新疆军垦细毛羊肾小管上皮细胞的原代培养及鉴定

【目的】建立一种高效、实用的新疆军垦细毛羊肾小管上皮细胞原代培养方案,为肾脏损伤引起的疾病研究奠定基础。【方法】取5～8个月大的出栏细毛羊肾脏皮质,剪成1～2 mm3大小组块,分别采用传统组织块法和改良组织块法,在含15%～20%新生小牛血清的DMEM的培养基中进行原代培养,无需研磨或使用酶和化学试剂,根据上皮细胞自身的生长特性,首次结合刮除法,相差消化法和差速贴壁法,分离纯化上皮细胞,再选用0.037 mm孔径网筛过滤除去肾小球上皮细胞,分离纯化培养肾小管上皮细胞,细胞免疫组化进行鉴定。【结果】改良方法与传统方法相比,细胞贴壁早,生长快,处理时间短,减少了污染机率,提高了细胞培养效率,分离培养的肾小管上皮细胞,纯度达90%以上,细胞呈多角形,鹅卵石状,折光性强,连接紧密,可传至第9代,免疫细胞化学(CK-18)染色鉴定为阳性。【结论】改良的组织块培养与传统的组织块培养以及常用的酶消化培养相比,经济、简单、不易污染,分离培养的肾小管上皮细胞,活性高,纯度高,是一种高效、实用的细毛羊肾小管上皮细胞培养方法。

新疆某规模化牛场奶牛流产情况调查

本次调查以新疆某规模奶牛场为对象,调查该牛场在2011~2013年中奶牛的流产情况。结果表明,该牛场2011~2013年奶牛的流产率分别为9.28%、9.69%和10.92%,呈逐年上升趋势。其次,奶牛流产与月份、胎次和妊娠天数等因素相关。

新疆部分规模化奶牛场5种疫病的血清学调查

为了解新疆地区部分规模化奶牛场牛传染性鼻气管炎病毒、牛病毒性腹泻病毒、牛呼吸道合胞体病毒、牛副流感3型病毒和牛支原体的感染状况，本试验采用酶联免疫吸附试验（ELISA ）检测试验区奶牛场中未接种上述疫病疫苗的奶牛血清，对自然感染状况进行评估。结果表明，牛传染性鼻气管炎病毒抗体平均阳性率为82．5％（66/80），牛病毒性腹泻病毒抗体平均阳性率为88．8％（71/80），牛呼吸道合胞体病毒抗体平均阳性率为82．5％（66/80），牛副流感3型病毒抗体平均阳性率为91．3％（73/80），牛支原体抗体平均阳性率86．3％（69/80）；试验区牛场均存在2种～5种病原的混合感染现象，其中5种病原混合感染率为71．3％。结果显示在新疆地区部分规模化奶牛场中普遍存在上述5种病原的感染，且混合感染现象明显，奶牛生产中必须加强这些疫病的防控工作。

新疆石河子地区奶牛隐性乳房炎的调查与分析

采用LMT法对新疆石河子地区三个规模化奶牛场泌乳牛群进行了隐性乳房炎检测,共检测994头泌乳牛3976个乳区。结果表明:奶牛隐性乳房炎阳性率为81.9%,乳区阳性率为49.1%。数据分析表明,不同年龄、胎次以及有无卧床奶牛的隐性乳房炎阳性率差异显著(P<0.05),后乳区的隐性乳房炎感染率显著高于前乳区感染率(P<0.05),隐性乳房炎乳区发生数也明显影响当日产奶量(P<0.05)。

新疆规模化牧场奶牛病毒性腹泻病毒持续感染状况的流行病学调查

牛病毒性腹泻是由牛病毒性腹泻-黏膜病病毒(BVDV)引起的牛的一种急性、热性、接触性传染病,可造成牛只的免疫抑制和持续感染,导致牛只繁殖率下降、流产、死胎以及犊牛多种疾病高发和高死亡率,严重影响养殖经济效益和可持续发展。以新疆不同养殖模式、不同年龄奶牛、不同区域(南疆和北疆)为研究对象,采集血清和耳组织,应用双抗夹心ELISA抗原法等方法,对7个牧场的11 592头奶牛BVDV的持续感染(PI)牛进行了检测。结果表明,各牧场均存在BVDV的PI阳性牛,场阳性率100.00%;群体阳性率为0.79%(91/11 592)。其中,南疆牧场的感染率高于北疆牧场,成母牛感染率高于犊牛,传统型牧场感染率高于现代化牧场。提示需要高度重视,全面开展PI牛的检测和淘汰阳性牛是控制该病的关键。

野马鼻肺炎病毒的分离鉴定

从新疆昌吉州吉木萨尔野马饲养繁殖中心送检的野马病料中分离到１株病毒，我们对其进行了鉴定。该病毒株在ＢＨＫ－２１细胞上连传６代出现典型的细胞病变，用适应ＢＨＫ－２１细胞的病毒接种鸡胚成纤维细胞、乳豚鼠肾原代细胞、豚鼠睾丸细胞均出现程度不同的细胞病变。在电镜下可见到典型的马鼻肺炎病毒粒子。病毒对５－碘脱氧尿核苷、氯仿、乙醚等敏感。在ｐＨ３．０下失活，５６℃３０ｍｉｎ灭活。病毒能被马鼻肺炎病毒标准阳性血清所中和。病毒接种乳豚鼠出现典型致死性肝炎。结果表明，所分离病毒为马鼻肺炎病毒，并将该毒株定名为ＰＨ９３－１。

传染性支气管炎病毒地方分离毒株S1基因的RT-PCR方法研究

以传染性支气管炎病毒 (IBV)标准毒株M41为材料 ,根据Genbank公开序列自行合成一对特异引物 ,用于扩增IBV的完整S1基因。建立了针对IBV基因组RNA特点的RT PCR方法。对反应体系中的重要反应物Mg2 +、dNTP和引物浓度进行优化 ,确定其浓度值分别为 1 5mmol/L ,2 0 0 μmol/L和 40 μmol/L。使用此反应体系对国内IBV地方分离毒株JS/95 / 0 3 ,SD/ 97/ 0 1等 10多个毒株的S1基因进行扩增 ,均扩增出预期 1 7kb的完整S1基因 。

抗牛布氏杆菌单克隆抗体斑点酶联新方法的建立和应用

目前,诊断布氏杆菌病的传统方法很多,如平板凝集反应、试管凝集反应、补体结合试验、布氏杆菌全乳环状试验以及酶联免疫吸附试验方法等,这些方法各有不足之处。我们经过多次试验,首次建立了一种斑点酶联免疫与单克隆抗体相结合(McAbDot-ELISA)的新方法,并对100头健康牛和两个可疑奶牛场15份奶牛血清进行快速诊断,前4种方法均为阴性,后者查出17头抗体阳性牛,阳性率为14.78％,敏感性高于传统的试管凝集反应。符合率为84％;特异性优于平板凝集反应,符合率为77％。证明该方法具有特异、敏感、经济实用、便于推广等优点。

母羊高效繁殖技术的研究

山区农场户养羊群 14 0只母羊中进行。分别于 2 0 0 1年 8月和 2 0 0 2年 3月埋植CIDR ,同时肌注PMSG 5 0 0u ,48～ 5 6小时后首次输精 ,同时静注LRH -A3 5 μg。试验结果 ,第一产 14 0只处理母羊产羔 2 3 1只 ,繁育率 165 % ,其中 :单羔5 8胎 ,占 41 4% ,羔羊初生重平均为 5 5kg ,双羔 74胎 ,占 5 2 8% ,初生重平均为 4 5kg ,三羔 7胎 ,占 7 4% ,平均初生为2 9kg ,四羔 1胎 ,占 2 9% ,平均初生重为 2 6kg。羔羊生长结果表明 :羔羊成活率为 10 0 % ,生长期内平均日增重 2 99 7g(P >0 0 5 ) ,4月龄平均体重达到 3 0 80kg。第二产结果表明 ,选择的母羊经过诱导发情处理后 ,99只母羊第二产的繁殖率达到 3 7 7%。本试验 14 0只母羊一年两产的繁育率达到 2 0 2 3 7%。本试验结果证实 :采用母羊高频高效繁殖配套技术是提高母羊繁殖效率确实可行的技术措施。采用综合配套技术对母羊进行一年两产和当年母羔配种以大幅度提高母羊繁殖率技术方案是可行的。

调整以产毛为主的养羊生产方向加快西部优质肉羊生产的步伐

加入WTO和国家西部大开发战略为西部养羊业创造了大发展的机遇 ,但同时也面临着严峻的挑战。如何在新的历史条件下加快步伐 ,发挥西部的优势发展养羊业 ?本文从 5个部分重点阐述了在西部地区加快发展肉羊产业的重要性 ,并较详细介绍了工厂化养羊的技术体系与技术要点 ,提出了工厂化高效养羊的技术思想。

工厂化养羊羔羊超早期断奶技术的研究

采用羔羊早期断奶技术措施,在3个工厂化高效养羊场对1.5万只羔羊进行超早期断奶和直线强化培育。试验结果表明,超早期断奶不仅提高了羔羊的日增重,而且还大大降低了羔羊的死亡率和不合格羔羊的比率,提高了养羊的整体经济效益。实施羔羊超早期断奶对于提高母羊的繁殖率和当年母羔的繁殖率同样具有重要的作用。

绵羊反季节繁殖的技术研究

选择2001年11～12月产羔的250只2～4岁成年母羊于2002年1～2月实施人工授精,所产羔羊分2批于8月23日和9月13日断奶进行强化饲养。试验结果表明:在正常饲养管理条件下,母羊夏季繁殖的受胎率明显高于其他季节(P<0.05)。故此,采用繁殖管理与营养调控相配合的技术措施对冬季产羔母羊实行第2产处理是达到工厂化高效养羊生产的一种技术创新,可以推广应用。

不同类型多产疫苗对提高母羊双羔率的作用

采用3种多产疫苗对适龄母羊进行免疫多胎试验。试验分为4组:M苗(米非司酮多产疫苗)、P苗(黄体酮多产疫苗)、F苗(氟孕酮多产疫苗)和对照组(不注射任何疫苗与注射其它单位双羔苗)。结果表明,M苗、P苗、F苗、不注射疫苗自然对照组和注射其它双羔苗对照组的母羊双羔率分别为6％、20％、26.6%、5％和2.5%,F苗和P苗的双羔率显著高于自然对照组和其它组双羔率(P<0.01)。分析了影响多产疫苗处理效果的因素以及开发应用中存在的问题。

吉戎兔微卫星DNA的研究

选用Sat2、Sat3、Sat4、Sat5、Sat7、Sat8、Sat12、Sat13、Sat16、Sol08、Sol28、Sol30、Sol03等13个微卫星位点PCR扩增60只吉戎兔的基因组DNA,然后在8%聚丙烯酰胺凝胶上电泳分型。检测结果,平均等位基因数为3.46个,平均杂合度(H)为0.578,平均多态信息含量(PIC)为0.531。结果表明,吉戎兔经多年选育,其品种的遗传结构稳定,品质均一,同时群体保持了较高的遗传多样性。

提高母猪生产水平的研究

引进三江白猪、杜洛克、大约克夏猪作父本，与杂交母猪（含梅山猪血缘５０％）进行三元杂交，实行标准化饲养，百头母猪平均年产仔猪２．１５胎，１胎产活仔猪１３头，头母猪年育成６０日龄仔猪２４．９６头，１窝仔猪８０日龄重２０５．３６ｋｇ，头母猪年出栏肥猪２２．２９头，总瘦肉量８４１．７５ｋｇ，饲料利用率３．２：１，提高了母猪生产水平和经济效益。

“复方益孕液”治疗奶牛不孕症疗效及作用机理

选取产后60 d以上不发情,患有持久黄体和卵巢机能减退的不孕奶牛50例进行复方益孕液临床治疗试验,利用电化学发光免疫方法对部分患牛治疗前后血清雌二醇(E2)和孕酮(P4)水平进行检测。结果表明,复方益孕液治疗奶牛持久黄体和卵巢机能减退后,发情率分别为83.3%和77.3%,受胎率分别为80.0%和76.5%,显著高于对照组(P<0.01)。持久黄体患牛在处理后血清中E2水平不断升高,最高值为(17.81±7.32)pg/mL,P4水平逐渐降低,最低值为(0.75±0.46)ng/mL;卵巢机能减退患牛在处理后血中E2和P4水平均升高,最高值分别为(14.16±9.45)pg/mL和(4.23±1.85)ng/mL。结果表明复方益孕液对治疗奶牛持久黄体和卵巢机能减退引起的不孕症疗效显著,且具有微调体内激素,溶解黄体和诱导发情作用。

产蛋鸡大肠杆菌病的诊治

新疆石河子148团某个体养鸡户,笼养2568羽海兰商品蛋鸡,前期生长情况良好.6月龄时开始发病,到就诊时已发病7天,累计发病鸡126羽,累计死亡35羽,发病率为4.91%,致死率为27.78%.综合诊断为产蛋鸡大肠杆菌病,经合理用药,控制疫情.现报告如下.