西索米星生产菌株的诱变选育及工艺优化

利用原生质体常压室温等离子体(ARTP)诱变方法选育西索米星高产菌株,经诱变筛选获得一株高产菌株I4-10,其西索米星的生物效价达到1389 U/mL,较原始菌株提高了35.4%。通过对高产菌株I4-10进行碳源、氮源优化,确定可溶性淀粉和牛肉粉是突变菌株I4-10的最适碳源和氮源。进一步采用响应面实验设计方法优化发酵培养基,结果表明黄豆饼粉和DL-蛋氨酸的添加量为显著影响因素,经优化其最适添加质量浓度分别为32.78 g/L和1.75 g/L。在此最适工艺下,西索米星的生物效价提高至1849 U/mL,较原始菌株提高了80%。最后对原始菌及高产突变株中西索米星代谢途径及菌株生长相关的关键酶进行转录水平比较分析,初步解析了突变菌株I4-10高产西索米星的机制。

产谷胱甘肽毕赤酵母工程菌的构建及能量调控

谷胱甘肽(glutathione,GSH)是生物体内重要非编码且含有巯基的三肽类物质,具有调节和保护等功能,在医药、食品等领域有着广泛的应用。目前,工业上主要通过高密度发酵生产GSH,ATP的供应往往成为GSH生产的限制因素。该文以毕赤酵母GS115为出发菌株,整合串联表达来源于酿酒酵母的Scgsh1和Scgsh2基因,在添加氨基酸前体的条件下,GSH质量浓度可达(302.27±5.06)mg/L,较改造前提高2.88倍。之后优化了柠檬酸钠的添加条件,摇瓶水平最高可达(371.12±8.47)mg/L。最后对工程菌的上罐发酵,通过控制乙醇质量浓度优化葡萄糖的补料速率,实现两阶段高效合成GSH,菌体生物量OD 600最高可达257,发酵68 h时GSH产量最高可达2000 mg/L。该研究为GSH的工业化生产提供了策略参考。

大肠杆菌表达腺苷蛋氨酸合酶及产酶条件优化

腺苷蛋氨酸(adenosymethionine,SAM)是人体中重要的代谢中间体,在医疗上被广泛应用于治疗肝炎,抑郁症以及关节炎等疾病。酶法进行腺苷蛋氨酸的生产具有良好的工业前景。将来源于酿酒酵母BY4741中的腺苷蛋氨酸合酶基因(sam2)进行密码子优化后,与p ET-28a(+)和p ET-3b(+)进行连接获得重组质粒p ET-28a(+)-sam2和p ET-3b(+)-sam2,分别实现其在E. coli BL21(DE3)和E. coli Rosetta(DE3)中的异源表达,结果表明,重组菌E. coli BL21/p ET-28a(+)-sam2的SAM酶活较高,达到0. 184 U/m L。对该重组菌株进行发酵条件优化,在最优条件下,SAM合酶最高酶活为0. 245 U/m L,比优化前提高34%。

玛咖松花粉合剂抗疲劳作用的研究

目的研究玛咖松花粉合剂对小鼠抗运动性疲劳的作用。方法采用四批雄性Balb/c小鼠,每批50只,按照体重分为5个实验组,分别给予生理盐水(15mL/(kg·d))、玛咖松花粉合剂0.5g/(kg·d)、1.0g/(kg·d)、2.5g/(kg·d),红牛饮料(15mL/(kg·d)),连续灌胃30d后分别测定各组小鼠游泳时间、尿素氮、肝糖原、血乳酸、谷草转氨酶和谷丙转氨酶含量。结果玛咖松花粉合剂能显著延长小鼠游泳时间(P<0.05),降低运动后小鼠血尿素氮含量,增加肝糖原含量(P<0.05),快速降低血乳酸(P<0.05),且谷草转氨酶和谷丙转氨酶含量与阴性对照组无明显差异(P>0.05)。结论玛咖松花粉合剂具有抗小鼠运动性疲劳的作用。它是通过提高运动耐力,增加肝糖原储备,加速乳酸的清除来抗运动性疲劳的,同时玛咖松花粉合剂对小鼠肝功能均无影响。

HPLC法测定硫酸奈替米星的含量

目的:根据美国药典的HPLC(High Performance Liquid Chromatography)法进行硫酸奈替米星含量的测定并进行方法验证。方法:采用高效液相色谱法,色谱柱选用DionexC18(250×4.6mm5μ),以0.5%稀磷酸(每毫升含有20.22g庚烷磺酸钠):乙腈(62:38)为流动相,流速为1.0ml/min,检测波长为205nm。结果:硫酸奈替米星在0.20052mg/mL～2.0052mg/mL范围内线性关系良好,r=0.9998;平均回收率为99.87%,检测限为0.005ng。结论:本方法简便、快速、准确、重复性好,可用于控制硫酸奈替米星的质量。

新医改背景下江苏医药产业发展战略研究

文章分析了江苏省医药产业的发展现状和竞争态势,探讨了新医改背景下建设医药大省、强省的战略。

HPLC法测定氟罗沙星含量的稳定性研究

采用高效液相色谱法，色谱柱选用C18（250×4．6mm5μ），以三乙胺磷酸溶液（取三乙胺5ml和磷酸7ml，加水至1000ml）-乙腈（87：13）为流动相，流速为1．0ml／min，检测波长为286nm。结果表明：当流动相的pH为4．6时，氟罗沙星的主峰不受相邻杂质影响，含量稳定。氟罗沙星在0．010013～O．10013mg／ml范围内线性关系良好，R=0．9999；平均回收率为99.32％；检测限为0．002ng。pH改变后，氟罗沙星含量测定时排除了相邻杂质峰对主峰的干挠，主峰面积稳定，专属性好。

戴明环原理在重塑企业精神中的应用

塑造"具有行业特色、联系企业实际、体现群体意识、彰显社会责任"的企业精神,是企业发展、变化的要求。文章介绍福祈公司通过"计划、执行、检查、处理"循环,从分析现状入手,提出要求,制定计划,落实措施,发动员工重塑企业精神的具体过程,对有效培育企业精神进行了探索。

谷胱甘肽双功能合成酶分子改造及全细胞催化

目的:对嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)来源的谷胱甘肽双功能合成酶(glutathione bifunctional synthetase,GshF)在大肠杆菌(Escherichia coli)进行表达,对GshFst进行定点突变,得到酶活和稳定性有所提高的突变株,并对突变株全细胞催化条件进行优化。方法:选择6种不同的表达载体表达,获得最优表达载体后利用单因素试验进行诱导条件的优化,在此基础上,利用AlphaFold2对GshFst进行建模和分子对接,通过预测得到突变位点,经单点突变及组合突变,获得优势突变体,并对催化条件进行优化。结果:GshF在大肠杆菌中成功表达,获得了突变体GshFstL136K/V498C,其比酶活为12.03 U/mg,较野生型提高了86.80%,在37℃的半衰期为134.24 min,较野生型提高了40.95%。以GshFstL136K/V498C为出发菌株,采用单因素试验对全细胞催化条件优化,得到的最佳催化条件是:生物量OD600=30,反应温度40℃,反应pH 9.0,缓冲液Tris-HCl 50 mmol/L、L-谷氨酸40 mmol/L,L-半胱氨酸25 mmol/L,甘氨酸40 mmol/L,ATP 25 mmol/L,催化3 h后,GSH浓度可以达到24.17 mmol/L,底物L-半胱氨酸的转化率约为96.68%。结论:筛选到了适合GshFst的表达载体及诱导表达条件,对GshFst进行半理性改造提高了其催化活性和稳定性,通过优化获得了全细胞催化合成GSH的工艺。

颗粒活性炭深度处理抗生素废水

通过静态吸附实验,比较了13种不同材质、粒径的颗粒活性炭(granular activated carbon,GAC)对抗生素废水生化出水的吸附效果,选择KC16活性炭作为处理该废水的活性炭。KC16活性炭的进一步静态实验结果表明,当KC16活性炭投加量为30 g/L,吸附时间为6 h时,处理效果较好,TOC、COD、UV254、色度的去除率分别达到了86.99%、88.43%、89.69%和94.08%,并且污染物质(COD、TOC)的吸附符合Langmuir吸附等温式,吸附动力学符合准二级吸附动力学模型(R2>0.99)。动态吸附结果表明,在滤速为1.0 m/h,柱高为1 200 mm时,出水可以达到GB21903-2008《发酵类工业废水污染物排放标准》,处理每吨抗生素废水的活性炭用量为2.45 kg。

板式MBR处理螺旋霉素废水的膜组件性能比较

采用MBR处理螺旋霉素废水,通过120 d的试验比较了两种平板膜组件的性能。在试验前期(0～80 d)平板膜Ⅱ的通量和膜比通量均高于平板膜Ⅰ;在后期(81～120 d)膜Ⅱ发生了不可逆污染,膜通量和膜比通量均低于膜Ⅰ,且不稳定。平板膜Ⅰ对COD、蛋白质和多糖的平均截留率分别为30.50%、14.03%和39.51%,膜Ⅱ的平均截留率分别为29.81%、11.12%和37.36%,二者对有机物的去除效果无显著差异(p=0.05);并且这两种平板膜出水中的有机物表观分子质量分布及浊度亦无显著区别。对化学清洗后溶液成分的分析结果显示,两种平板膜均以有机污染为主。综合考虑技术和经济因素,平板膜Ⅰ更适合于螺旋霉素废水的处理。