电融合条件对新疆盘羊(Ovis ammon)和转基因(GFP)萨能奶山羊核移植胚胎发育的影响

以新疆野生盘羊(Ovis ammon)和萨能奶山羊转基因(GFP)成纤维细胞为核供体细胞,分别以绵羊卵母细胞和普通山羊卵母细胞为受体细胞进行了核移植,对不同种类核移植重构卵进行电融合处理,发现盘羊重构卵电融合参数为1.4 kV/cm、20μs/次、间隔1 s时的重构卵融合率最高;对于转基因(GFP)萨能奶山羊重构卵的处理,电融合前先放入融合液中于38.5℃下平衡5 min,融合时电融合参数为1.5 kV/cm、20μs/次、间隔1 s时的融合率最高。实验中发现将融合后的两种重构胚胎先置入IVM培养液中于38.5℃下平衡4 h,可降低重构胚胎的死亡率,提高发育质量和卵裂率。

不同电融合条件对莎能奶山羊转基因(GFP)核移植胚胎发育的影响

以莎能奶山羊(Saanen dairy goat)转基因(GFP)成纤维细胞为核供体细胞,以普通山羊卵母细胞为受体细胞进行了核移植,试验中对转基因核移植胚胎的电融合条件进行了优化,发现对于莎能奶山羊转基因(GFP)重构胚胎的处理,电融合时方案B(1.5kV/cm、30μs/次、间隔1s)电融合参数最适合用于莎能奶羊的转基因(GFP)核移植胚胎,其重构卵电融合率为89.4%,重构胚分裂率为68.0%。

β-环糊精胆固醇包合物对牛性控精子品质的影响

本试验探讨了添加β-环糊精胆固醇包合物(cholesterol-loadedcy clodextrin,CLC)对牛精子品质的影响。试验以CLC处理与对照组进行比较,测定性控牛冻精的纯度、活率、畸形率和顶体反应(AR)率。结果表明:添加CLC不影响牛精子的分离纯度(P>0.05);CLC性控牛冻精活率极显著高于对照组(P<0.01);405nm分光光度仪测定ACP吸光度值,因获能液不同而有所不同,随着孵育时间的延长,对照组和CLC组的ACP吸光度值均显示增加,孵育45min后CLC组开始极显著降低(P<0.01)。结果证实,CLC可提高牛精子膜的稳定性,可用于性控牛精子的冷冻保存。

关于影响性控精子体外受精的因素及应用前景展望

本文对牛分离精子体外受精研究进展、影响分离精子体外受精的因素及其体外受精可行性问题进行了综述,并对分离精子体外受精技术的应用前景提出了展望。

重构胚移植用受体山羊同期发情处理效果比较

本实验分别用两种CIDR+PMSG(处理1)和CIDR+PMSG+LH(处理2)方法对山羊进行同期发情处理。结果发现,两种处理均以撤栓后第1d发情率最高。撤栓后0～24h和24～48h发情率,两种处理(61.4%,13.6%;48%,20%)之间差异不显著;撤栓后48～72h发情率,处理1(4.5%)显著低于处理2(24%)(P<0.05);撤栓后0～72h发情率,两种处理(79.5%,92%)无差异(P>0.05)。手术后卵巢观察可以看出,有大卵泡或排卵的发情羊,处理1为91.2%,处理2为100%,二者无显著差异;排卵的发情羊,处理1(58.8%)显著低于处理2(91.2%)(P<0.05)。

牛性控精子体外受精相关性问题

对牛分离精子体外受精研究进展、影响分离精子体外受精的因素及其体外受精可行性问题作了详尽的论述,并对分离精子体外受精技术的应用前景进行了展望。

受体山羊同期发情处理效果的比较

实验分别采用CIDR+PMSG和CIDR+PMSG+LH两种方法对山羊进行同期发情处理.结果表明,两种处理均以撤栓后第1天发情率最高.撤栓后0～24小时和24～48小时,两种处理母羊的发情率分别为61.4%、13.6%、48%和20%,无明显差异(P＜0.05).撤栓后48～72小时发情率,处理1组(4.5%)显著低于处理2组(24%).撤栓后0～72小时,两种处理母羊的发情率分别为79.5%和92%.手术后卵巢观察结果,有大卵泡或排卵的母羊,处理1组为91.2%,处理2组为100%,二者无显著差异;排卵的母羊,处理1组(58.8%)显著低于处理2组(91.2%)(P＜0.05).

不同冷冻方法对牛卵母细胞及孤雌胚发育的影响

研究了麦管和OPS管法冷冻以及OPS法中保护剂种类对牛卵母细胞体外成熟及孤雌胚发育的影响。结果发现,OPS管冷冻牛卵母细胞形态正常率、卵裂率、囊胚率极显著高于麦管法(P<0.05)。在OPS法中,应用两种保护剂冷冻后,卵母细胞形态正常率、卵裂率、囊胚率差异极显著(P<0.01);采取38℃与25℃温度平衡,冷冻后卵母细胞各发育指标差异不显著(P>0.05);采用4℃平衡,冷冻后的卵母细胞激活后没有出现囊胚,各发育指标极显著降低(P<0.01)。结果表明,OPS法可以有效地保护卵母细胞,保证其后孤雌激活;采用低温平衡会对孤雌发育的囊胚阶段有较大影响。

牛乳铁蛋白多肽的合成及抗菌活性试验

用化学合成法合成了以酵母偏爱密码子编码的抗菌肽LfcinB基因片段。合成片段与酵母表达载体pPICZαA重组,构建胞外分泌表达载体pPICZαA-LfcinB,通过限制性内切酶SacⅠ酶切线性化,电击法转化毕赤酵母X-33宿主菌,Zeocin抗性筛选,经PCR检测LfcinB基因与毕赤酵母染色体稳定整合。阳性克隆经甲醇诱导表达LfcinB,诱导表达6 d,每24 h取上清1 mL,进行抑菌试验。结果表明,抗菌肽牛乳铁多肽基因已整合到酵母细胞基因组中并获得表达,经0.5%甲醇在30℃诱导48 h可产生较高抗菌活性的抗菌肽,表达产物具有较强杀菌作用。

电融合条件对盘羊、北山羊异种核移植胚胎发育的影响

本试验通过对异种核移植后电融合的参数进行比较,发现盘羊的皮肤纤维细胞可以和绵羊的卵母细胞融合,北山羊的皮肤纤维细胞可以和山羊的卵母细胞融合;对盘羊细胞电融合强度为1.4 kV/cm、20μs/次的融合率要较1.3 kV/cm、20μs/次高,并且降低融合后重构胚死亡率,显著提高重构胚的分裂率;对北山羊的细胞电融合强度为1.5 kV/cm、20μs/次的融合率要较1.4 kV/cm3、0μs/次和1.6 kV/cm、20μs/次高;融合后的重构胚胎能够正常分裂,并在子宫中着床发育。

乳铁蛋白及乳铁蛋白肽的基因工程研究进展

近年来,随着对乳铁蛋白和乳铁蛋白肽作用机制和空间结构的研究趋于成熟,国内外研究者逐渐将研究重点倾向于乳铁蛋白和乳铁蛋白肽的开发应用。主要介绍了乳铁蛋白和乳铁蛋白肽基因工程的研究进展,尤其是对原核表达系统和真核表达系统进行了综述。

不同级别绵羊卵母细胞在春季体外培养条件下的成熟率比较

为了对在春季屠宰场所采绵羊卵母细胞的分布及不同分布的成熟率有明确的认识 ,2 0 0 3年 3月至 4月共进行15次试验 ,收集卵母细胞 14 85枚。按卵母细胞外层所含卵丘细胞及完整程度分成A ,B ,C ,D ,E 5个级别。A级 :卵丘细胞层完整且紧密 ,一般为 4层以上 ;B级 :卵丘细胞层完整 ,一般为 1～ 3层 ;C级 :有卵丘细胞包被 ,但不完全 ;D级 :裸卵 ,但细胞质均匀 ,细胞形态完好 ;E级 :退化裸卵 ,胞质不均匀 ,细胞形态消失。选择A ,B ,C ,D级卵母细胞单独进行体外成熟培养 ,培养液为TCM 199+5 %FCS +5 μg/mLLH +5 μg/mLFSH +1μg/mLβ estradiol+2 % penstrep ,培养条件为 5 %CO2 ,38.5℃ ,饱和湿度。结果显示 :A ,B ,C ,D级的分布分别为 19.8%、2 8.1%、19.6 %和 32 .4 % ,成熟率分别为81.3%、6 5 .3%、6 1.5 %和 17.0 %。总体成熟率为 5 2 .1% ,卵丘—卵母细胞复合体 (COCs)的成熟率为 6 8.9%。

乳铁蛋白及乳铁蛋白肽的基因工程研究进展

近年来，随着对乳铁蛋白（LF）和乳铁蛋白肽（Lfcin）作用机制和空间结构的研究已趋成熟，国内外研究者逐渐将研究重点倾向LF及Lfcin的开发应用。本文主要介绍LF及Lfcin基因工程的研究进展，尤其是对原核表达系统和真核表达系统，进行了简要综述。