动态添加FSH对绵羊卵巢皮质组织体外培养的影响

本研究旨在探索促卵泡素(FSH)对体外培养绵羊卵巢原始卵泡和组织活性的影响。通过稳定或动态方式添加不同浓度FSH(1、10、50、100ng·mL-1),用组织学和免疫组化PCNA方法来评估FSH对体外培养绵羊卵巢皮质组织中原始卵泡激活、生长、存活以及颗粒细胞增殖活性的影响;此外通过测定培养液中雌激素含量,评估卵巢组织体外培养过程中活性的保持。结果表明,先升后降动态添加FSH对于卵泡发育、存活和生长以及颗粒细胞的增殖具有全面的促进作用;同时组织分泌雌激素能力也高于其他组。以稳定方式添加时,50ng·mL-1FSH在培养1d时显示对卵泡发育的显著促进作用(P<0.05),添加10ng·mL-1以上浓度的FSH可以促进卵泡存活和生长(P<0.05)。在整个培养期内,各培养组中雌激素产量持续增加,说明卵巢活性在本培养体系中可以得到很好的维持。本试验结果表明FSH可能参与早期卵泡的发生,动态添加FSH更有利于体外培养卵泡的发育和组织活性的维持。

中国美利奴羊BMP4基因的克隆、序列分析与真核表达

本实验利用RT-PCR技术获得妊娠105 d胎羊皮肤组织c DNA,PCR扩增获得中国美利奴羊BMP4基因全长编码区序列(CDS),将其克隆到zero PCR@TM-Blunt载体进行测序验证。获得的BMP4基因亚克隆至pc DNA3.1载体,构建绵羊BMP4真核表达载体,经脂质体2000转染293T细胞进行BMP4重组蛋白表达,Western blot鉴定表达产物。结果表明:中国美利奴羊BMP4基因编码区包含1227 bp,编码409个氨基酸,与其它哺乳动物氨基酸相似性达到92%,其成熟肽羧基末端区域具有TGFβ家族保守区结构。Western blot结果显示,重组蛋白分子量约为47KD,与预期一致,并证实人源BMP4单克隆抗体能够应用于羊BMP4研究。这为进一步的研究奠定了必要基础。

抗坏血酸、表皮生长因子和促卵泡素对绵羊卵巢皮质体外培养的影响

本研究旨在评估抗坏血酸(VC)、表皮生长因子(EGF)、促卵泡素(FSH)对绵羊原始卵泡体外培养的影响以及它们之间的相互关系。实验按照2×2×2因子试验设计分为8组,分别为:MEM(对照组),MEM+VC(50μg/mL),MEM+EGF(100ng/mL),MEM+FSH(50ng/mL),MEM+VC+EGF,MEM+VC+FSH,MEM+EGF+FSH,MEM+VC+EGF+FSH。在培养0(未培养对照组)、2、6、12d后,对培养的卵巢皮质薄片进行组织学和增殖细胞核抗原(PCNA)检测以及透射电镜(TEM)观察。结果表明,与未培养组(发育卵泡比例15.4%±1.9%,正常卵泡比例88.2%±4.6%)比较,所有培养组中发育卵泡比例显著增加(P<0.05),正常卵泡比例下降(P<0.05)。培养12d后,与对照组(卵泡直径(34.5±3.3)μm,卵泡存活比例(38.9%±3.9%))比较,MEM+VC+FSH和MEM+EGF+FSH组中卵泡直径(分别为(39.7±3.4)μm和(42.5±5.1)μm)和卵泡存活比例(分别为58.5%±4.3%和59.3%±3.7%)都显著提高(P<0.05);各处理组中,培养12d后,MEM+VC+EGF组中发育卵泡比例(49.3%±3.2%)和卵泡直径((32.3±2.3)μm)最低,颗粒细胞PCNA阳性卵泡比例(26.4%±1.2%)也最少,而MEM+VC+EGF+FSH组中卵泡存活率(59.7%±6.1%)和卵泡直径((42.5±5.1)μm)都显著增加(P<0.05),颗粒细胞PCNA(43.5%±4.1%,P<0.05)表达增加。电镜结果表明,VC+EGF+FSH组能够维持与正常卵泡类似的超微结构,而在MEM和MEM+VC+EGF组却显示不同程度的退化特征。本研究结果提示在培养中联合添加VC与EGF抑制卵泡的发育和生长,而联合添加VC、EGF和FSH可能是促进绵羊原始卵泡体外激活和生长,维持卵泡存活以及结构完整的最有效的处理手段之一。

不同保存条件对绵羊卵巢组织卵泡存活的影响

研究旨在通过组织学方法评估卵巢保存形式、温度、时间、保存液对绵羊卵巢组织短期保存以及培养后卵泡存活的影响。结果表明：碎块或整个卵巢组织39℃保存6 h或12 h后,正常卵泡比例与新鲜组织和其他组比较显著下降（P〈0.05）。经过6 d的组织培养后,在生理盐水中4、20℃保存6、12 h和39℃保存2 h以及在MEM中39℃保存2 h的组织碎块中正常卵泡比例显著低于整个卵巢保存后组织中正常卵泡比例（P〈0.05）。在MEM中4℃保存6 h或12 h,培养后卵泡存活率显著高于相同条件保存于生理盐水中的组织（P〈0.05）。此外保存12 h培养后正常卵泡比例显著低于保存2 h处理组（P〈0.05）。表明在生理盐水和MEM中整个卵巢4、20℃保存2~6 h,或者卵巢碎块20℃保存在MEM中2~6 h都可以用于卵巢体外培养的研究。

基因编辑技术介绍

规律性成簇间隔的短回文重复序列(CRISPR)和CRISPR相关蛋白(Cas)组成的系统(CRISPR/Cas),是古细菌和细菌特有的抵御外源核酸入侵的适应性免疫机制。目前,己经在动植物基因功能研究、品种改良和基因治疗等方面得到应用。笔者主要以多种哺乳动物为例,对基因编辑技术和转基因技术的研究现状和进展进行介绍,希望帮助人们对基因编辑技术的发展及现状有一个的全面了解。