Lupeol及其衍生/修饰物H2抗肝细胞肝癌作用及其机制的初步研究

目的:探讨lupeol及其结构改造后衍生/修饰物H2抗肝细胞肝癌作用及机制。方法:对lupeol进行化学结构修饰,然后应用MTT方法检测lupeol及其衍生/修饰物H2对HepG2和SMMC7721细胞增殖的作用,流式细胞术检测lupeol、H2对SMMC7721细胞凋亡的诱导作用,Western blot方法检测cleaved-PARP剪切活化水平。结果:MTT数据显示,H2大大提高了lupeol抗肝细胞肝癌效果。lupeol的IC50为45μmol/L(SMMC7721)和48.5μmol/L(HepG2),H2的IC50为30μmol/L(SMMC7721和HepG2)。流式细胞术结果显示,20μmol/L H2作用后诱导SMMC7721细胞发生凋亡。Western blot结果显示,20μmol/L H2作用后诱导SMMC7721细胞内cleaved-PARP剪切活化增多,而20μmol/L lupeol作用后无此效果。结论:lupeol结构改造后的H2,显著提高了其抗肝细胞肝癌活性。

血清miR-377在原发性肝癌患者并发脉管癌栓中的价值研究

目的探讨血清miR-377在原发性肝癌(PLC)患者并发脉管癌栓中的价值。方法选取2016年11月至2019年11月无锡市第五人民医院收治的50例并发脉管癌栓的PLC患者作为观察组,同时选取未并发脉管癌栓的50例PLC患者作为对照组。比较两组血清miR-377的表达情况、肿瘤直径、肿瘤标志物[甲胎蛋白(AFP)、大分子糖蛋白抗原(CA)242和CA724]、转移侵袭标志物[基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、血管内皮生长因子(VEGF)和胰岛素样生长因子-2(IGF-2)]水平。结果观察组miR-377[(58.23±4.78)vs.(41.48±4.11)]、AFP[(85.69±7.47)vs.(62.76±8.34)]、CA242[(102.69±11.73)vs.(84.07±9.05)]、CA724[(93.21±9.35)vs.(81.47±7.89)]、MMP-2[(122.50±13.09)vs.(53.45±9.89)]、MMP-9[(133.25±11.48)vs.(41.34±10.04)]、VEGF[(175.69±17.55)vs.(132.82±14.26)]、IGF-2[(1293.56±139.44)vs.(1085.03±127.89)]较对照组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,miR-377与肿瘤直径、肿瘤标志物(AFP、CA242、CA724)和转移侵袭标志物(MMP-2、MMP-9、VEGF、IGF-2)水平呈正相关(P<0.05)。结论miR-377与PLC患者并发脉管癌栓的指标密切相关。

Menin通过PI3K/Akt信号通路抑制胃癌AGS细胞的生长

目的 :探讨多发性内分泌腺瘤病1型(multiple endocrine neoplasia type 1,MEN 1)基因编码蛋白menin对人胃癌AGS细胞生长的影响,及其可能的作用机制。方法:将携带有MEN1基因的重组腺病毒Ad-MEN1感染人胃癌AGS细胞,然后采用蛋白质印迹法和免疫荧光法检测Ad-MEN1感染后对AGS细胞中menin表达水平的影响;分别采用MTT和FCM法检测menin过表达对AGS细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响;再用蛋白质印迹法检测磷酸肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,又称Akt)和核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)信号通路相关蛋白及其磷酸化水平的变化。结果:蛋白质印迹法和免疫荧光检测结果显示,menin蛋白在Ad-MEN1感染后的AGS细胞中表达水平明显增加(P<0.05),重组腺病毒Ad-MEN1在AGS细胞中的感染复数为60时,感染效率最佳,细胞增殖受到明显抑制(P<0.05)。DNA合成前期(G0/G1期)细胞所占比例上升,合成期(S期)细胞所占比例下降(P值均<0.05)。然而,menin高表达对AGS细胞的凋亡没有明显的作用(P>0.05)。Menin过表达后,AGS细胞中磷酸化Akt(phospho-Akt,p-Akt)和NF-κB p65的表达明显下调(P值均<0.05)。结论:Menin高表达可以抑制人胃癌AGS细胞的生长,其机制可能与抑制P13K/Akt和NF-κB信号转导通路有关。

腺瘤性结肠息肉病基因甲基化在肝细胞癌分子诊断中的价值

目的:建立甲基化敏感性限制性内切酶-定量PCR(methylation-sensitive restriction enzyme-quantitative PCR,MSRE-qPCR)方法,并应用该方法探讨血浆腺瘤性结肠息肉病(adenomatous polyposis coli,APC)基因甲基化检测在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)诊断中的应用价值。方法:用HhaⅠ消化DNA样品,qPCR技术评估酶切效率,建立优化的MSRE-qPCR方法。用MSRE-qPCR法检测45例肝组织(20例HCC及其相应匹配的非癌组织和5例正常肝组织)中APC甲基化水平;应用亚硫酸氢盐测序PCR(bisulfi te sequencing PCR,BSP)对MSRE-qPCR检测结果进行验证,并与甲基化特异性PCR(methylation-specifi c PCR,MSP)检测方法比较。运用MSRE-qPCR技术检测72例HCC、37例肝良性病变和41例健康志愿者血浆标本的APC甲基化状态。结果:建立的MSRE-qPCR方法可定量检测低至1%的APC甲基化片段。MSRE-qPCR和MSP检测结果均显示,HCC组织中APC基因发生高频率甲基化。MSRE-qPCR检测结果经BSP验证准确无误,且与MSP检测结果具有较好的一致性(Kappa=0.955,P<0.0001)。HCC患者血浆APC甲基化水平高于肝良性病变及健康志愿者(P<0.0001)。血浆APC甲基化分析与血清甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)联合检测可提高HCC诊断效率。结论:MSRE-qPCR可定量检测APC甲基化水平。血浆APC甲基化分析对于HCC的非侵入性诊断具有重要价值。

大鼠肝癌细胞照射后非实质细胞影响肝癌细胞基因的变化

目的探讨照射后微环境对残存的肝癌细胞转移能力影响及分子机制。方法分离大鼠肝脏非实质细胞（NPCs），贴壁后进行照射，然后收集培养上清液与照射过的大鼠肝癌细胞McA-RH7777-6 Gy共培养。经不同培液上清共培养McA-RH7777-6 Gy细胞得到RH 6 Gy（与未照射NPCs上清液共培养）和RH 6 Gy-R（与照射后NPCs上清液共培养）细胞株。采用基因芯片技术检测RH 6 Gy和RH 6 Gy-R细胞中基因的表达。通过生物信息学对显著变化的基因进行分析，并利用DAVID数据库对这些变化的基因进行功能富集分析（GO-analysis）和信号转导通路富集分析（KEGG-analysis，BIOCARTA-analysis）。进行细胞划痕实验，比较RH 6 Gy细胞和RH 6 Gy-R细胞的运动迁移能力。结果基因芯片检测结果显示，RH 6 Gy-R与RH 6 Gy细胞比较，周期蛋白依赖性激酶2（CDK2）、丝裂原活化蛋白激酶9（MAPK9）、细胞周期蛋白（Cyclin） A、Toll/白细胞介素-1受体相关蛋白（TIRAP）、3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1/2（PDK1/2）、磷酸肌醇3激酶（PI3K）等15个肿瘤发生发展相关基因的表达都显著高于未照射上清共培养组，且这些表达差异显著的基因多数富集在肿瘤转移相关通路，如腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）信号通路、磷脂酰肌醇信号通路、Ras信号转导通路等。体外划痕实验显示，细胞划痕培养48 h后，RH 6 Gy细胞面积愈合率为（9.00±1.35）%，RH 6 Gy-R细胞面积愈合率为（41.30±6.32）%。结论经照射后的残存的肝癌表现出更强的转移能力，可能与其微环境中的NPCs相关，我们推测照射后的NPCs释放的某些细胞因子促进了肝癌残存细胞转移相关mRNA的表达，从而激活相关癌转移通路。

酪氨酸蛋白磷酸酶非受体型3在结直肠癌组织中表达下调并受微小RNA-95调控

目的 观察酪氨酸蛋白磷酸酶非受体型3（PTPN3）在结直肠癌（CRC）中的表达,探讨其表达下调的机制.方法 用免疫组织化学方法检测112例CRC组织及其配对组织中的表达,荧光素酶实验分析微小RNA-95（miR-95）对PTPN3的调控作用,定量反转录.聚合酶链反应（RT-PCR）技术及Western blot技术检测PTPN3的表达.结果 PTPN3蛋白在50.9％的CRC组织中（57/112）下调,并与肿瘤TNM分期负相关（r=-0.253,P＜0.01）,PTPN3强表达的患者生存期有缩短的趋势（P＞0.05）.荧光素酶结果显示PTPN3是miR-95的靶基因,在CRC细胞株中过表达miR-95后,PTPN3 mRNA和蛋白表达均下降,而抑制miR-95后PTPN3表达增加.结论 PTPN3表达在CRC组织中下调,可能与肿瘤进展相关;miR-95调控是PTPN3在结直肠中表达下调的关键机制。

KDM2A在Ⅲ期大肠癌中的表达及意义

目的探讨KDM2A蛋白在Ⅲ期大肠癌患者的表达及其意义。方法免疫组化检测87例Ⅲ期大肠癌样本(A组)和20例同期非肿瘤性肠黏膜组织手术标本(B组)中KDM2A的表达。随访(53.4±24.3)个月,分析其与临床病理参数及预后的关系。结果 A组KDM2A表达阳性者40例(46.0%);B组KDM2A表达为阴性(P<0.01)。A组组织学低分化、女性和死亡患者KDM2A阳性表达率高于高中分化、男性和存活患者(P<0.05)。A组KDM2A阳性表达者的5年生存率为47.5%,低于KDM2A阴性者的70.2%(P<0.05)。结论 KDM2A参与大肠癌发生、发展,是一个独立的预后参数。