不同棘球蚴抗原诱导树突状细胞表达吲哚胺2,3-双加氧酶的实验研究

目的检测不同的棘球蚴抗原体外诱导树突状细胞(DCs)表达吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)的情况。方法从C57BL/6小鼠股骨中分离出骨髓细胞,用小鼠重组巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)诱导后,获得小鼠骨髓源树突状细胞(BMDCs)。分别用重组抗原B(rAgB,15μg/ml)、小鼠细粒棘球蚴囊液(MHF,5 mg/ml)、γ干扰素(IFN-γ,1 000 U/ml,为阳性对照)和RPMI 1640完全培养液(阴性对照)刺激DCs,于18、24和48 h后收集细胞和细胞上清。采用流式细胞术检测各组DCs的表面标志物CD40、CD80、CD86和I-A/I-E的阳性表达情况,并利用实时荧光定量PCR(FQ-RT-PCR)检测各组的IDO mRNA相对转录水平。利用高效液相色谱法(HPLC)检测各组细胞上清中的色氨酸(Try)浓度。结果流式细胞术检测结果显示,DCs受rAgB和MHF刺激后,其表面标志物CD40、CD80、CD86和I-A/I-E的阳性表达率均降低。刺激24 h后,rAgB组的CD40、CD86和I-A/I-E阳性表达率分别为(22.60±2.69)%、(35.50±4.38)%和(57.30±4.38)%,与MHF组[(38.00±3.54)%、(53.00±3.39)%和(77.10±1.70)%]和阴性对照[(37.95±3.61)%、(19.55±1.06)%和(85.45±1.63)%]的差异均有统计学意义(P<0.05)。FQ-RT-PCR结果显示,刺激18、24和48 h后,rAgB组的IDO mRNA水平[(9.20±0.01)、(29.44±0.02)和(16.48±0.04)]和MHF组的[(9.67±0.02)、(17.52±0.01)和(16.81±0.01)]均高于阴性对照组[(2.46±0.01)、(7.77±0.01)和(10.56±0.01)](P<0.01),rAgB组和MHF组IDO mRNA水平的差异均有统计学意义(P<0.05)。HPLC结果显示,刺激18、24和48 h后,rAgB组DCs上清中的色氨酸浓度[(23.65±0.64)、(13.95±1.06)和(19.05±0.64)μmol/L]均较其他3组低,刺激24 h后的色氨酸浓度与阴性对照组(22.90±0.14)和MHF组(20.65±0.35)的差异均有统计学意义(P<0.05)。结论在体外实验条件下,rAgB、MHF均可上调DCs表面IDO的表达,作用24 h后,rAgB上调IDO的能力强于MHF。

新疆维、汉妇女miR-146a(rs2910164)基因多态性分析

目的：探讨新疆维吾尔族与汉族妇女间miR-146a（rs2910164）基因多态性的差异,分析其与宫颈癌发生发展的关系。方法：PCR-RFLP法检测宫颈炎、CIN及宫颈癌组织中miR-146a（rs2910164）基因分型。结果：维吾尔族和汉族间的miR-146a（rs2910164）基因型构成比差异显著（χ2=57. 927,P〈0. 001）,维吾尔族GG基因型比例显著高于汉族。Logistic回归分析发现,维吾尔族（OR=3. 332,95% CI1. 411 ~ 7. 868）和肿瘤直径≥4cm（OR=3. 792,95% CI1. 162 ~12. 376）与miR-146a（rs2910164）基因型GG/CG基因型显著相关。结论：新疆维吾尔族与汉组妇女间miR-146a（rs2910164）基因多态性差异显著,miR-146a（rs2910164）等位基因G可能参与宫颈癌的病情发展。

新疆妇女宫颈病变组织miR-146a/133b的表达及临床意义

目的探讨miR-146a/133b在新疆维、汉民族宫颈组织中的差异性表达及其临床意义。方法采用RT-qPCR法检测miR-146a/133b在石蜡包埋的宫颈炎、宫颈上皮内瘤变(CIN)和宫颈癌组织中的相对表达量,分析其在宫颈癌发生、发展中的临床意义。结果与宫颈炎组织比,CIN和宫颈癌组织miR-146a/133b的表达水平显著升高(P<0.05),且随宫颈病变的加重,两者的表达水平逐渐升高,宫颈癌组织中维、汉民族miR-146a存在差异性表达(P<0.05)。结婚年龄小于20岁、肿瘤直径大于或等于4cm、有HPV感染的宫颈癌组织中miR-146a/133b呈高表达(P<0.05)。结论 miR-146a/133b参与宫颈癌的发生、发展,可能成为宫颈癌病情预测及评估新的分子标志物。

新疆某三甲级医院包虫病流行病学的现状和特征分析

目的：研究新疆包虫病流行病学的现状和特征，为制定控制措施及合理治疗提供依据。方法调查2002-2013年新疆医科大学第一附属医院收治的2957例包虫病患者，回顾性分析包虫病患者的性别、年龄、职业、民族、入院年份、发病部位、疾病转归的分布特征。结果调查的患者中男性1478名（49．98％），女性1479名（50．02％）。年龄2-85岁，其中31-40岁的患者最多（27．5％）。患者职业中以农民为主（37．8％）。各民族中汉族患者最多（48．0％），其次是维吾尔族（17．7％）和哈萨克族（11．7％）。包虫病的发病率由2002年的4．3％上升到2013的14．3％。发病部位中最常见的是肝（85．6％）。绝大部分病人可治愈（86．0％）。结论新疆包虫病发病率呈逐年增加趋势，包虫病患者以汉族！维吾尔族！哈萨克族居多，病例呈逐年增多趋势，大部分患者可治愈。

细粒棘球绦虫重组BCG-EgG1Y162菌株的构建和表达

目的构建和表达细粒棘球绦虫重组卡介苗(BCG)菌株rBCG-EgG1Y162。方法通过基因工程技术将细粒棘球绦虫抗原EgG1Y162的编码基因与大肠埃希菌(E.coli)-分枝杆菌穿梭表达质粒载体pMV361重组,并转化E.coli后进行扩增。重组质粒pMV-EgG1Y162经PCR和双酶切鉴定后,进行测序。将鉴定正确的rpMV-EgG1Y162通过电穿孔技术转化至感受态BCG菌株中,构建rBCG-EgG1Y162。经PCR和双酶切鉴定正确后,扩增培养2周,并于45℃放置30 min,诱导目的蛋白表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析蛋白表达情况,并以兔抗原核表达重组蛋白EgG1Y162血清为一抗进行蛋白质印迹(Western blotting)分析。结果重组质粒rpMV-EgG1Y162经PCR扩增和双酶切后,均获得约360 bp的EgG1Y162目的基因片段,与预期片段长度一致,测序结果表明插入序列正确。将其通过电穿孔转化BCG菌株后,rBCG-EgG1Y162生长良好,经酶切和PCR鉴定正确。SDS-PAGE和Western blotting结果显示,目的表达产物的相对分子质量(Mr)约为71 000。结论构建和表达了细粒棘球绦虫rBCG-EgG1Y162菌株。

原发免疫性血小板减少症患者CD4^＋T细胞CD28的表达及其与IFN-γ/IL-10比率的关系

目的研究原发免疫性血小板减少症(ITP)患者治疗前、后,外周血CD4+的T淋巴细胞中共刺激分子CD28的表达及与IFN-γ/IL-10比率的关系。方法采用流式细胞术分析30例ITP患者糖皮质激素治疗前、后和26例正常对照外周血CD4+T细胞上CD28表达率,用ELISA双夹心法检测外周血血清中IFN-γ和IL-10的水平,评价CD4+CD28+与IFN-γ/IL-10平衡状态、血小板计数之间的关系。结果 ITP患者治疗前CD4+CD28+的表达显著高于正常对照组(P<0.05),治疗后与正常对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);ITP患者治疗前IFN-γ水平较正常对照组显著增高,IL-10水平显著降低,IFN-γ/IL-10比值显著增高(P<0.01),治疗后与正常对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);ITP患者治疗前CD4+CD28+与IFN-γ/IL-10比值呈正相关(P<0.05),与血小板计数呈负相关(P<0.05)。结论共刺激分子CD28与ITP免疫紊乱密切相关,可能通过参与Th1优势状态形成而在ITP的发病中发挥一定作用。

新疆伊犁地区尼勒克县人群泡球蚴感染病例调查及nad2、cob基因片段分析

目的了解新疆伊犁地区尼勒克县泡球蚴感染确诊病例人群分布及病原遗传特征。方法收集和调查尼勒克县境内人群泡球蚴感染病例相关数据,并利用分子生物学技术对收集到的患者病灶肝组织样本,针对线粒体nad2和cob基因片段开展病原分子检测和分析。结果截止2015年底共收集到泡球蚴感染患者资料共计48例,首例感染病人确诊于1989年。近5年确诊病例占到所有病例数的45.8%,年均确诊率为1.7/10万。感染人群沿喀什河流域两岸分布,在乌拉斯台乡尤为集中。患病人群中35-44岁占到38.6%,男性占64.6%,农牧民占95.8%。通过对11份病例样本检测nad2、cob基因片段进一步证实为泡球蚴感染,序列自身比对完全同源。结论泡球蚴在尼勒克县属于新发传染病。包括尼勒克县在内的伊犁河谷地带为泡球蚴的自然疫源地,该县境内的泡球蚴病原核酸序列较为保守单一。

特发性血小板减少性紫癜患者Th1/Th2的细胞因子水平及临床意义

目的:检测特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者外周血Th1(IL-2、IFN-γ)及Th2(IL-4、IL-10)细胞因子的变化,探讨ITP患者发病与Th1/Th2优势活化状态之间的关系。方法:通过酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测30例ITP患者治疗前、治疗后及26例健康志愿者外周血清中IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10水平。结果:ITP患者治疗前IFN-γ及IL-2因子水平高于治疗后和对照组,差异有统计学意义(P<0.05),而IL-4及IL-10因子治疗前水平低于治疗后和对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Th1型细胞因子介导的免疫应答在ITP的发病机制中占主导地位,糖皮质激素治疗可调整Th1/Th2细胞因子的偏移状态。

微囊法棘球蚴继发感染小鼠动物模型的建立

目的通过体外培养原头蚴发育成微囊,经腹腔注射建立稳定的细粒棘球蚴和多房棘球蚴继发感染小鼠动物模型。方法无菌条件下采集羊源细粒棘球绦虫原头蚴和鼠源多房棘球绦虫原头蚴,经胃蛋白酶消化后检测虫体活力并计数,于37℃、5%CO2条件下进行体外培养至发育成微囊,以每鼠50个微囊的剂量经腹腔注射的途径分别接种BALB/c小鼠。接种6个月后,通过腹部解剖大体观察和病理检测分析各组小鼠的感染情况及包虫囊的生长情况。结果原头蚴在体外培养60d时发育成微囊,显微镜下观察Eg具有明显的透明角质层结构,而Em微囊角质层较薄。小鼠细粒棘球蚴和多房棘球蚴的感染率均为100%,Eg包虫囊为游离单囊,成囊率达70%,囊内无原头蚴;Em包虫囊为类似肿瘤的团块状组织,病灶内有生发囊及原头蚴。结论采用微囊法可建立稳定的棘球蚴继发感染小鼠动物模型,为疫苗研制、药物筛选和疗效判定提供研究动物模型。

转化生长因子β1刺激改良培养小鼠原代肝星状细胞的活化

背景:肝星状细胞是肝内分泌细胞外基质的关键细胞类型,因此在肝纤维化研究中很重要。目的:实验改良了肝星状细胞原代培养方法,获得充足的细胞量,用转化生长因子β1刺激活化,研究致纤维化的相关因子表达情况。方法:氯胺酮麻醉小鼠后采用门静脉穿刺原位灌注肝脏的方法分离肝脏,采用密度梯度离心获得肝星状细胞,利用形态学、免疫荧光染色等方法对原代肝星状细胞进行鉴定;将培养24 h肝星状细胞用质量浓度10μg/L转化生长因子β1刺激48 h,同时设PBS组进行对比。结果与结论:通过原位灌注肝脏并且酶消化的方法可以成功获得小鼠原代肝星状细胞,并且锥虫蓝染色活率为(97.2±0.8)%,免疫荧光染色纯度为(90.4±1.2)%,细胞计数总量约2.5×106/只。实时荧光定量聚合酶链式反应检测显示,与PBS组比较,转化生长因子β1刺激组的肝星状细胞平滑肌肌动蛋白α、Ⅰ型胶原蛋白、转化生长因子β受体1、转化生长因子β受体2 mR NA表达水平明显升高(P<0.05)。结果证实,实验采用的改良的培养方法可更高效高质量的获得原代肝星状细胞,转化生长因子β1刺激可导致肝星状细胞活化,分泌致纤维化因子。

新疆维吾尔自治区部分包虫病流行地区患者药物治疗现状调查

目的调查新疆维吾尔自治区（新疆）部分包虫病流行地区患者药物治疗情况。方法2013年4—6月通过问卷形式对新疆4个包虫病医疗点（新疆医科大学第一附属医院、布克塞尔蒙古自治县、额敏县和裕民县）进行包虫病规范化药物治疗现况调查，以WHO包虫病药物治疗建议作为规范化治疗标准。结果共调查329例包虫病患者，其中行抗包虫药物治疗250例，规范化药物治疗占49．2％（162／329）；未规范化药物治疗病例50．8％（167／329）。结论新疆部分包虫病地区患者临床药物治疗亟待规范，其综合陛防治应包括规范化诊断、手术、药物治疗以及随访的个体治疗。

原发性胆汁性肝硬化患者血清和肝组织白细胞介素9表达增强

目的探讨白细胞介素9(IL-9)在原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者中的表达水平及其临床意义。方法选取80例PBC患者和100例健康人,采用流式微珠阵列(CBA)法检测血清IL-9、γ干扰素(IFN-γ)、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-10和IL-17水平,实时荧光定量PCR检测外周血单个核细胞(PBMC)IL-9 mRNA水平,免疫组织化学染色检测肝组织IL-9表达和定位。结果与健康人相比,PBC患者血清IL-9、TNF-α、IL-6、IL-17、IFN-γ、IL-10均显著升高,且IL-9与Ig G水平正相关。PBC患者外周血中IL-9 mRNA水平升高,PBC肝组织中有IL-9阳性细胞,主要位于汇管区的胆管上皮细胞。结论 PBC患者外周血和肝组织中高表达IL-9。

细粒棘球绦虫p38蛋白原核表达及其多克隆抗体制备（英文）

目的制备细粒棘球绦虫(Eg)p38蛋白的多克隆抗体,为进一步研究Egp38蛋白的功能提供检测抗体。方法将Egp38蛋白基因序列克隆至原核表达载体pET28a,转化E.coli BL21株,IPTG诱导蛋白表达,以Ni亲和层析纯化Egp38蛋白,免疫家兔,收集免疫血清,ELISA测定抗体效价,Western blotting检测所制备抗体与Eg虫体天然Egp38蛋白的反应性。结果经0.2mmol/L IPTG诱导,表达出约46kDa的Egp38重组蛋白,制备获得效价在2.56×105以上的多克隆抗体,该抗体能够与Egp38重组蛋白和Eg蚴虫体内的Egp38蛋白发生特异性反应。结论成功制备获得兔抗Egp38多克隆抗体,为研究Egp38在Eg与宿主间的交互作用中的功能和作为药物靶标等研究奠定基础。

Logistic回归方程对阿苯达唑两种剂型药物治疗囊性包虫病的临床疗效评价

目的应用Logistic回归的方法评价阿苯达唑两种剂型药物治疗囊性包虫病的临床疗效。方法回顾性分析我院自1998～2008年十年收治的阿苯达唑脂质体和阿苯达唑片治疗的共269例囊性包虫病患者的临床随访资料,通过一定的纳入及排除标准,入组病例218例。依据随访记录的可能对临床疗效产生影响的各项指标,应用SPSS13.0及PEMS3.1医学统计软件包对各项指标进行分析并建立Logistic回归方程深入分析。结果影像学疗效结果评价显示阿苯达唑脂质体组与阿苯达唑片剂组比较,3个月总有效率差异有显著统计学意义（χ^2=19.581,P=0.00001）,将两个治疗组作为疗效的影响因素引入Logistic回归方程分析结果也显示,两个治疗组比较总有效率差异有统计学意义（χ^2=20.806,P〈0.001,OR〈1,95%CI：0.119～0.428）。结论阿苯达唑脂质体及阿苯达唑片剂均是有效的抗包虫药物,Logistic回归方程的结果结合影像学疗效评价显示阿苯达唑脂质体疗效优于阿苯达唑片剂。

肝癌细胞株HepG2与正常肝细胞株7702差异微小RNA筛选

目的初步探讨肝癌细胞株HepG2与正常肝细胞株7702微小RNA(miRNA)分子表达谱的差异。方法选取肝癌细胞株HepG2与正常肝细胞株7702样本分别作为实验组和对照组,采用高通量的miRNA微阵列芯片技术筛选两者间差异表达的miRNA,并运用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)验证芯片结果的可靠性(样品间变化标准以上调或者下调2倍作为判定的阈值范围)。结果在肝癌细胞株HepG2中,上调2倍的差异表达miRNA分子有32个,其中上调超过8倍差异表达miRNA有12个;下调2倍的差异表达miRNA有26个,其中下调超过8倍的miRNA分子有4个(P<0.05),miRNA上调与下调表达率差异有统计学意义。结论肝癌细胞株HepG2与正常肝细胞株7702的差异表达miRNA分子可能与肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的发生、转移以及侵袭能力相关,为进一步研究与肿瘤相关的miRNA在肝细胞癌发病机制中的作用奠定基础。

沙眼衣原体主要外膜蛋白抗原的二级结构及B、T细胞表位分析

目的 分析沙眼衣原体主要外膜蛋白抗原的二级结构及B、T细胞表位。方法 采用计算机在线预测网站PSIPRED V3.3对沙眼衣原体主要外膜蛋白抗原蛋白的二级结构进行预测和分析;采用BCEpred和ABCpred网络软件对沙眼衣原体主要外膜蛋白B细胞表位进行预测和分析;采用SYFPEITHI在线软件对沙眼衣原体主要外膜蛋白的MHC-Ⅰ类HLA-A 0201限制性T细胞表位进行预测和分析。结果 沙眼衣原体主要外膜蛋白抗原蛋白的二级结构中无规则卷曲结构占32.49%、α螺旋结构占41.62%、β-折叠结构占19.80%。沙眼衣原体主要外膜蛋白抗原的B细胞表位氨基酸序列位点分别为41~50、92~101、51~60、306~315、260~269和160~169,MHC-Ⅰ类HLA-A 0201限制性T细胞表位氨基酸序列位点分别为201~209、379~387、3~11、126~134和177~185。结论沙眼衣原体主要外膜蛋白抗原的二级结构中无规则卷曲结构、α螺旋结构所占比例高,有6个B细胞表位和5个T细胞表位。

细粒棘球蚴抗原诱导树突状细胞表达吲哚胺2,3-双加氧酶的动态观察

目的动态检测细粒棘球蚴不同抗原体外诱导树突状细胞表达吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)。方法在体外实验的条件下,获得C57BL/6小鼠骨髓来源的树突状细胞(BMDCs),分别应用15μg/ml重组抗原B(rAgB)、5mg/ml小鼠囊型包虫囊液(MHF)、1 000U/ml IFN-γ(阳性对照)刺激BMDCs,在6、18、24、48、60h采用实时荧光定量RT-PCR动态监测IDO、IL-10mRNA相对表达情况;在不同时间点收集各组DCs,应用Western blot检测IDO蛋白的表达。结果 FQ-RT-PCR显示,rAgB处理组IDO mRNA在24h时上调26.8倍,IL-10mRNA在48h时上调65.1倍,MHF处理组干预24h时IDO mRNA、IL-10mRNA表达分别上调12.6倍和3.9倍。Western blot显示IDO的表达可被rAgB、MHF上调,rAgB处理组在24h时出现IDO条带,MHF处理组于48h出现MHF条带。结论 rAgB、MHF均可上调DCs表面IDO的表达,并在一定时间内rAgB上调IDO表达的能力强于MHF。推测在CE的慢性感染过程中,IDO作为调节宿主反应的分子开关可能在Th2型反应中发挥着主导作用,棘球蚴致机体免疫逃避中可能参与抑制炎症反应。

新疆维吾尔自治区哈萨克族人群心房颤动流行病学调查

目的了解新疆维吾尔自治区（简称新疆）哈萨克族成年人心房颤动（房颤）的患病率和流行病学特征。方法应用四阶段整群随机抽样方法，在新疆塔城、伊犁和阿勒泰地区抽取具有代表性的样本。采用询问房颤病史、记录每个人心电图及体检的方法确定房颤的诊断。结果共抽样调查30～89岁之间新疆地区哈萨克族成年人22514例，房颤患病率为0．37％。年龄分组显示患病率有随年龄增高而增加的趋势。男性房颤患病率高于女性（0．59％比0．20％，P〈0．01）。房颤患者中瓣膜性房颤23例（27．8％）；卒中以缺血性卒中为主，房颤患者卒中率明显高于非房颤人群（6．0％比1．2％，P〈0．01）。结论新疆哈萨克族成年人群房颤患病率低于国内水平，且服药情况十分不理想，需要加强对房颤的控制。

IL-10在细粒棘球蚴感染小鼠的免疫调控作用研究

目的通过检测细粒棘球蚴感染小鼠IL-10表达水平的变化,探讨IL-10的免疫调控作用。方法收集感染细粒棘球蚴病羊肝脏囊泡中的原头蚴,处理后接种实验组小鼠肝脏,建立实验动物模型。于感染后2、8、30、90和270d各取8只小鼠处死,收集血液,分离血清,采用ELISA检测IL-10含量;同时剥取小鼠脾脏,采用RT-PCR检测IL-10mRNA。实验设0.9%NaCl对照组。结果与对照组比较,实验组小鼠在感染后60和90d血清IL-10表达水平显著升高,在感染后180d达到峰值,随后略有下降,但持续高水平表达(t180d=-27.087,t270d=-19.382,均P<0.01)。与对照组相比,实验组小鼠脾脏IL-10mRNA水平在感染后90d达到峰值(t=-3.959,P<0.01),之后表达量仍然处于较高水平状态(t180d=-2.571,t270d=-3.284,均P<0.01)。结论细粒棘球蚴感染后期小鼠IL-10持续高表达,这可能是导致细粒棘球蚴发生免疫逃逸的机制之一。

细粒棘球绦虫新疆株胆汁酸钠协同转运蛋白基因的克隆及序列分析

从新疆株细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus,Eg)原头蚴中克隆胆汁酸钠协同转运蛋白(sodium-bile acid cotransporter,Eg SBACT)基因,进行序列测定和生物信息学分析。首先设计Eg SBACT基因特异性引物,用RT及PCR方法从新疆株细粒棘球绦虫原头蚴提取总RNA,将其反转录成c DNA后扩增Eg SBACT基因并将其克隆至原核表达载体p ET30a中,测序鉴定序列并进行生物信息学分析。结果显示,RT-PCR扩增出一长度约650 bp的基因,测序显示其长度为654 bp,序列与Genbank公布的EUB59978.1完全一致,其编码217个氨基酸,预测其等电点为9.28。同源性分析发现,Eg SBACT蛋白序列与中华枝睾吸虫SBACT(Gen Bank:GAA57409.1)同源性最高,达到43%。进化树分析表明,细粒棘球绦虫的SBACT蛋白与吸虫纲的SBACT相聚集,在进化树上处于一枝,而与其他物种亲缘性较远。由此表明,本研究成功克隆出细粒棘球绦虫Eg SBACT基因。