重组乳酸克鲁维酵母产磷脂酶A_2发酵条件的优化

利用重组乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)GG799表达磷脂酶A2,对其产酶发酵条件进行研究。采用单因素试验和正交试验对培养基及培养条件进行优化,确定了重组菌产酶的最佳发酵条件。结果表明:最优培养基组成为葡萄糖30 g/l、酵母粉20 g/l、蛋白胨30 g/l、Kh2PO4 3 g/l;最优培养条件为:发酵温度30℃、接种量2%(V/V)、初始pH 7.0、装液量90 ml/250 ml三角瓶、摇床转速220 r/min,在此条件下发酵培养,酶活力由(1.87±0.12)U提高到(5.35±0.27)U。

复合重组磷脂酶用于大豆油脱胶的工艺优化

利用实验室前期构建的重组大肠杆菌所产磷脂酶A_1(phospholipase A_1,PLA_1)和磷脂酶C (phospholipase C,PLC)进行大豆油酶法脱胶研究,探讨自主开发重组酶进行酶法脱胶的可行性。以诺维信商品酶Lecitase Ultra^(TM)为对照,研究酶法脱胶反应温度、反应pH值、反应时间、搅拌速率、复合磷脂酶添加量工艺参数对大豆油脱胶的影响,并采用正交试验对脱胶工艺条件进行优化。研究结果表明,大豆油复合酶法脱胶的最佳工艺参数为:反应温度45℃、反应pH 6.5、反应时间3 h、搅拌速率300 r/min、PLA_1和PLC添加量分别为7 940 U/kg和23 130 U/kg。复合磷脂酶对大豆油脱胶的效果与诺维信商品酶Lecitase Ultra^(TM)基本一致,大豆油磷含量可降至5 mg/kg以下,能够满足物理精炼的要求,为进一步开发具有知识产权的食品级油脂脱胶用酶制剂产品提供了理论依据。

脂肪酶催化大豆卵磷脂和亚油酸酯交换反应的研究

采用Lipozyme TL IM酶催化大豆卵磷脂(90%)和亚油酸(95%)进行酯交换反应,以制备富含亚油酸的卵磷脂。探讨了大豆卵磷脂质量浓度(甲苯为溶剂)、底物摩尔比(n(亚油酸)∶n(大豆卵磷脂))、酶添加量(以底物总质量为基准)、水分添加量(以酶质量为基准)、反应时间、反应温度对酯交换反应的影响。优化后的反应条件为:大豆卵磷脂质量浓度0.25 g/mL,底物摩尔比6∶1,酶添加量20%,水分添加量3%,反应时间60 h,反应温度65℃。在最优反应条件下最终获得82.85%亚油酸含量的卵磷脂产品。

脂肪酶催化棕榈酸和大豆磷脂的酸解反应研究

以大豆磷脂为原料,LipozymeTLIM为酶试剂,正己烷为溶剂,棕榈酸为酰基供体,对大豆磷脂和棕榈酸进行酶法酸解研究。通过实验得出较优的反应条件:液料比(正己烷/磷脂)5∶1,底物摩尔比(棕榈酸/磷脂)5∶1,加酶量(以底物总量为准)20%,反应温度65℃,反应时间60h,水分添加量(以酶量为准)2%,该条件下验证得磷脂中棕榈酸的含量可达到34.45%。

辣椒酱防腐剂的研制

针对辣椒酱开盖后在食用期间容易起霉、变坏的问题进行了研究,并从中分离出了三株细菌、三株霉菌,针对这些微生物进行了有效的抑菌实验,并开发出了相应的防腐剂,添加了0.05%防腐剂的辣椒酱在开盖后室温下放置了25d才开始发霉。

氧化铝吸附醇溶性磷脂中磷脂酰乙醇胺的热力学研究

研究了氧化铝吸附醇溶性磷脂中磷脂酰乙醇胺的热力学行为,结果表明,三氧化二铝对磷脂酰乙醇胺的吸附符合Langmuir方程;三氧化二铝对磷脂酰乙醇胺的吸附为放热吸附,低温有利于吸附;三氧化二铝对磷脂酰乙醇胺的吸附为物理吸附过程,以上研究对磷脂单体的制备具有指导意义。

蜡样芽胞杆菌磷脂酶C在乳酸克鲁维酵母中重组表达、纯化及酶学性质分析

【目的】构建蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)磷脂酶C(Phospholipase C,PLC)的重组乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)菌株、纯化重组蛋白并对其进行酶学性质分析。【方法】以B.cereus基因组DNA为模板,PCR扩增得到磷脂酶C基因(bcplc),构建重组乳酸克鲁维酵母表达质粒并转化到乳酸克鲁维酵母中,实现bcplc基因的表达。利用镍柱亲和层析纯化和脱盐柱得到电泳纯的重组磷脂酶C(rbcPLC)。【结果】成功构建产磷脂酶C的重组乳酸克鲁维酵母并纯化了重组磷脂酶C,纯化后rbcPLC经SDS-PAGE分析在40 kDa附近出现显性条带。NPPC法测得rbcPLC酶活为19251 U/mg,最适反应温度为80°C,最适pH为9.0。在低于40°C时,pH 7.0-8.0时,rbcPLC重组酶较稳定。Cu^(2+)和Co^(2+)对其有明显的抑制作用;Zn^(2+)、Mn^(2+)、Ca^(2+)、Mg^(2+)对其有明显的促进作用。【结论】首次实现了对蜡样芽胞杆菌来源的磷脂酶C在乳酸克鲁维酵母中的重组表达、纯化及其酶学性质分析,为其它食品安全性微生物来源的磷脂酶C的研究提供了借鉴意义。