不同棘球蚴抗原诱导树突状细胞表达吲哚胺2,3-双加氧酶的实验研究

目的检测不同的棘球蚴抗原体外诱导树突状细胞(DCs)表达吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)的情况。方法从C57BL/6小鼠股骨中分离出骨髓细胞,用小鼠重组巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)诱导后,获得小鼠骨髓源树突状细胞(BMDCs)。分别用重组抗原B(rAgB,15μg/ml)、小鼠细粒棘球蚴囊液(MHF,5 mg/ml)、γ干扰素(IFN-γ,1 000 U/ml,为阳性对照)和RPMI 1640完全培养液(阴性对照)刺激DCs,于18、24和48 h后收集细胞和细胞上清。采用流式细胞术检测各组DCs的表面标志物CD40、CD80、CD86和I-A/I-E的阳性表达情况,并利用实时荧光定量PCR(FQ-RT-PCR)检测各组的IDO mRNA相对转录水平。利用高效液相色谱法(HPLC)检测各组细胞上清中的色氨酸(Try)浓度。结果流式细胞术检测结果显示,DCs受rAgB和MHF刺激后,其表面标志物CD40、CD80、CD86和I-A/I-E的阳性表达率均降低。刺激24 h后,rAgB组的CD40、CD86和I-A/I-E阳性表达率分别为(22.60±2.69)%、(35.50±4.38)%和(57.30±4.38)%,与MHF组[(38.00±3.54)%、(53.00±3.39)%和(77.10±1.70)%]和阴性对照[(37.95±3.61)%、(19.55±1.06)%和(85.45±1.63)%]的差异均有统计学意义(P<0.05)。FQ-RT-PCR结果显示,刺激18、24和48 h后,rAgB组的IDO mRNA水平[(9.20±0.01)、(29.44±0.02)和(16.48±0.04)]和MHF组的[(9.67±0.02)、(17.52±0.01)和(16.81±0.01)]均高于阴性对照组[(2.46±0.01)、(7.77±0.01)和(10.56±0.01)](P<0.01),rAgB组和MHF组IDO mRNA水平的差异均有统计学意义(P<0.05)。HPLC结果显示,刺激18、24和48 h后,rAgB组DCs上清中的色氨酸浓度[(23.65±0.64)、(13.95±1.06)和(19.05±0.64)μmol/L]均较其他3组低,刺激24 h后的色氨酸浓度与阴性对照组(22.90±0.14)和MHF组(20.65±0.35)的差异均有统计学意义(P<0.05)。结论在体外实验条件下,rAgB、MHF均可上调DCs表面IDO的表达,作用24 h后,rAgB上调IDO的能力强于MHF。

新疆维吾尔自治区部分包虫病流行地区患者药物治疗现状调查

目的调查新疆维吾尔自治区（新疆）部分包虫病流行地区患者药物治疗情况。方法2013年4—6月通过问卷形式对新疆4个包虫病医疗点（新疆医科大学第一附属医院、布克塞尔蒙古自治县、额敏县和裕民县）进行包虫病规范化药物治疗现况调查，以WHO包虫病药物治疗建议作为规范化治疗标准。结果共调查329例包虫病患者，其中行抗包虫药物治疗250例，规范化药物治疗占49．2％（162／329）；未规范化药物治疗病例50．8％（167／329）。结论新疆部分包虫病地区患者临床药物治疗亟待规范，其综合陛防治应包括规范化诊断、手术、药物治疗以及随访的个体治疗。

肝囊型包虫病小鼠动物模型的优化

目的通过接种方式及小鼠品系的优化,建立细粒棘球蚴小鼠模型。方法 10周龄的昆明白小鼠和C57BL/6J小鼠各32只,分为4组,每组8只,分别给予人源细粒棘球蚴原头节悬液(2 000个/ml)0.1 ml直视下注射肝脏,腹腔接种人源细粒棘球蚴囊泡,腹腔注射无菌PBS溶液,并同时采用注射肝脏和腹腔接种囊泡等4种方式感染各组小鼠,通过腹部观察和病理检查分析肝脏包囊的生长情况、直径及其数量。结果双重感染180 d后,C57BL/6J小鼠的肝脏感染率达到37.50%,而对照组昆明白小鼠未见腹腔包囊和肝脏病灶,两组之间差异具有统计学意义(t=6.67,P<0.05)。结论利用双重感染方式(原头节直视下注射肝脏和囊泡腹腔接种)感染C57BL/6J小鼠,可用于建立肝囊型包虫病动物模型,为研究肝囊型包虫病的致病机制奠定基础。

细粒棘球绦虫DNA聚合酶δ小亚基EgPolD2基因的克隆及序列分析

目的从新疆株细粒棘球绦虫原头蚴中克隆DNA聚合酶δ小亚基EgPolD2,进行序列测定和生物信息学分析。方法设计EgPolD2特异性引物,用RT-PCR方法从细粒棘球绦虫原头蚴cDNA中克隆EgPolD2基因,然后将其克隆至pMD18-T载体,测序并进行生物信息学分析,半定量反转录PCR分析其在细粒棘球绦虫原头蚴和囊泡中的表达情况。结果 EgPolD2基因开放阅读框为1 218bp,编码405个氨基酸,等电点为4.74。NCBI保守功能区分析软件预测EgPolD2蛋白第113～378个氨基酸为MPP_PolD2_C结构域。登陆GenBank进行Blast比对,EgPolD2与曼氏血吸虫SmPolD2基因同源性为32.1%,与线虫和人等其他物种PolD2基因同源性在18.3%～22.8%之间。进化树分析表明EgPolD2与SmPolD2相聚集,与其他物种同源性较低。半定量RT-PCR显示,EgPolD2在细粒棘球绦虫原头蚴和囊泡中均有表达,且表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论本实验成功克隆出细粒棘球绦虫EgPolD2新基因,为进一步研究抗细粒棘球绦虫药物靶标奠定了基础。