以增强T细胞免疫应答。

新疆野生与栽培荒漠肉苁蓉粗多糖免疫增强活性比较

目的比较新疆野生与栽培荒漠肉苁蓉粗多糖（wild/cultivate Cistanehe deserticola Polysaccharids, WCDPS/CCDPS）的免疫增强效果。 方法不同剂量（低、中、高）的WCDPS和CCDPS与卵清蛋白（ovalbumin，OVA）皮下共免疫ICR小鼠，ELISA法检测OVA特异性抗体IgG及抗体亚型IgG1和IgG2a，MTT法检测OVA特异性的淋巴细胞增殖活性，流式细胞术检测CD4＋ T细胞和CD8＋ T细胞的表达水平。结果WCDPS和CCDPS均能够显著提高OVA特异性抗体IgG及抗体分型IgG1和IgG2a的表达水平（P〈0.05），且WCDPS和CCDPS相同剂量之间差异无统计学意义（P〉0.05）；WCDPS和CCDPS能显著促进OVA特异性的淋巴细胞增殖，且相同剂量之间差异无统计学意义（P〉0.05）；WCDPS和CCDPS也能显著提高CD4＋T和CD8＋T细胞的百分含量（P〈0.05），且相同剂量之间差异无统计学意义（P〉0.05），WCDPS和CCDPS对免疫后的小鼠体重没有影响。结论WCDSP和CCDPS均能显著增强OVA特异性的体液和细胞免疫应答，两者之间差异无统计学意义，并具有较好的安全性。

新疆家蚕抗菌肽对鲜榨果汁防腐效果的影响

抗菌肽具有抑制细菌的功能,是天然防腐剂和潜在的抗生素替代品。将不同浓度的新疆家蚕抗菌肽(CecropinXJ)添加到鲜榨的番茄汁和葡萄汁中,分别从感官品质、菌液OD值及菌落计数等方面研究其对鲜榨果汁的抑菌效果。实验结果表明,相对于对照组,CecropinXJ能有效抑制鲜榨果汁中病原微生物生长,在一定程度上对鲜榨番茄汁和葡萄汁起到保护作用。0.02%(w/v)新疆家蚕抗菌肽CecropinXJ与相同浓度的山梨酸钾防腐效果无统计学差异,可显著延长鲜榨番茄汁和葡萄汁保鲜期,表明CecropinXJ在食品防腐产业应用中将具有潜在的商业价值。

新疆两个产地玛咖水提物对树突状细胞成熟和功能的影响

目的本研究主要探讨新疆两个产地玛咖水提物（Lepidium meyenii walp water extract，LMWE）对树突状细胞（dendritic cell，DC）的成熟及功能的影响，评价其对免疫系统的调节作用。方法制备来自塔什库尔干县（塔县，Ta xian）和阿拉沟（A La gou）玛咖的水提物，分别命名为LMWE-T和LMWE-A。用不同浓度LMWE-T/A（按照多糖浓度）处理C57BL/6小鼠骨髓来源的DC及脾脏细胞，流式细胞术检测DC的凋亡、DC比例、共刺激分子表达，ELISA检测细胞因子的分泌水平，MTT法检测脾脏细胞增殖，混合淋巴细胞反应检测LMWE对DC功能的影响。结果两种LMWE对DC的凋亡和比例均没有影响，显著增加了DC表面CD40、CD86的表达和TNF-α、IL-12p40、IFN-γ的分泌水平，同时显著增强了DC的功能，并且促进了脾脏细胞的增殖。LMWE-T与LMWE-A相比，LMWE-A对表面分子CD86的表达、IFN-γ的分泌以及脾脏细胞的增殖能力均显著高于LMWE-T的刺激作用。Toll样受体4（Toll-like receptor 4，TLR4）抑制剂TAK-242预处理显著抑制了两种LMWE对CD40表达及TNF-α、IL-12p40分泌的促进作用。结论本实验研究结果表明，LMWE对DC没有毒副作用，通过TLR4信号通路刺激DC成熟，增强DC的功能，同时也具有刺激脾脏细胞增殖的能力，说明LMWE具有潜在的免疫促进作用。LMWE-A的免疫增强作用略高于LMWE-T。

Tamdy病毒糖蛋白基因的重组表达及抗体制备

原核表达Tamdy病毒(Tamdy virus,TAMV)糖蛋白Gn和Gc,分别制备兔抗融合蛋白Gn和Gc多克隆抗体。利用RT-PCR扩增Gn和Gc基因片段,分别构建原核表达质粒pET-28a-Gn和pET-32a-Gc,并在E.coli BL21(DE3)中诱导表达,镍柱亲和层析纯化融合蛋白Gn和Gc之后,以皮下注射方式分别免疫新西兰兔,制备兔抗融合蛋白Gn和Gc多克隆抗体。经Western Blotting和间接免疫荧光(IFA)鉴定多克隆抗体抗原识别能力,ELISA法测定抗体效价。结果显示,pET-28a-Gn、pET-32a-Gc原核表达质粒构建正确,融合蛋白Gn和Gc大小分别约为45 kD、74 kD,制备的兔抗融合蛋白Gn和Gc多克隆抗体能够分别识别原核表达的融合蛋白Gn和Gc和真核表达产物,效价分别为1∶409 600、1∶204 800。制备的多克隆抗体效价高,能够特异性识别原核系统和真核系统表达的TAMV糖蛋白,为TAMV的流行学分析提供基础。

乌拉尔甘草粗多糖提高小鼠免疫力并增强HPV-DNA疫苗免疫应答

目的探讨乌拉尔甘草粗多糖（Glycyrrhiza uralensis Fisch L．crude polysaccharides，GUCP）对小鼠免疫力以及作为佐剂对HPV-DNA疫苗免疫应答的影响。方法不同剂量GUCP通过不同方式注射ICR小鼠，检测对其体重、脏器指数以及脾脏内免疫细胞数量的影响。与HPV-DNA疫苗共免疫C57BL／6小鼠，检测抗原特异性细胞免疫应答和体液免疫应答。结果不同注射方式的GUCP对小鼠体重和肝、心、肺、肾脏指数均无影响，但腹腔注射组显著提高了脾脏和胸腺指数，同时增加了脾脏中B细胞、CD4^＋T细胞、巨噬细胞及树突状细胞的数量；皮下注射组显著增加了脾脏中B细胞及巨噬细胞数量，灌胃组显著增加了脾脏中CD4＋^及CD8^＋T细胞数量。进一步研究发现，GUCP在一定程度上增强了HPV-DNA疫苗诱导产生的抗原特异性CD4^＋及CD8^＋T细胞反应和IgG、IgGl及IgG2a的水平。结论GUCP可以增强小鼠的免疫力，并可以作为DNA疫苗佐剂提高疫苗免疫应答。

荒漠昆虫光滑鳖甲(鞘翅目:拟步甲科:鳖甲族)的人工饲养方法

为了解决深入研究荒漠甲虫环境适应机制时所遇到的各发育阶段试虫材料短缺的问题,本文介绍了饲养拟步甲科鳖甲族昆虫光滑鳖甲Anatolica polita Kaszab的有效方法。将早春季节在野外采集的成虫饲养在2 L的塑料烧杯中,收集卵。用玻璃培养皿孵育卵;用改装的盛有沙土的矿泉水瓶单只饲养3龄以上幼虫,以防止幼虫自相残杀。为保持幼虫饲养瓶内的适当湿度,在瓶子底部加入72 mL的水,再装入800 g沙子,借助毛细现象,形成渐变式含水基质,在最上层的干沙表面加麦麸以饲养幼虫。如需观察计数,可将预蛹、蛹和初孵成虫置于玻璃培养皿中培养。采用此方法饲养的光滑鳖甲可顺利完成生活史,其卵的孵化率为68.67%±2.45%,1～2龄幼虫的存活率为82.95%±7.72%,3～9龄幼虫的存活率为73.80%±4.95%;预蛹、蛹和幼嫩成虫的存活率分别为84.68%±2.35%、88.45%±2.75%和90.56%±4.20%。该方法可以有效实现光滑鳖甲的室内饲养,并可用于其他一些沙栖拟步甲科昆虫的人工饲养。

细胞因子GM-CSF对犬透明带3DNA疫苗免疫小鼠抗生育效果的研究

目的粒细胞-臣噬细胞集落刺激因子（granulocyte-macrophage colony-stimulating fac-tor，GM-CSF）作为免疫佐剂，能够影响犬透明带3（CZP3）DNA疫苗的免疫效果，有助于研制有效降低流浪犬生育的犬透明带3DNA疫苗。方法采用RT-PCR和实时荧光定量PCR（qRT-PCR）方法，分析GM-CSF对小鼠肌肉注射部位的抗原提呈细胞（antigenpresentingcells，APCs）成熟和富集的影响。然后通过电脉冲刺激小鼠肌肉，将分子佐剂pcDNA3-GM-CSF与DNA疫苗pcDNA3．CZP3单独或联合免疫接种雌性BALB／c小鼠。ELISA方法检测了小鼠血清和生殖道中抗体IgG和sIgA（secretaryIgA）的水平以及血清中IL4和IFN-1，的含量，MTT方法检Nd,鼠脾脏T细胞的增殖，间接免疫荧光验证血清中CZP3抗体与小鼠卵细胞结合的能力，抗生育实验分析免疫不育效果。结果GM-CSF与peDNA3．CZP3共免疫小鼠能够显著促进CD80、CD83和CD86的表达，促进pcDNA3-CZP3免疫接种小鼠血清中IgG和生殖道中sIgA抗体水平的显著升高（P〈0．0k）。免疫小鼠的IL-4和IFN-γ的含量均显著增加（P〈0．05），MTF法证明脾脏T细胞增殖显著（P〈O．05），间接免疫荧光结果表明小鼠卵细胞表面的荧光强度和致密度与免疫组血清中抗体的水平成正相关．抗生育实验表明GM-CSF显著性（P〈0．05）地降低DNA疫苗pcDNA3-CZP3免疫小鼠的产仔数目。结论GM-CSF作为免疫佐剂能够显著增强犬透明带3DNA疫苗的免疫不育效果，可以作为增强犬透明带3DNA免疫不孕疫苗的有效佐剂。

抗程序性死亡受体-1纳米抗体的制备及鉴定

目的 制备能与程序性死亡受体-1（PD-1）抗原高亲和力结合的骆驼源纳米抗体,为后续开展其功能性研究提供实验基础.方法 采用真核表达的PD-1-Fc重组蛋白对新疆双峰驼进行6次免疫,采集其外周血并从中分离得到淋巴细胞,进行巢式PCR扩增获取骆驼重链抗体可变区（VHH）基因,并构建噬菌体展示文库.然后采用固相酶联免疫吸附测定（ELISA）法筛选噬菌体展示文库,包被质量浓度依次降低（5.00、2.50、1.00 μg/ml）的PD-1抗原于ELISA板中,对噬菌体展示文库进行3轮亲和淘选.接着采用可溶性单克隆ELISA法进一步筛选与PD-1结合的单个克隆.根据DNA测序结果挑选具有多次重复序列的3个VHH单克隆构建至pET22b载体,转化大肠杆菌BL21 （DE3）感受态细胞后采用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷进行诱导表达.最后采用镍柱亲和层析纯化重组VHH抗体蛋白,蛋白质印迹法（Western Blot）和ELISA法检测其与PD-1抗原的结合活性和亲和力.结果 采用重组蛋白PD-1-Fc对双峰驼免疫6次后,激发了高滴度的特异抗体,免疫血清效价达到1∶32 000.从免疫后的骆驼淋巴细胞构建了库容大小为2.6× 108 cfu/ml的VHH噬菌体展示文库.经3轮亲和筛选后,采用可溶性单克隆ELISA法进一步筛选获得46个吸光度（A600）值在0.6以上的单个VHH克隆.其中VHH-B7、VHH-H5和VHH-H12三个克隆序列具有较高重复,表明获得了显著富集.Western Blot及ELISA法检测结果显示,纯化的B7、H5和H12纳米抗体均与PD-1抗原具有较好的结合活性,且具有较高的亲和力,亲和力常数分别为1.19×1011、1.63×1011、1.59×1011 L/mol.结论 通过对VHH噬菌体展示文库进行亲和筛选,获得了能与PD-1抗原高亲和力结合的抗PD-1骆驼源纳米抗体,为后续开展其功能性研究提供了实验基础.

荒漠短命植物地上和地下生产力对极端干旱和降水的响应

在古尔班通古特沙漠南缘沙垄4个坡位和坡向,设置减少65%和增加65%生长季降水量以模拟极端干旱和极端降水事件,研究极端干旱和极端降水事件对沙垄不同坡位和坡向短命植物层片生产力的影响。结果表明:极端干旱使地上净初级生产力和地下净初级生产力分别显著降低48.8%和13.7%,极端降水使地上净初级生产力和地下净初级生产力分别显著增加37.9%和23.2%。地上净初级生产力对极端干旱和极端降水的敏感性(0.26和0.21 g·m^(-2)·mm^(-1))显著强于地下净初级生产力的敏感性(0.02和0.03 g·m^(-2)·mm^(-1))。沙垄东坡地上净初级生产力(24.22 g·m^(-2))和地下净初级生产力(5.77 g·m^(-2))与西坡相比显著增大29.7%和71.7%,而地上净初级生产力和地下净初级生产力对降水变化的敏感性在不同坡位和坡向之间差异不显著。