鼠抗人间变性淋巴瘤激酶单抗及其试剂盒的制备及鉴定

目的制备并鉴定鼠抗人间变性淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase,ALK)单抗及其试剂盒。方法以人ALK重组蛋白免疫BALB/c小鼠,常规杂交瘤技术制备人ALK单抗,ELISA及免疫细胞化学(immunocytochemical,ICC)法筛选稳定分泌ALK单抗的杂交瘤细胞株;SDS-PAGE检测单抗纯度;蛋白定量测试检测单抗浓度;ELISA方法检测单抗效价、亲和力;单抗亚类检测试剂盒鉴定单抗亚型;Western blot及免疫组织化学(immunohistochemical,IHC)法鉴定单抗的特异性。IHC方法筛选ALK单抗检测试剂盒配套的相关试剂,应用制备的ALK单抗试剂盒及抗ALK(D5F3)兔单抗试剂(IHC法)分别检测1 162份临床样本。结果共筛选出3株稳定分泌ALK单抗的杂交瘤细胞株,其中细胞株1A4在IHC检测非小细胞肺癌(non small cell lung cancer,NSCLC)中ALK蛋白时表现强阳性。单抗1A4的浓度、效价及亲和常数分别为6.791 mg/mL、1∶51 200和2.75×109 L/moL,抗体亚型为IgG2b。在不同肺癌细胞系及过表达ALK和其他基因的细胞裂解液中,单抗1A4仅识别ALK蛋白,在多种NSCLC病理组织样本中可鉴定出ALK阳性的NSCLC,特异性高。选择EDTA修复液(pH 9.0)、DAB染色液(增强聚合物法)及中杉金桥生物科技有限公司的抗体稀释液作为试剂盒配套试剂。1 162份临床样本经ALK单抗试剂盒与抗ALK(D5F3)兔单抗试剂(IHC法)检测的ALK阳性及阴性结果一致性良好。结论成功制备了特异性强的鼠抗人ALK单抗(1A4),该ALK单抗试剂盒与抗ALK(D5F3)兔单抗试剂(IHC法)检测结果一致性良好,可用于NSCLC中ALK蛋白的检测。