终末期肾病患者骨骼肌中丙酮酸脱氢酶活性与丙酮酸脱氢酶激酶4的表达

目的·探讨终末期肾病(end-stage renal disease,ESRD)患者骨骼肌丙酮酸脱氢酶(pyruvate dehydrogenase,PDH)活性及丙酮酸脱氢酶激酶4(pyruvate dehydrogenase kinase 4,PDK4)在骨骼肌中表达水平的变化。方法·收取ESRD患者和非慢性肾脏病(non-chronic kidney diseases,non-CKD)患者骨骼肌样本,比较2组患者的临床特征,ELISA法检测PDH活性,实时荧光定量PCR法检测PDK1~PDK4型同工酶、PDH各亚基的基因转录水平,Western blotting检测PDK1和PDK4蛋白表达水平。结果·non-CKD组和ESRD组患者在一般人口学资料上无明显差异,ESRD组血浆肌酐、尿素氮显著升高(均P<0.05),估算的肾小球滤过率、血红蛋白、白蛋白则显著降低(均P<0.05)。ESRD组骨骼肌PDH活性显著低于non-CKD组(P=0.014),2组患者骨骼肌PDK1~PDK4及PDH各亚基mRNA转录水平无明显差异,ESRD组PDK4蛋白表达量显著高于non-CKD对照组(P=0.000)。结论·ESRD患者骨骼肌中PDH活性下降,可能与PDK4表达上调有关。

激活蛋白激酶A信号对阿霉素肾病小鼠足细胞失分化的影响

目的·探讨体内激活蛋白激酶A(PKA)对阿霉素(ADR)肾病小鼠足细胞失分化以及蛋白尿的作用。方法·选择6~8周龄BALB/c雄性小鼠分为3组:ADR组予以ADR 10 mg/kg尾静脉注射构建ADR肾病小鼠模型,A+P组为ADR肾病小鼠予PKA信号激动剂p CPT-c AMP 50 mg/(kg·d)腹腔注射,对照组不做任何干预。蛋白电泳+考马斯蓝染色方法观察小鼠尿白蛋白变化,WT-1免疫组化染色观察足细胞数量,免疫荧光双染观察足细胞的损伤。结果·与对照组相比,ADR肾病小鼠尿白蛋白/肌酐比值显著升高,肾小球足细胞数量显著降低,足细胞特异性蛋白synaptopodin和podocalyxin表达明显下降,足细胞受损伤失分化标志蛋白desmin表达增多。p CPT-c AMP干预后ADR小鼠白蛋白/肌酐比值降低,WT-1阳性细胞和synaptopodin和podocalyxin表达增多,desmin表达减少。结论·p CPT-c AMP激活PKA信号后可减轻ADR肾病小鼠足细胞损伤,防止足细胞数量减少,减轻蛋白尿。其作用可能与p CPT-c AMP防止ADR肾病小鼠足细胞失分化相关。

果糖通过尿酸和活性氧簇诱导人肾小管上皮细胞单核细胞趋化蛋白-1的表达

目的·探讨果糖诱导肾小管上皮细胞表达单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattratant protein-1,MCP-1)的机制。方法·将HK-2细胞分为对照组,果糖孵育(1、5和10 mmol/L)组,果糖、己酮糖激酶抑制剂(KHK-IN)共孵育(果糖5 mmol/L,KHKIN分别为12、100和1 000 nmol/L)组,尿酸孵育(5、15和50 mg/d L)组,果糖、别嘌醇共孵育(果糖5 mmol/L,别嘌醇分别为0.01、0.1和0.5 mmol/L)组,尿酸、别嘌醇共孵育(尿酸50 mg/d L,别嘌醇分别为0.01、0.1和0.5 mmol/L)组,H2O2孵育(0.1和0.3 mmol/L)组,果糖、N-乙酰半胱氨酸(NAC)共孵育(果糖5 mmol/L,NAC分别为5、10和50 mmol/L)组,尿酸、NAC共孵育(尿酸50 mg/d L,NAC分别为5、10和50 mmol/L)组。采用实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹实验检测MCP-1 m RNA和蛋白的表达;利用活性氧(ROS)荧光探针观察果糖和尿酸对HK-2细胞ROS产生的影响。结果·果糖剂量及时间依赖性诱导HK-2细胞MCP-1 m RNA转录和蛋白表达,此过程可被KHK-IN阻断。外源性尿酸诱导HK-2细胞产生MCP-1,别嘌醇抑制果糖引起的MCP-1表达,但不能阻断外源性尿酸的作用。果糖和尿酸均诱导HK-2细胞产生ROS,别嘌醇抑制了果糖而非外源性尿酸诱导的ROS产生。H2O2诱导HK-2细胞生成MCP-1,NAC则抑制这种作用。结论·果糖在己酮糖激酶催化下,通过引起细胞内尿酸升高和产生ROS,导致人肾小管上皮细胞产生MCP-1。

激活足细胞环腺苷酸信号调节细胞磷酸化ERM和CLIC5的表达

目的研究足细胞内环腺苷酸(c AMP)信号对足细胞标志蛋白Podocalyxin、细胞内氯离子通道蛋白5(CLIC5)及相关的埃兹蛋白-根蛋白-膜突蛋白(ERM)表达的影响。方法构建阿霉素(ADR)肾病小鼠模型,部分小鼠使用腺苷酸环化酶激活剂Forskolin治疗(ADR组和ADR+Forskolin组)。考马斯亮蓝染色法测定尿液中蛋白质含量;电子显微镜观察足突宽度;免疫荧光染色和Western blotting检测足细胞中磷酸化ERM(P-ERM)、CLIC5和Podocalyxin的表达。结果与ADR组比较,ADR+Forskolin组小鼠尿白蛋白含量明显减少,足突增宽显著改善(P<0.05)。Western blotting和免疫荧光染色结果显示:与ADR组比较,ADR+Forskolin组小鼠足细胞内P-ERM、Podocalyxin和CLIC5蛋白表达及共定位均显著增加。Western blotting检测结果显示:体外以嘌呤霉素氨基核苷(PAN)孵育足细胞72 h,可使P-ERM和CLIC5的表达显著减少(P<0.01);Epac信号激动剂2Me-c AMP预处理可防止PAN诱导的足细胞P-ERM低表达,而PKA信号激动剂p CPT-c AMP预处理可防止PAN诱导的CLIC5表达减少。结论 Forskolin可减轻ADR肾炎小鼠的白蛋白尿,改善足突融合,缓解Podocalyxin/CLIC5/ERM蛋白复合体低表达。c AMP分别通过PKA和Epac信号通路防止PAN诱导的CLIC5和P-ERM表达降低。

果糖导致肾损伤的机制和防治研究进展

果糖作为食品添加剂，近年来被大量使用。越来越多的研究发现，过量摄入果糖在一些慢性病的发生和发展中发挥了重要的作用，包括代谢综合征、糖尿病、慢性肾脏病（CKD）、心血管疾病等。

肾内科护理风险的主要因素及风险管理要点探讨

探讨肾内科护理风险的主要因素及风险管理要点。方法 对2019年1月-2022年12月期间我院肾内科收治的1600例患者病例资料展开分析,统计肾内科护理风险事件发生种类,以及明确导致护理风险的主要因素,并探讨风险管理措施。结果 1600名肾内科患者共出现68例护理风险事件,包括17例(1.06%)感染、14例(0.87%)导管滑脱、10例(0.62%)跌倒、10例(0.62%)内瘘血肿/出血、8例(0.50%)压疮、6例(0.37%)多脏器损害、3例(0.18%)坠床。结论 肾内科护理风险较多,需加强肾内科护理风险管理,以降低风险事件发生率。

白藜芦醇通过Sirtuin1激活足细胞Notch1信号

目的探索白藜芦醇是否影响足细胞中的Notch1信号通路及其可能的机制。方法分别使用RNA干扰（RNAi）技术和盐酸多西环素（doxycycline，Dox）诱导野生型（WT）和可诱导的Sirtuin1（SIRT1）短发夹RNA（shRNA）转基因（CAGGS）足细胞SIRT1表达下降，重组小鼠Notch信号的Delta配体4（Delta—like ligand4，DLL4）诱导激活Notch1通路。实时荧光定量PCR法检测SIRT1、Notch1通路关键γ分泌酶mRNA及Notch1靶基因Hesl、Hey2的表达。Western印迹法检测足细胞内Notch1胞内段结构域（intracellular domain of Notch1，ICD1）、SIRT1、解聚素金属蛋白酶（ADAM）10以及γ分泌酶复合物Presenilin1和Nicastrin的表达。结果白藜芦醇剂量依赖地诱导野生型小鼠足细胞Notch1信号胞内段ICDl表达以及下游产物Hesl和Hey2 mRNA表达增高。白藜芦醇可诱导Notch1蛋白水解酶1分泌酶组分Nicastrin的mRNA和蛋白表达上升以及ADAM10蛋白的表达下降（P〈0．05），而这些变化在使用SIRTIRNAi后均被减弱（P〈0．05）。重组小鼠DLL4可以增加Notch1通路靶基因Hes1和Hey2的mRNA水平，同时增加细胞核内ICD1的表达，盐酸多西环素孵育CAGGS足细胞显著降低SIRT1mRNA水平（P〈0．05），48h后SIRT1蛋白表达明显下降（P〈0．05），并且显著减弱DLIA的作用（P〈0．05）。结论白藜芦醇可以通过高表达分泌酶Nicastrin诱导足细胞中Notch1信号活化，SIRT1介导了白藜芦醇和DLL4诱导Notch1信号活化的作用。

维持性血液透析患者认知损害的发病情况及预后相关危险因素

目的探索维持性血液透析(maintenance hemodialysis,MHD)患者并发认知损害(cognitive impairment,CI)的发病情况、危险因素以及预后情况,为临床更好地认识和预防该并发症、改善MHD患者的预后提供依据。方法选取2000年1月至2014年7月在上海交通大学医学院附属仁济医院进行MHD(≥3月)、年龄≥18岁,并能够自愿配合进行认知功能蒙特利尔认知评估量表(montreal cognitive assessment,MoCA)评分的患者。排除病历资料丢失或不全以及不能配合完成研究的患者。根据MoCA评分将患者分成两组:认知损害组(MoCA<26)和非认知损害组(MoCA≥26),共随访3年,分别对两组的人口学资料、既往病史、血液透析资料、实验室检查和患者预后进行比较。应用多因素Logistic回归分析寻找MHD并发认知损害的危险因素,应用Kaplan-Meier生存曲线和Cox回归模型进行预后分析。结果共有219例MHD患者完成MoCA评分并符合纳入标准,年龄(60.07±12.44)岁,男性130例(59.4%),男女比为1.46∶1,认知损害发病率为51.6%,患者透析龄(100.79±70.23)个月。认知损害组(n=113)与非认知损害组(n=106)间年龄、透后收缩压、透前舒张压、透后舒张压、血小板、单室模型尿素清除指数(spKt/V)及教育程度<12年、糖尿病史、无尿患者比例的差异均有统计学意义(均P<0.05)。多因素Logistic逐步回归分析结果提示,教育程度<12年(OR=3.428,95%CI 1.919~6.125,P<0.001)、透后舒张压<73 mmHg(OR=2.234,95%CI 1.253~3.984,P=0.006)和spKt/V<1.72(OR=1.982,95%CI 1.102~3.564,P=0.022)是MHD患者发生认知损害的独立危险因素。Kaplan-Meier生存曲线分析提示,在3年随访期间MHD伴有认知损害患者生存率低于非认知损害患者(χ2=3.977,P=0.046)。多因素Cox回归模型分析显示,认知损害是MHD患者死亡的独立危险因素(RR=2.661,95%CI 0.967~7.321,P=0.058)。结论认知损害是MHD患者常见的并发症之一,也是MHD患者死亡的独立危险因素。MHD伴有认知损害患者病死率较非认知损害患者要高。教育程度<12年、透后舒张压<73 mmHg和spKt/V<1.72是MHD患者发生认知损害的独立危险因素。