丙型肝炎病毒截短型核心基因表达载体的构建与表达

目的构建重组丙型肝炎病毒核心基因表达载体pVec-core,并进行原核表达。方法人工合成丙型肝炎病毒截短型核心基因至pUC57载体上,经双酶切后,将其克隆至原核表达质粒pVec中,测序正确后将重组质粒pVec-core转化入表达宿主菌BL21,经IPTG诱导表达核心蛋白,SDS-PAGE检测目的蛋白的表达情况。采用GST亲和层析方法纯化融合蛋白并进行Western印迹法验证。结果丙型肝炎病毒核心基因表达载体构建成功,重组菌表达出相对分子质量约为40.6 kD重组融合蛋白,并以可溶形式存在于菌体中。蛋白经谷胱甘肽琼脂糖凝胶纯化,得到纯度较高的目的蛋白。经Western印迹分析,该蛋白可与HCV患者阳性血清发生特异性结合反应,具有良好的抗原活性。结论核心抗原表达载体在原核表达系统中高效表达,为利用其作为诊断抗原及研究核心蛋白的其他生物学功能奠定了基础。