新疆维吾尔族妇女宫颈癌组织HPV16型E6基因变异分析

目的:新疆维吾尔族妇女宫颈癌的发生主要与人乳头状瘤病毒16(HPV16)感染相关,特定的HPV16E6突变株具有更高的致癌危险性。本研究通过检测维吾尔族妇女宫颈癌组织中HPV16E6基因突变情况,探讨其与维吾尔族妇女宫颈癌高发的关系。方法:从140例维吾尔族妇女宫颈癌石蜡包埋组织中提取DNA作为模板,PCR扩增HPV16E6全长基因,PCR产物直接测序,进行突变分析。结果:本组维吾尔族妇女宫颈癌组织中HPV16的阳性率是73.6%(103/140),91例E6基因测序及分析结果表明,维吾尔族妇女宫颈癌组织中存在HPV16E6变异株,其中49例(53.8%)分离株发生L83V突变,4例(4.39%)发生D25E突变,2例(2.20%)发生D64E/L83V突变,36例(39.6%)与野生型相同。结论:新疆维吾尔族妇女宫颈癌患者HPV16E6基因发生变异,主要以L83V突变为主,HPV16变异株在维吾尔族妇女宫颈癌患者中的分布可能与维吾尔族妇女宫颈癌高发存在一定关系。

新疆维吾尔族寻常型银屑病中JAK1、STAT3蛋白的表达及意义

目的探讨JAK-STAT信号转导通路中JAK1和STAT3在新疆维吾尔族寻常型银屑病皮损组织中的表达及意义。方法采用免疫组化法检测45例维吾尔族寻常型银屑病皮损组织和21例维吾尔族正常表皮组织中JAK1和STAT3蛋白的表达,并复习相关文献。结果维吾尔族寻常型银屑病患者皮损组织中JAK1蛋白阳性率为77.78%,在维吾尔族正常表皮组织中的阳性率为28.57%;维吾尔族寻常型银屑病患者皮损组织中STAT3蛋白阳性率为86.67%,在维吾尔族正常表皮组织中的阳性率为23.81%,两组相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论维吾尔族寻常型银屑病发病可能与JAK-STAT信号转导通路中JAK1和STAT3蛋白异常表达相关。

干细胞标志物P63和CD44v6在新疆维吾尔族女性宫颈病变组织中的表达及意义

目的探讨宫颈癌及癌前病变与肿瘤组织中P63和CD44v6表达调控的关系及其临床意义,为宫颈癌的早期诊断和临床治疗提供依据。方法收集宫颈上皮组织标本74例,其中官颈鳞癌(cervical squamous cell carcinoma,CSCC)患者36例,宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)Ⅱ~Ⅲ患者13例及正常对照25例,提取组织总RNA,利用荧光定量RTPCR方法鉴定P63和CD44v6基因的转录表达水平。结果 P63和CD44v6基因在宫颈组织恶性转化过程中,随着宫颈病变程度的加重,两种基因的表达水平逐渐升高,与病变程度呈正相关(P<0.05);各组间两两比较发现,CSCC与NC或CIN比较,上述两种基因的表达差异有统计学意义(P<0.05);而CIN与NC比较,P63和CD44v6表达水平差异无统计学意义(P>0.05);对P63和CD44v6基因表达水平变化的关系进行Pearson相关性分析,发现该两种基因呈中度相关(r=0.320,P=0.018)。单一基因表达水平检测对宫颈癌诊断的特异性和敏感度分析,两种基因的曲线下面积均>0.7,说明上述基因检测的诊断准确度较高,对宫颈癌有一定的预警价值,推测宫颈癌发生与P63和CD44v6基因表达水平升高存在密切关系。结论 P63和CD44v6等干细胞标志物的表达调控可能成为宫颈癌的候选生物学标志物,对于宫颈癌早期预警和临床治疗有重要意义,联合检测可以为宫颈癌判断预后提供重要依据。

Fabry病GLA基因突变及临床表现的相关研究

目的:分析Fabry病患者的GLA基因突变类型及临床表现,探讨Fabry病基因型与临床表现型之间的关系。方法:回顾性分析一个Fabry病家系成员中所有患病者的临床资料,采用聚合酶链式反应(PCR)扩增和测序分析确定GLA基因的突变类型,并与健康对照组进行比较。结果:基因型为g.1028-1029del AA的Fabry病患者中男性患者的临床症状重于女性患者,半合子男性有典型临床表现如血管角质瘤、肢端疼痛以及心、脑、肾等损害,女性杂合子仅表现为肢端疼痛等症状;在对照组人群中也存在GLA基因突变,为1号外显子1390位点的错义突变(1390A>G),但患者无临床症状。结论:即使相同基因型的Fabry病患者其临床表现也有所不同,GLA基因突变中可能存在非致病型。

维吾尔族妇女宫颈癌发生与ALDH1A1基因表达调控的关系及临床意义

目的本研究利用新疆维吾尔族妇女宫颈癌标本资源,对ALDH1A1基因的mRNA和蛋白质表达水平进行定量分析,探讨宫颈癌发生与该基因表达调控的关系及临床意义。方法收集维吾尔族妇女宫颈鳞癌(cervical squamous cell carcinoma,CSCC)、宫颈内上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)Ⅱ~Ⅲ及宫颈炎患者的新鲜组织标本58例和石蜡包埋组织切片75例,利用荧光定量RT-PCR方法、免疫组织化学等方法检测ALDH1A1基因在宫颈病变组织中的表达水平变化。结果ALDH1A1 mRNA在宫颈癌组织中的表达量(1.733±0.968),显著高于正常宫颈组织中的表达量(0.458±0.347,P<0.05)。随着宫颈病变的进程ALDH1A1蛋白的表达升高,ALDH1A1蛋白在官颈癌组织中表达率为77.5%(31/40),显著高于正常宫颈组织中的表达率36.8%(7/19)(P<0.01)。单一基因表达水平检测对宫颈癌诊断的特异性和敏感度分析,该基因的曲线下面积均>0.7,说明上述基因检测的诊断准确度较高,对宫颈癌有一定的预警价值,推测ALDH1A1基因的高表达可能成为宫颈癌早期预警的标志物。结论 ALDH1A1可作为宫颈癌肿瘤干细胞特异标志物,该基因转录表达上调或蛋白质表达水平升高与维族妇女宫颈癌发生有密切关系,可能成为肿瘤诊断和预后的分子标志物。

新疆维吾尔族苯丙酮尿症患儿苯丙氨酸羟化酶基因突变研究

目的探讨新疆维吾尔族苯丙酮尿症(phenylketonuria,PKU)患儿苯丙氨酸羟化酶(phenylalanine hydroxylase,PAH)基因的突变情况及突变特征,为临床诊疗提供理论参考。方法应用聚合酶链式反应产物直接测序的方法对新疆确诊的22例维吾尔族PKU患儿PAH基因13个外显子区域及内含子衔接区进行基因突变分析。结果在22例患儿的22对PAH等位基因中共检测到了16种突变,64个PAH基因突变位点,分别为位于外显子3、5、6、7、11、12及内含子2、3、10、12区域;其中第7外显子p.Val245Val(c.735G>A)静默突变位点占此次检出突变位点比例最高,为77.27%(17/22)。结论明确了新疆维吾尔族苯丙酮尿症患儿PAH基因的突变种类和特征,为深入研究维吾尔族家系苯丙酮尿症奠定基础。

微RNA在银屑病中差异表达的研究进展

若干微RNA(miRNA)的异常表达可通过作用于一个或多个靶基因在银屑病的发病中发挥重要作用,如miR-99a、miR-486-3p、miR-210可分别作用于胰岛素样生长因子1受体、叉头状转录因子3及人相关转录因子3等靶点。miRNA可调节角质形成细胞的异常增殖、分化及增加炎性介质的表达水平,通过研究miRNA在银屑病中的差异表达可找到更为有效的治疗方法。希望通过对miRNA生物合成、作用机制及与银屑病相关性的研究,为银屑病的病理生理机制及治疗提供一些新的思路。

p16基因启动子区甲基化与新疆维吾尔族银屑病相关性研究

目的探讨新疆维吾尔族银屑病患者表皮中p16基因启动子区甲基化与银屑病发病的关系。方法采用焦磷酸测序技术检测18例维吾尔族银屑病患者皮损组织(银屑病组)与12例正常皮肤组织(对照组)p16基因启动子区CpG岛的甲基化检测率,并比较2组甲基化发生率。结果银屑病组p16基因平均甲基化检测率(16.0%)明显高于对照组(2.75%),差异有统计学意义(P<0.05);银屑病组CpG1、CpG2、CpG3和CpG4甲基化发生率均为100%,对照组分别为100%、25%、0、16%,2组CpG2、CpG3和CpG4甲基化率比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 p16基因启动子区甲基化状态与新疆维吾尔族银屑病发病有相关性。

51例新疆寻常型银屑病患者皮损中FOXP1和hMSH2的表达

目的:检测新疆寻常型银屑病(PV)患者皮损中FOXP1和hMSH2的表达。方法:EnVision免疫组化法分别检测51例新疆PV患者皮损及29例正常人皮肤组织中FOXP1和hMSH2的表达。结果:FOXP1和hMSH2在PV皮损中的阳性表达率(92.16%,94.12%)均高于正常人皮肤组织(65.52%,55.17%),差异有明显统计学意义(P<0.01)。结论:FOXP1和hMSH2可能与寻常型银屑病的发病有关。

剥脱综合征白内障者单个核细胞中Notch2基因及其靶蛋白表达研究

目的探讨信号通路重要受体基因Notch2及靶蛋白在剥脱综合征白内障患者、健康正常人外周血单个核细胞中的表达水平和意义。方法采用实时荧光定量PCR法检测Notch2基因在18例剥脱综合征白内障患者外周血单个核细胞中的表达水平,同时检测对照组正常人群18例。运用免疫印迹法检测Notch2蛋白在剥脱综合征白内障患者和正常人群中的表达量。结果剥脱综合征患者外周血单个核细胞中Notch2基因相对表达水平为0.157±0.137,正常人群的表达水平为0.035±0.033,剥脱综合征患者显著高于正常健康人群,差异有统计学意义(t=3.662,P<0.05)。免疫印迹检测Notch2蛋白结果显示,剥脱综合征白内障患者蛋白表达量为0.785±0.092,正常人群为0.304±0.091,剥脱综合征患者显著高于正常人群,差异有统计学意义(t=15.795,P<0.01)。结论Notch2基因在剥脱综合征白内障患者外周血单个核细胞中的表达显著高于正常人群,其靶蛋白Notch2在剥脱综合征患者中的表达也高于正常人群。推测作为Notch信号通路重要受体基因Notch2异常表达正调控其靶蛋白Notch2参与剥脱综合征白内障的发病过程。

miR-34a及靶蛋白Foxp1对寻常型银屑病的作用研究

目的探讨miR-34a其靶蛋白Foxp1调控在寻常型银屑病发生过程中其表达水平和作用意义.方法运用实时荧光定量PCR法检测miR-34a在12例寻常型银屑病患者皮损组织和12例正常健康皮肤组织中的表达水平.利用化学合成的miR-34a mimic、miR-34a inhibitor,转染HaCaT细胞,使其过表达或抑制表达miR-34a;采用免疫印迹技术检测转染细胞中Foxp1蛋白的表达.结果寻常型银屑病患者皮损组织miR-34a的表达水平显著高于正常健康皮肤组织,差异有统计学意义(t=3.047,P<0.05).免疫印迹检测转染后HaCaT细胞中Foxp1蛋白结果表明:过表达miR-34a时Foxp1蛋白表达量增加,miR-34a抑制表达时Foxp1蛋白表达降低,差异有统计学意义(F =286.722,P<0.01).结论 miR-34a在寻常型银屑病患者皮肤组织中呈高表达,Foxp1作为miR-34a的靶蛋白受其调控参与寻常型银屑病的发生、发展过程.

新疆肥胖人群尿液代谢轮廓分析

目的:研究新疆维吾尔族正常体重健康人群、超重与肥胖人群尿液代谢轮廓间的差异,为探讨肥胖症及其相关慢性疾病的病因提供参考。方法:用气相色谱-质谱联用仪对肥胖组、超重组、健康对照组的尿液进行代谢轮廓分析得到原始数据,并对原始数据进行主成分分析与MPP分析,获取三组尿液中的差异性代谢产物。结果:通过质谱分析与数据库检索筛选并鉴定16种差异性代谢产物。结论:新疆维吾尔族超重、肥胖患者轮廓分析存在16种差异性代谢物,此为预测肥胖症及其相关慢性疾病的发生、早期防治提供科学依据及新的思路。

不同性别Fabry患者的α-半乳糖苷酶A活性研究

目的了解Fabry病中不同性别患者α-半乳糖苷酶A(α-Gal A)活性情况。方法选取一个Fabry病家系的8例患者和13例健康者,应用干血片法测定经过GLA基因检测确诊的Fabry病患者和健康者α-Gal A活性并进行比较。结果男性患者的α-Gal A活性[(8.66±2.15)×10-15 mol/(d·spot)]为健康对照者[(188.31±42.23)×10-15 mol/(d·spot)]的4.6%,女性患者[(149.93±46.56)×10-15 mol/(d·spot)]则为健康对照者的79.62%。男性半合子患者酶活性明显下降(P<0.05)。α-Gal A活性检测对男性半合子的灵敏度高于女性杂合子。结论α-半乳糖苷A活性下降程度存在性别差异,男性半合子Fabry病患者酶活性明显下降。

卡波氏肉瘤相关疱疹病毒感染神经元细胞SH-SY5Y的特点研究

为检测卡波氏肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi's sarcoma associated herpesvirus,KSHV)是否能够直接感染神经元SH-SY5Y细胞,分析病毒相关基因的表达水平和细胞增殖情况等特点,为进一步研究KSHV感染在中枢神经系统疾病中的作用提供依据。采用佛波酯(12-O-Tetradecanoylphorbol 13-acetate,TPA)从BCBL1细胞中诱导并提取有感染性的KSHV病毒,感染神经元细胞SH-SY5Y,48 h后显微镜下观察细胞形态变化。提取感染细胞的RNA,通过RT-PCR技术检测裂解态的ORF26和潜伏态的潜伏相关核抗原(Latency Associated Nuclear Antigen,LANA)的m RNA表达水平,通过免疫荧光检测LANA蛋白的表达水平,验证KSHV的成功感染,并在感染后1、3、5、7 d进行细胞计数,与未感染的细胞做比较,以检测KSHV感染对细胞增殖能力的影响。结果显示,显微镜下观察KSHV感染与未感染的SH-SY5Y细胞形态,见未感染的SH-SY5Y细胞呈梭形聚团生长,感染KSHV后,细胞变大,形态变圆,倾向于分散生长。RT-PCR检测发现ORF26和LANA在KSHV感染的SH-SY5Y细胞中均有表达。由此可知,免疫荧光检测到LANA蛋白在细胞中也有表达,这些结果确定了KSHV可以成功感染SH-SY5Y细胞,并可同时表达潜伏态和裂解态的病毒基因。细胞计数结果表明KSHV感染促进了SH-SY5Y细胞的增殖能力。

microRNA-21和microRNA-34a在新疆维吾尔族寻常型银屑病患者皮肤组织中的表达及意义

目的探讨维吾尔族寻常型银屑病患者microRNA(miR)-21与miR-34a的表达及意义。方法新疆维吾尔族寻常型银屑病患者10例为银屑病组,健康维吾尔族人群10例为正常组,采用实时荧光定量PCR法分别检测miR-21和miR-34a在银屑病组皮损组织、皮损旁组织及正常组中表达水平。结果miR-21在银屑病组皮损组织表达(0.134±0.106)、皮损旁组织(0.116±0.094)表达水平均高于正常组(0.044±0.024),差异有统计学意义(P<0.05),皮损组织和皮损旁组织miR-21表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05);银屑病组皮损组织miR-34a的表达水平(0.178±0.193)高于正常组(0.030±0.029)(P<0.05),皮损旁组织miR-34a表达水平(0.069±0.065)与皮损组织、正常组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 miR-21和miR-34a高表达在新疆维吾尔族寻常型银屑病发病中起重要作用。

MiR-34a/c在新疆维吾尔族、汉族寻常型银屑病皮损中的表达

目的 比较MiR-34a/c在新疆维吾尔族（维族）和汉族寻常型银屑病患者皮损组织、皮损旁组织以及正常人皮肤组织中的表达差异.方法 采用实时荧光定量PCR法分别检测新疆维族和汉族寻常型银屑病患者皮损组织、皮损旁组织以及正常人皮肤组织中MiR-34a/c的表达水平.结果 新疆寻常型银屑病患者皮损组织中MiR-34a的表达水平高于皮损旁组织及正常皮肤组织,差异有统计学意义（P＜0.05）,但在皮损旁组织与正常皮肤组织中差异无统计学意义（P＞0.05）;MiR-34c的表达水平在三种组织中差异无统计学意义（P＞0.05）;MiR-34c的表达水平在维族、汉族寻常型银屑病中比较,差异均无统计学意义（P＞0.05）.结论 MiR-34a可能在新疆维族、汉族寻常型银屑病的发病机制中起作用.

新疆维吾尔族银屑病患者皮损中p15、p16、p21蛋白表达及意义

目的 通过检测p15、p16、p21在维吾尔族银屑病患者皮损中的表达,探讨其蛋白表达在银屑病发病中的意义.方法 应用免疫组化方法检测新疆维吾尔族银屑病患者皮损及维吾尔族正常皮肤组织中的蛋白表达情况.结果 维吾尔族银屑病患者皮损中p16基因的阳性表达率为12.5％,显著低于正常组中的阳性表达率（66.67％）,差异有统计学意义（P＜0.05）;p15、p21基因在维吾尔族健康人群和银屑病患者皮损中的阳性表达比较差异均无统计学意义（P＞0.05）.结论 维吾尔族银屑病发病可能与p16蛋白表达异常有关.

新疆南疆地区维吾尔族苯丙酮尿症患儿苯丙氨酸羟化酶基因第5外显子突变研究

目的探讨新疆南疆地区维吾尔族苯丙酮尿症(phenylketonuria,PKU)患儿苯丙氨酸羟化酶(phenylalanine hydroxylase,PAH)基因第5外显子的突变特征。方法应用PCR产物直接测序法对新疆南疆地区17例维吾尔族PKU患儿PAH基因第5外显子进行序列分析,以确定其突变位点。结果 34条染色体中检测到1种突变,即p.R158Q(c.473G>A),为错义突变;17例患儿中3例发生此突变,突变检出比例为17.65%。结论首次明确新疆南疆地区维吾尔族PKU患儿PAH基因第5外显子的突变种类和特征。

新疆南疆地区维吾尔族苯丙酮尿症患儿苯丙氨酸羟化酶基因第2、3、4外显子突变研究

目的了解新疆南疆地区维吾尔族苯丙酮尿症(phenylketonuria,PKU)患儿苯丙氨酸羟化酶(phenylalanine hydroxylase,PAH)基因第2、3、4外显子的突变情况及突变特征,为临床诊疗提供理论参考。方法应用PCR产物直接测序的方法对新疆南疆地区12例维吾尔族PKU患儿PAH基因第2、3、4外显子进行序列分析,以确定其突变位点。结果在24条染色体中共检测到了3种突变,3个PAH基因突变位点,分别为位于外显子3及内含子2、3区域;其中IVS3-22C>T(c.353-22C>T)为此次检测相对高检出的突变位点。结论明确了新疆南疆维吾尔族苯丙酮尿症患儿PAH基因第2、3、4外显子的突变种类和特征,为深入研究和临床诊断维吾尔族苯丙酮尿症奠定基础。

鼠胚胎神经干细胞的体外培养及诱导分化

背景:随着神经干细胞培养技术条件的成熟,为颅脑损伤后神经系统功能重建、神经再生和神经系统疾病治疗提供了新的思路和途径。但移植所用的细胞来源及移植后的神经干细胞能否分化为神经细胞是急需解决的重要问题。目的:拟将体外分离培养的鼠胚胎神经干细胞稳定增殖传代,并诱导分化出神经系统的3种基本细胞。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-06/2008-06在新疆维吾尔自治区人民医院完成。材料:14～16d孕龄Wistar大鼠胚胎,由新疆自治区实验动物研究所和新疆医科大学实验动物中心提供。方法:取胎鼠额叶大脑皮质,组织块消化法体外分离培养神经干细胞,在表皮生长因子、碱性成纤维生长因子和B27联合作用下使其稳定增殖。原代培养7d后,加入含体积分数为10%胎牛血清的DMEM/F12培养基诱导14d。主要观察指标:倒置显微镜下观察神经干细胞的生长形态,并行巢蛋白免疫荧光染色鉴定。应用免疫组化染色检测诱导后神经干细胞的分化情况。结果:原代培养一两天细胞散在分布,胞体较小,呈圆形,折光性较好,3d后逐渐形成由数个细胞组成的细胞球;传代后贴壁细胞多数分化为长梭形或扁平形的胶质细胞,10d时可见大量由数十至数百个细胞组成的较大细胞球,其生长速度基本与原代培养相同,但成球速度明显加快;免疫荧光染色呈巢蛋白阳性反应。以含体积分数为10%胎牛血清的培养液诱导后,免疫化学染色示神经干细胞球呈神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白、髓鞘碱性蛋白阳性表达。结论:实验成功从鼠胚胎脑皮质分离培养出神经干细胞,并诱导分化为神经元细胞、星形胶质细胞和少突胶质细胞。