参与DNA修复的PIF1解链酶的纯化和ATP酶活性分析

目的克隆并表达纯化人类PIF1蛋白，分析其生物化学活性。方法从HeLa细胞的cDNA文库中克隆得到PIF1解链酶基因，插入融合有组氨酸的表达载体pET24b，构建pET24b—PIF1重组质粒，转化RosettaTM2（DE3）感受态细胞，十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）观察PIF1蛋白表达；通过快速液相蛋白色谱纯化（FPLC）系统，采用亲和层析和凝胶过滤，纯化人类重组PIF1蛋白。薄层层析（TLC）法检测纯化PIF1蛋白的ATP酶活性。结果克隆了人类PIF1基因，PIF1蛋白在大肠埃希菌（E．coli）中成功表达。结论建立了PIF1蛋白纯化的方法，PIF1蛋白具有依赖镁离子和DNA的ATP酶活性。